Amcenestrant (SAR-439859)

ERα(EC50 = 0.2 nM)

SAR439859（化合物 43d）对多种 BC 细胞系和患者来源的异种移植物（包括具有 ERα 突变的细胞）表现出最强的体内抗癌活性 [1]。

在剂量为 25 mg/kg/BID 时，SAR439859（化合物 43d；阀门；2.5–25 mg/kg；每天两次，持续 30 天）显示肿瘤生长显着减少 [1]。在测试的最大动物物种中，3 mg/kg，最小 10 mg/kg) 显示低至中等清除率 (0.03-1.92 L/h?kg)，低至中等分布容积 (Vss=0.5-6.1 L/kg) ，以及良好的跨物种生物利用度（54-76%）。请注意，T1/2 时间因物种而异：例如，小鼠为 1.98 小时，鱼为 4.13 小时，狗为 9.80 小时 [1]。

ERα晶体结构的测定[1]
在BL21（DE3）细胞中诱导ERα配体结合结构域（LBD）突变（氨基酸298-554）Tyr-536-Ser并纯化。然后将纯化的蛋白质在50 mM Tris、pH 8、150 mM NaCl、50 mMβ-巯基乙醇、10%甘油中浓缩至约12 mg/mL。将蛋白质与1 mM的化合物在4°C下孵育过夜。含有化合物的蛋白质在20°C下通过悬滴蒸汽扩散法结晶，蛋白质溶液与22.5%PEG-4000、100 mM pH 6.5的Cacodylate Na和0.2 M MgCl2的储层溶液的比例为1:1，并加入0.2μL的稀释种子溶液。将晶体在甘油中冷冻至母液中。在数据收集之前，晶体在液氮中快速冷冻。衍射数据是在法国萨克雷Beamline Proxima 1的SOLEIL同步加速器设施收集的，并使用程序AutoPROC和STARANISO（全局定相）进行处理。使用内部可用的ER-LBD坐标的分子替换技术和程序PHASER求解结构。使用REFINE（全局相化）（X）对结构进行精制，手动放置配体，并在COOT中进行手动重建。在将坐标和结构因子存入蛋白质数据库之前，使用MOLPROBITY进行了最终验证检查。晶体结构的数据集统计如表8所示。

雌激素受体降解活性[1]
在MCF7 BC细胞系中，通过荧光检测对ER的蛋白质丰度进行了测量。 MCF7细胞（ATCC）以每孔10000个细胞/30μL的浓度接种在384孔微孔板中，该微孔板位于含有5%炭葡聚糖剥离胎牛血清（FBS）的红色无酚MEMα培养基中。第二天，以10点剂量反应将化合物加入细胞中，在2.5μL中以1:3倍的顺序稀释，最终浓度为300至0.15 nM，或氟维司群为0.1μM（用作阳性对照）。在化合物加入后4小时，通过在室温下加入25μL福尔马林（终浓度为5%福尔马林，含0.05%曲顿）15分钟来固定细胞，然后用PBS-1×洗涤两次。然后，将细胞在冷室中与25μL抗ER兔单克隆抗体一起孵育过夜，该抗体在Power Block缓冲液中以1:500稀释。用PBS-1×洗涤孔三次，并在含有山羊抗拉比抗体Alexa 488（1:1000）和Syto-64 DNA染料（终浓度1.5μM）的Power Block缓冲液中在37°C下孵育60分钟。然后在PBS-1×中洗涤细胞三次，并在ACUMEN explorer装置中扫描。测量绿色荧光和红色荧光的积分强度，分别确定ERα和DNA的水平。 降解效力被确定为以纳摩尔为单位实现雌激素受体50%降解的化合物浓度（或IC50）。 ERα水平下降的百分比计算如下：抑制百分比=100*（1-（样品-氟维司群）/（DMSO-氟维司群））。

Animal/Disease Models: Nu/nu mouse MCF7 tumor xenograft model [1]
Doses: 2.5, 5, 12.5, 25 mg/kg
Doses: Oral;. twice (two times) daily for 30 days
Experimental Results: Demonstrated significant tumor growth inhibition and demonstrated tumor regression at a dose of 25 mg/kg/BID.

