Thapsigargin

别名: thapsigargin; 67526-95-8; MFCD00083511; Z96BQ26RZD; CHEMBL96926; CHEBI:9516; (-)-Thapsigargin; (3S,3aR,4S,6S,6aR,7S,8S,9bS)-6-(acetyloxy)-4-(butanoyloxy)-3,3a-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-8-{[(2Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy}-2-oxo-2,3,3a,4,5,6,6a,7,8,9b-decahydroazuleno[4,5-b]furan-7-yl octanoate; 毒胡萝卜素;毒胡萝卜素, 来源于毒胡萝;内质网应激诱导剂, 微粒体 Ca2+-ATPase 抑制剂;抑制不同类型的病毒 (HCoV-229E、MERS-CoV、COVID-19)的 复制。
目录号: V9143 纯度: = 99.53%
Thapsigargin 是一种新型、有效的肌浆/内质网 Ca2+ ATP 酶 (SERCA) 的非竞争性抑制剂,也是一种内质网 (ER) 应激诱导剂。
Thapsigargin CAS号: 67526-95-8
产品类别: ATPase
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
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纯度/质量控制文件

纯度: = 99.53%

产品描述
Thapsigargin 是一种新型、有效的非竞争性肌浆/内质网 Ca2+ ATP 酶 (SERCA) 抑制剂,也是一种内质网 (ER) 应激诱导剂。它是一种有效的、细胞渗透性的、不依赖于 IP3 的细胞内钙释放剂,其作用是阻断由血管抑制素和内皮抑素诱导的细胞内 Ca2+ 的短暂增加,并通过破坏细胞内游离 Ca2+ 水平来诱导细胞凋亡。
生物活性&实验参考方法
靶点
Ca2+-ATPase
体外研究 (In Vitro)
Thapsigargin(0.001-1 μM;持续 2 天和 4 天)以时间和剂量依赖性方式降低 MH7A 人类风湿性关节炎滑膜细胞的细胞增殖 [2]。毒胡萝卜素(0.001-1 μM;持续 2 天和 4 天)。 Thapsigargin(0.001-1 μM;持续 2 天和 4 天)抑制 mTOR 活性并增加 MH7A 细胞中细胞周期蛋白 D1 的表达 [2]。毒胡萝卜素减少 Ca2+ 进入人中性粒细胞 [1]。在有 (IC50=0.353 nM) 或无 (IC50=0.448 nM) KCl 预刺激的情况下,毒胡萝卜素均可抑制卡巴胆碱诱发的 [Ca2+]i 瞬变,但在没有 KCl 预刺激的情况下则不然。 KCl 预刺激发现了额外的微量成分,导致低分级 (IC50=4814 nM)。相比之下,KCl 诱导的 [Ca2+]i 瞬时变化仅表现出一种成分,在缺乏两种成分平均值 (IC50=3343 nM) 且存在卡巴胆碱预刺激 (IC50 =6858) 的情况下,向毒胡萝卜素的转变非常低纳米)[3]。此外,毒胡萝卜素通过 Ca2+ 的 SOCE 流入磷酸化 p38 MAPK,从而抑制 TNF-α。
体内研究 (In Vivo)
Thapsigargin(注射;0.25 μg/g、0.5 μg/g 和 1 μg/g;24 小时)导致促炎趋化因子的表达增加 2 至 5 倍。毒胡萝卜素引发全身免疫反应的能力更为敏感[4]。
为了评估体内内质网应激,我们在小鼠腹膜间注射thapsigargin (TG) (0.5ug/g/体重)或TUN (1ug/g/体重)。在体内为TUN选择的剂量在其他人使用的剂量的中间范围内,并且根据先前研究的小鼠存活率评估,不会引起细胞毒性作用。不幸的是,在体内选择thapsigargin (TG) 剂量一直很困难,因为thapsigargin (TG) 在体内使用的文献很少。为了继续在小鼠模型中使用thapsigargin (TG) 来评估thapsigargin (TG) 在内质动脉应激诱导中的有效性,我们需要证明我们的TG剂量(0.5ug/g/体)不会影响小鼠的生存。事实上,我们发现使用thapsigargin (TG) 0.5ug/g/体重的剂量是安全的,并且不会对这些小鼠的生存产生任何不良影响(补充图2)。然后,我们通过评估关键ER应激和UPR标记物的表达,检查了TG或TUN处理小鼠肝脏和脂肪组织中ER应激的诱导。[4]
酶活实验
Thapsigargin是微粒体Ca(2+)-ATP酶的抑制剂,是诱导储存调节的Ca2+内流的重要工具。在本文中,我们发现,在高于500 nM的浓度下,thapsigargin也具有相反的作用:它抑制储存调节的Ca2+流入负载Fura-2的人类中性粒细胞。由于thapsigargin经常以高达2微米的浓度使用,因此其对质膜Ca2+通量的抑制作用值得考虑。[1]
[Ca2+]的测量,除非另有说明,否则将106个Fura-2负载的细胞悬浮在3ml Ca2+培养基中。在Deltascan双波长荧光光谱仪中记录荧光的变化,使用340nm和380nm作为激发波长,使用505nm作为发射波长。在37°C下连续搅拌进行测量。[Ca2+],通过[18]中详述的方法,从340和380 nm激发的荧光比率计算得出。Mn2+内流的测量该测量在与[Ca2+1]相同的条件下进行,不同之处在于激发波长为360nm,在该波长下Fura-2的荧光独立于[Ca2+]。通过添加100μM的MnCl2来引发Mn2+内流。
细胞实验
细胞增殖测定 [2]
细胞类型: MH7A 人类风湿性关节炎滑膜细胞
测试浓度: 0.001、0.1 和 1 μM
孵育持续时间: 2 和 4 天
实验结果: 防止细胞增殖。时间和剂量依赖性方式。

