MYCi975 (NUCC-0200975)

MYC

MYCi975 定位于 MYC protei 的同一区域。将 MYCi975 应用到细胞中会增加 T58 磷酸化和 MYC 降解。在体外激酶测试中，MYCi975还直接上调GSK3b介导的MYC pT58。 [1]

MYCi975上调肿瘤上的PD-L1，增强肿瘤免疫细胞浸润，抑制小鼠体内肿瘤生长，有效提高肿瘤对抗PD1免疫治疗的敏感性[1]。
最初的先导物，MYC抑制剂361（MYCi361），抑制小鼠体内肿瘤生长，增加肿瘤免疫细胞浸润，上调肿瘤上的PD-L1，并使肿瘤对抗PD-1免疫疗法敏感。然而，361显示出狭窄的治疗指数。一种改进的类似物，MYCi975显示出更好的耐受性。这些发现表明了小分子MYC抑制剂作为化学探针和可能的抗癌治疗剂的潜力[1]。

EMSA测定[1]
公司合成了含有双链DNA寡核苷酸的E-盒，其中一条链用六氯荧光素标记用于荧光可视化。寡核苷酸的序列为5-CACCCGGTCACGTGGCCTACAC-3，如先前报道的（Wang等人，2007）。结合反应缓冲液由0.005%IGEPAL CA-630、5%甘油和1xPBS中的1mM EDTA组成。MYC（残基353–439）的浓度，在EMSA测定中称为MYC，MAX（S）和MAX（L）（作为阴性对照）为60nM，在测定中Oligo为20nM。将所有化合物溶解在20或40 mM的DMSO中，并储存在−20℃。为了制备反应混合物，将化合物进一步稀释到反应缓冲液/DMSO6:4中，使其达到最终浓度的10倍；将2μl制备的化合物加入到18μl含有MYC或MAX的反应缓冲液中，并在室温下孵育1小时。在与化合物孵育之前将寡聚物添加到MAX（S）反应混合物中，因为MAX（S）本身不与寡聚物结合。最后将MYC/化合物溶液与MAX（S）/低聚/化合物溶液混合，并使结合反应进行15分钟，然后将20ul样品加载到用8%丙烯酰胺/双丙烯酰胺（80:1）、10%甘油在0.5xTris-borate EDTA（TBE）缓冲液中制备的天然凝胶中。凝胶在恒定电压（80V）下运行45分钟，并用Alexa Fluor 546在Bio-Rad FX分子成像仪（Bio-Rad）上扫描。使用Image J软件对数据进行分析。

PC3 细胞用 6 μM 361 或 8 μM 975 处理 24 小时，一式三份，而 P493-6 细胞用 0.1 mg/ml 四环素或 6 μM 975 处理 24 小时。之后，用 PBS 清洗细胞， RNAeasy Plus 迷你试剂盒用于提取 RNA。

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增殖测定和NCI 60筛选[1]
使用MTS试剂盒CellTiter 96 AQueous One Solution或通过计数活细胞来估计细胞活力。根据细胞类型和实验设置，将1000至5000个细胞/孔接种在96孔板中。对于大鼠成纤维细胞，将HO15.19（1000/孔）和TGR.1（3000/孔）接种在48孔板中。处理后2至7天后，计数活细胞或加入MTS试剂，并使用平板读数器测量490的吸收。NCI-60人肿瘤细胞系的化合物筛选由国家癌症研究所的发展治疗计划进行。使用基因转录水平Z评分分析工具分析NCI-60细胞系的MYC表达水平(https://discover.nci.nih.gov/cellminer/).

6-8 weeks old FVB mice, prostate PDX model (TM00298), NSG mice, C57BL/6, CB17/Icr-Prkdcscid/IcrIcoCrl mice, CD-1
50 mg/kg, 100 mg/kg
IP

[1]. Cancer Cell . 2019 Nov 11;36(5):483-497.e15

[2]. Cancer Sci . 2022 Apr;113(4):1264-1276.

[3]. Oncoimmunology . 2022 Sep 30;11(1):2130583.

Small molecules that directly target MYC and are also well tolerated in vivo will provide invaluable chemical probes and potential anti-cancer therapeutic agents. We developed a series of small-molecule MYC inhibitors that engage MYC inside cells, disrupt MYC/MAX dimers, and impair MYC-driven gene expression. The compounds enhance MYC phosphorylation on threonine-58, consequently increasing proteasome-mediated MYC degradation. [1]

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MYC plays critical roles in tumorigenesis and is considered an attractive cancer therapeutic target. Small molecules that directly target MYC and are well tolerated in vivo represent invaluable anti-cancer therapeutic agents. Here, we aimed to investigate the therapeutic effect of MYC inhibitors in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). The results showed that pharmacological and genetic inhibition of MYC inhibited HNSCC proliferation and migration. MYC inhibitor 975 (MYCi975), inhibited HNSCC growth in both cell line-derived xenograft and syngeneic murine models. MYC inhibition also induced tumor cell-intrinsic immune responses, and promoted CD8+ T cell infiltration. Mechanistically, MYC inhibition increased CD8+ T cell-recruiting chemokines by inducing the DNA damage related cGAS-STING pathway. High expression of MYC combined with a low level of infiltrated CD8+ T cell in HNSCC correlated with poor prognosis. These results suggested the potential of small-molecule MYC inhibitors as anti-cancer therapeutic agents in HNSCC.[3]

C25H16CL2F6N2O2

561.3032

560.05

C, 53.50; H, 2.87; Cl, 12.63; F, 20.31; N, 4.99; O, 5.70

2289691-01-4

2289691-01-4;

139600320

Solid powder

7.7

47.3Ų

1

9

5

37

752

0

VSDFDVBYONIJLD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H16Cl2F6N2O2/c1-35-19(11-21(34-35)25(31,32)33)16-7-9-20(37-12-13-2-5-15(26)6-3-13)22(23(16)36)14-4-8-18(27)17(10-14)24(28,29)30/h2-11,36H,12H2,1H3

3-[(4-chlorophenyl)methoxy]-2-[4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl]-6-[2-methyl-5-(trifluoromethyl)pyrazol-3-yl]phenol

MYCi975; MYCi975; MYCi975; NUCC-0200975; NUCC 0200975; MYCi975; 2289691-01-4; 4'-chloro-6-((4-chlorobenzyl)oxy)-3-(1-methyl-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-5-yl)-3'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-2-ol; NUCC-0200975; 3-[(4-chlorophenyl)methoxy]-2-[4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl]-6-[2-methyl-5-(trifluoromethyl)pyrazol-3-yl]phenol; SCHEMBL21786611; VSDFDVBYONIJLD-UHFFFAOYSA-N; NUCC0200975

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~178.2 mM)
Ethanol: ~60 mg/mL (~106.9 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。