HMG-CoA reductase (Ki = 0.2 nM)

辛伐他汀酸（0.1–20 μM；24 小时）可显着减少硫酸吲哚酚处理的 hCM 细胞中 ROS 的产生 8.9% 至 43% [2]。 hCM 和表达 OATP3A1 的 HEK293 细胞中 OATP3A1 的蛋白表达会被辛伐他汀酸（0.1–20 μM；24 小时）改变 [2]。

阿尔茨海默病（AD）是一种神经退行性疾病，其特征是β-淀粉样蛋白斑块和乙酰胆碱消耗导致神经行为缺陷。AD还与TGF-β1/SMAD2和GSK3β/β-catenin通路下调有关。辛伐他汀（SMV）改善记忆功能的实验和临床。因此，本研究旨在探讨SMV对氯化铝（AlCl3）诱导的神经行为损伤的机制作用。AlCl3 （50 mg/kg）诱导AD 6周。小鼠给予辛伐他汀（10、20 mg/kg）或多奈哌齐（3 mg/kg）治疗6周后进行组织病理学、免疫组化和生化检查。SMV治疗可改善AlCl3诱导的记忆衰退，组织病理学改变明显恢复。同时伴有乙酰胆碱酯酶（AChE）和β (a -42)的降低。SMV通过上调β-catenin、TGF-β1蛋白的表达，下调GSK3β、TLR4、p- smad2的表达，发挥神经保护作用https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37454825/

OATP3A1功能测定[2]
采用荧光底物荧光素钠检测转染hCMs、HEK293-NEO（空载体）和hek293 -OATP3A1的细胞中OATP3A1的功能。细胞（500,000个细胞/皿）在100 mm培养皿上生长。荧光素钠是OATP3A1的一般底物（Patik et al., 2015）。将细胞与pH值为7.4和5.5的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水（DPBS）在37°C、5% CO2的气氛中预孵育10分钟，因为有几项研究报告了酸性pH下OATP转运活性的增加（Kobayashi等人，2003年，Nozawa等人，2004年，Varma等人，2011年）。然后用荧光素钠（2 μM）处理细胞30分钟（摄取期）（Wen et al., 2014）。仅hcm在存在或不存在环孢素（疑似转运抑制剂）（10 μM）或辛伐他汀酸 (10 μM)的条件下于37°C、5% CO2气氛下孵育30分钟。用DPBS pH 7.4或5.5洗涤后，收集所有细胞，用0.1 N NaOH裂解，在BioTek Synergy™4 Hybrid micromicroplate Reader上使用Gen5 1.10软件在激发/发射460/515 nm处定量荧光强度。

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[3H]表达OATP3A1细胞的辛伐他汀酸摄取实验[2]
在pH 7.4和pH 5.5、37℃、5% CO2气氛下进行吸收实验。在24孔板培养的HEK293-NEO（空载体）和HEK293-OATP3A1转染细胞（100,000个细胞/孔）的单层培养中，测定了放射性标记的辛伐他汀酸的细胞摄取。培养两天后（Chiba et al., 2013），细胞洗涤一次，在pH 7.4和pH 5.5的DPBS中预孵育10分钟，37°C， 5% CO2气氛。然后通过添加放射性标记的辛伐他汀酸 (0.05 μM)评估DPBS的摄取情况。在指定时间（1、2、5、15、30、45分钟），用冰冷的DPBS替代传输缓冲液，终止摄取。在冷水DPBS中洗涤2次后，细胞在0.1 N NaOH中裂解。细胞中的放射性是通过贝克曼ls6000ic闪烁计数器上的液体闪烁计数来测定的。 为了进行动力学分析，将细胞与未标记的辛伐他汀酸 (0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1 μM)在DPBS中预孵卵30分钟（摄取周期），然后评估放射性标记的辛伐他汀酸 (0.05 μM)的摄取情况。用非线性回归法绘制数据，确定Vmax和Km。

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药物-药物相互作用筛选[2]
在24孔板培养的HEK293-NEO（空载体）和HEK293-OATP3A1转染细胞（100,000个细胞/孔）的单层培养中，测定了放射性标记的辛伐他汀酸的细胞摄取。培养两天后（Chiba et al., 2013），细胞洗涤一次，在pH 7.4或pH 5.5的DPBS环境中预孵育10分钟，37°C， 5% CO2气氛。为了评估竞争抑制的潜力，在DPBS中，细胞在存在或不存在原型底物[苄青霉素（10和100 μM），环孢素（10和100 μM），雌酮-3-硫酸（10和100 μM）和吲哚基硫酸（10和100 μM）]的情况下处理30分钟（摄取期）。然后通过添加放射性标记的辛伐他汀酸 (0.05 μM)评估DPBS的摄取情况。1分钟后，用冰冷的DPBS代替摄取液终止摄取。在冷水DPBS中洗涤2次后，细胞在0.1 N NaOH中裂解。细胞中的放射性是通过贝克曼ls6000ic闪烁计数器上的液体闪烁计数来测定的.

蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： hCM 和 HEK293（转染 OATP3A1）
测试浓度： 0.1、1、10 和 20 μM
孵育持续时间：24 小时
实验结果：hCM 和 OATP3A1 表达以剂量依赖性方式从 1.5% 减少至 90% OATP3A1 表达细胞。

Simvastatin/SMV was dissolved in 0.5% carboxymethylcellulose (CMC), while AlCl3, and DPZ were dissolved in water.
Mice were assigned randomly to five groups (6 mice per group): Group (1); normal untreated group received water daily for 6 weeks, Group (2–5); positive control group received AlCl3 (50 mg/kg/day, p.o.) for 6 weeks (Al-Amin et al., 2019, Li et al., 2018, Singh and Goel, 2015), Group (3−4); mice received SMV (10 or 20 mg/kg/day, p.o.), respectively (Jin et al., 2016), 45 min before AlCl3 (Nampoothiri et al., 2015), Group (5); mice received donepezil (3 mg/kg/day, p.o.) (Shin et al., 2018), 45 min before AlCl3.
After six weeks, mice were tested for the assessment of memory using Barnes Maze test (a test for spatial learning & memory), T Maze Spontaneous Alternation test (a test for spatial memory), and Novel Object Recognition Test (a test for different phases of learning and memory). After the behavior tests, the rodents were anesthetized using I.P. anaesthetic dose of 100 mg/kg ketamine and 10 mg/kg xylazine, then sacrificed by cervical displacement. The brains were removed immediately and cut into halves. Each mouse's right cerebral hemisphere is dissected, fixed with a 10% neutral buffer formalin, and used for histological and immunohistochemical dyeing. Hippocampus extracted from the left cerebral hemisphere was refrigerated and saved at − 80 °C, then used later for biochemical analysis.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37454825/

[1]. HMG-CoA Reductase inhibitors: an updated review of patents of novel compounds and formulations (2011-2015). Expert Opin Ther Pat. 2016 Nov;26(11):1257-1272.

[2]. Characterization of simvastatin acid uptake by organic anion transporting polypeptide 3A1 (OATP3A1) and influence of drug-drug interaction. Toxicol In Vitro. 2017 Dec;45(Pt 1):158-165.

C25H39NAO6

459.571279525757

458.264

C, 65.48; H, 8.57; Na, 5.01; O, 20.93

101314-97-0

Simvastatin acid ammonium;139893-43-9;Simvastatin acid;121009-77-6;Simvastatin acid calcium hydrate;530112-57-3

16760655

White to light brown solid powder

2.771

106.89

2

6

11

32

701

7

CCC(C)(C)C(=O)O[C@H]1C[C@H](C=C2[C@H]1[C@H]([C@H](C=C2)C)CC[C@H](C[C@H](CC(=O)[O-])O)O)C.[Na+]

RLWRROYWKHUVKF-OKDJMAGBSA-M

InChI=1S/C25H40O6.Na/c1-6-25(4,5)24(30)31-21-12-15(2)11-17-8-7-16(3)20(23(17)21)10-9-18(26)13-19(27)14-22(28)29/h7-8,11,15-16,18-21,23,26-27H,6,9-10,12-14H2,1-5H3,(H,28,29)/q+1/p-1/t15-,16-,18+,19+,20-,21-,23-/m0./s1

sodium (3R,5R)-7-((1S,2S,6R,8S,8aR)-8-((2,2-dimethylbutanoyl)oxy)-2,6-dimethyl-1,2,6,7,8,8a-hexahydronaphthalen-1-yl)-3,5-dihydroxyheptanoate

Simvastatin sodium J428.165I Simvastatin, sodium salt; Tenivastatin sodium; simvastatin sodium; Tenivastatin sodium; 101314-97-0; simvastatin sodium; Simvastatin Hydroxy Acid Sodium Salt; Simvastatin, Sodium Salt; 2L6JSY5YGL; J428.165I; CHEMBL487720; Simvastatin Hydroxy Acid Sodium Salt; Simvastatin, Sodium Salt; 2L6JSY5YGL; J428.165I; CHEMBL487720

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。