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Animal/Disease Models: Mice, rats and dogs [1]
Doses: 3 mg/kg (iv) and 10 mg/kg (oral) (pharmacokinetic/PK/PK analysis)
Route of Administration: intravenous (iv) (iv)or oral
Experimental Results: In three Shows low to moderate clearance among animal species tested (0.03-1.92 L/h·kg), low to moderate volume of distribution (Vss=0.5-6.1 L/kg), and good bioavailability across species degree (54-76%).

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MCF-7 Xenograft Studies[1]
0.72 mg of 17-β estradiol pellets (90 days release) was subcutaneously implanted into nu/nu mice 2 days prior to MCF7 cell implantation. MCF7 cells were grown in Eagle’s minimum essential medium supplemented with 10% FBS and 0.01 mg/mL human insulin in 5% CO2 at 37 °C. The cells were harvested and resuspended in DPBS with 50% matrigel and subcutaneously implanted into the right flank of female nude mice. The tumor volume (length × width2/2) was monitored biweekly. When tumors reached an average volume of 200 mm3, animals were randomized and treatment was started. Animals were treated with the vehicle or the 43d compound twice daily. The tumor volume and body weight were monitored biweekly throughout the study.

[1]. Discovery of 6-(2,4-Dichlorophenyl)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropyl)pyrrolidin-3-yl]oxyphenyl]-8,9-dihydro-7H-benzo[7]annulene-2-carboxylic acid (SAR439859), a Potent and Selective Estrogen Receptor Degrader (SERD) for the Treatment of Estrogen-Receptor-Positive Breast Cancer. J Med Chem. 2019 Nov 27.

[2]. Abstract 943: SAR439859, an orally bioavailable selective estrogen receptor degrader (SERD) that demonstrates robust antitumor efficacy and limited cross-resistance in ER+ breast cancer.

Amcenestrant is an orally available, nonsteroidal selective estrogen receptor degrader/downregulator (SERD), with potential antineoplastic activity. Upon oral administration, amcenestrant specifically targets and binds to the estrogen receptor (ER) and induces a conformational change that promotes ER degradation. This prevents ER-mediated signaling and inhibits both the growth and survival of ER-expressing cancer cells.

C₃₁H₃₀CL₂FNO₃

554.48

553.16

C, 67.15; H, 5.45; Cl, 12.79; F, 3.43; N, 2.53; O, 8.66

2114339-57-8

130232326

White to off-white solid powder

1.297±0.06 g/cm3(Predicted)

676.7±55.0 °C(Predicted)

5.3

49.8Ų

1

5

8

38

832

1

ClC1C([H])=C(C([H])=C([H])C=1C1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C2C([H])=C(C(=O)O[H])C([H])=C([H])C=2C=1C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])O[C@@]1([H])C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])F)C1([H])[H])Cl

KISZAGQTIXIVAR-VWLOTQADSA-N

InChI=1S/C31H30Cl2FNO3/c32-23-8-12-27(29(33)18-23)28-4-1-3-21-17-22(31(36)37)7-11-26(21)30(28)20-5-9-24(10-6-20)38-25-13-16-35(19-25)15-2-14-34/h5-12,17-18,25H,1-4,13-16,19H2,(H,36,37)/t25-/m0/s1

6-(2,4-dichlorophenyl)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropyl)pyrrolidin-3-yl]oxyphenyl]-8,9-dihydro-7H-benzo[7]annulene-2-carboxylic acid

SAR439859; SAR439859; Amcenestrant [INN]; Amcenestrant [USAN]; TBF1NHY02O; (S)-8-(2,4-Dichlorophenyl)-9-(4-((1-(3-fluoropropyl)pyrrolidin-3-yl)oxy)phenyl)-6,7-dihydro-5H-benzo[7]annulene-3-carboxylic acid; SAR-439859

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~83.33 mg/mL (~150.28 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 8.33 mg/mL (15.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 83.3 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 8.33 mg/mL (15.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 83.3mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 8.33 mg/mL (15.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 83.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。