细胞凋亡分析[2]
细胞类型: MH7A 人类风湿性关节炎滑膜细胞
测试浓度: 0.001、0.1 和 1 μM
孵育时间:2天和4天
实验结果:以时间和剂量依赖性方式诱导细胞凋亡。

蛋白质印迹分析[2]
细胞类型: MH7A 人类类风湿关节炎滑膜细胞
测试浓度: 0.001、0.1 和 1 μM
孵育持续时间:2天和4天
实验结果:mTOR活性受损并导致细胞周期蛋白D1表达
动物实验
Animal/Disease Models: Male balb/c (Bagg ALBino) mouse (20-25 g) [4]
Doses: 0.25 ug/g, 0.5 ug/g, and 1 ug/g
Route of Administration: Injection; 24 hour
Experimental Results: Increased chemokine and pro-inflammatory expression 2 to 5 times.
Induction of ER stress in vivo[4]
Male Balb/c mice were housed and cared in accordance with the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Tunicamycin and thapsigargin (TG)  were purchased from Sigma and dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and diluted in sterile 150mM dextrose to obtain a concentration of 10μg/μl. Male Balb/c mice (20-25g) were injected intraperitoneally with tunicamycin solution (1μg/g body mass) as described previously. For thapsigargin solution a dose response was conducted using (0.25ug/g, 0.5ug/g and 1ug/g body mass). As controls, mice were injected intraperitoneally with control buffer (150mM dextrose containing 1% DMSO). Adipose and liver tissues were harvested 24hrs post treatment, where as liver tissues utilized for Oil Red O staining was harvested 5 days post treatment with the ER stress inducing agents.
参考文献

[1]. Thapsigargin inhibits Ca2+ entry into human neutrophil granulocytes. Biochem J. 1995 Jan 15;305 ( Pt 2):525-8.

[2]. Effects of thapsigargin on the proliferation and survival of human rheumatoid arthritis synovialcells. ScientificWorldJournal. 2014 Feb 9;2014:605416.

[3]. Differential thapsigargin-sensitivities and interaction of Ca2+ stores in human SH-SY5Y neuroblastoma cells. Brain Res. 2004 Jun 18;1011(2):177-86.

[4]. Modeling Acute ER Stress in Vivo and in Vitro. Shock. 2017 Apr;47(4):506-513.

[5]. Inhibiting coronavirus replication in cultured cells by chemical ER stress. bioRxiv 2020.08.26.266304;.

[6]. Store-operated calcium entry (SOCE) contributes to phosphorylation of p38 MAPK and suppression of TNF-α signalling in the intestinal epithelial cells. Cell Signal. 2019 Nov;63:109358.

其他信息
Thapsigargin is an organic heterotricyclic compound that is a hexa-oxygenated 6,7-guaianolide isolated fron the roots of Thapsia garganica L., Apiaceae. A potent skin irritant, it is used in traditional medicine as a counter-irritant. Thapsigargin inhibits Ca(2+)-transporting ATPase mediated uptake of calcium ions into sarcoplasmic reticulum and is used in experimentation examining the impacts of increasing cytosolic calcium concentrations. It has a role as an EC 3.6.3.8 (Ca(2+)-transporting ATPase) inhibitor and a calcium channel blocker. It is a sesquiterpene lactone, an organic heterotricyclic compound and a butyrate ester.
Thapsigargin has been reported in Thapsia gymnesica, Thapsia garganica, and Thapsia villosa with data available.
A sesquiterpene lactone found in roots of THAPSIA. It inhibits SARCOPLASMIC RETICULUM CALCIUM-TRANSPORTING ATPASES.
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C34H50O12
分子量
650.75
精确质量
650.33
元素分析
C, 62.75; H, 7.74; O, 29.50
CAS号
67526-95-8
PubChem CID
446378
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.2±0.1 g/cm3
沸点
699.6±55.0 °C at 760 mmHg
闪点
209.0±25.0 °C
蒸汽压
0.0±5.0 mmHg at 25°C
折射率
1.540
LogP
6.61
tPSA
171.96
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
12
可旋转键数目(RBC)
17
重原子数目
46
分子复杂度/Complexity
1270
定义原子立体中心数目
8
SMILES
C(C(=O)O[C@H]1[C@]2([H])[C@@](OC(C)=O)(C[C@@H]([C@@]3([C@](C)(O)C(=O)O[C@]3(C2=C(C)[C@@H]1OC(=O)/C(/C)=C\C)[H])O)OC(CCC)=O)C)CCCCCC
InChi Key
IXFPJGBNCFXKPI-FSIHEZPISA-N
InChi Code
InChI=1S/C34H50O12/c1-9-12-13-14-15-17-24(37)43-28-26-25(20(5)27(28)44-30(38)19(4)11-3)29-34(41,33(8,40)31(39)45-29)22(42-23(36)16-10-2)18-32(26,7)46-21(6)35/h11,22,26-29,40-41H,9-10,12-18H2,1-8H3/b19-11-/t22-,26+,27-,28-,29-,32-,33+,34+/m0/s1
化学名
(3S,3aR,4S,6S,6aR,7S,8S,9bS)-6-(acetyloxy)-4-(butyryloxy)-3,3a-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-8-{[(2Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy}-2-oxo-2,3,3a,4,5,6,6a,7,8,9b-decahydroazuleno[4,5-b]furan-7-yl octanoate
别名
thapsigargin; 67526-95-8; MFCD00083511; Z96BQ26RZD; CHEMBL96926; CHEBI:9516; (-)-Thapsigargin; (3S,3aR,4S,6S,6aR,7S,8S,9bS)-6-(acetyloxy)-4-(butanoyloxy)-3,3a-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-8-{[(2Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy}-2-oxo-2,3,3a,4,5,6,6a,7,8,9b-decahydroazuleno[4,5-b]furan-7-yl octanoate;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~76.83 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (7.68 mM) in 10% DMSO + 90% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.5367 mL 7.6834 mL 15.3669 mL
5 mM 0.3073 mL 1.5367 mL 3.0734 mL
10 mM 0.1537 mL 0.7683 mL 1.5367 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT01056029 COMPLETED Drug: G-202 Advanced Solid Tumors GenSpera, Inc. 2010-01 Phase 1
生物数据图片
  • Thapsigargin inhibits MH7A cell proliferation. Histograms showed that the cell proliferation is impaired after thapsigargin treatment (0.001, 0.1, and 1 μM) in MH7A cells, by (SRB) colorimetric assay. Results are averages of three independent experiments.[2]. Wang H, et al. Effects of thapsigargin on the proliferation and survival of human rheumatoid arthritis synovialcells. ScientificWorldJournal. 2014 Feb 9;2014:605416.
  • Thapsigargin induces cell apoptosis in MH7A cells. Hoechst stainings (a) and histograms (b) showing the increased cell death (%) after thapsigargin treatment in MH7A cells. Results are averages of three independent experiments. Data represent mean ± SEM. *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001, and N.S.: not statistically significant.[2]. Wang H, et al. Effects of thapsigargin on the proliferation and survival of human rheumatoid arthritis synovialcells. ScientificWorldJournal. 2014 Feb 9;2014:605416.
  • Thapsigargin inhibits cyclin D1 expression in MH7A cells. ((a)-(b)) Western blots and histograms showing that the cyclin D1 protein levels decreased in MH7A cells by thapsigargin treatment. Results are averages of three independent experiments. Data represent mean ± SEM. **P < 0.01 and ***P < 0.001. (c) Real-time PCR results showing that the cyclin D1 mRNA levels decreased in MH7A cells by thapsigargin treatment. Results are averages of three independent experiments. Data represent mean ± SEM. **P < 0.01 and ***P < 0.001.[2]. Wang H, et al. Effects of thapsigargin on the proliferation and survival of human rheumatoid arthritis synovialcells. ScientificWorldJournal. 2014 Feb 9;2014:605416.
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