JAK2 (IC50 = 2.8 nM); JAK1 (IC50 = 3.3 nM); Tyk2 (IC50 = 19 nM); JAK3 (IC50 = 428 nM)

Ruxolitinib硫酸盐（INCB018424硫酸盐）以剂量依赖性方式显着、选择性地增强细胞凋亡，有效地、选择性地抑制JAK2V617F介导的信号传导和增殖，并在64 nM时导致Ba/F3细胞中线粒体去极化的细胞加倍。 roxolitinib 的 IC50 为 67 nM，对红细胞集落的形成具有显着的功效。它还抑制正常供体和真性红细胞增多症患者的红系祖细胞增殖，IC50 值分别为 407 nM 和 223 nM[1]。

Ruxolitinib（INCB018424硫酸盐；180 mg/kg，口服，每天两次）使 JAK2V617F 驱动的小鼠模型表现出显着延长的生存期，且没有骨髓抑制或免疫抑制作用。到第 22 天，它还显着降低炎症细胞因子水平和脾肿大，并优先消除肿瘤细胞[1]。在骨髓纤维化的双盲试验中，鲁索替尼组中 41.9% 的患者和安慰剂组中 0.7% 的患者达到主要终点。 Ruxolitinib 可使总体症状评分改善 50% 或更多，同时保持脾脏体积的缩小[2]。当给予罗索替尼（15 mg，每天两次）时，到第 48 周时，28% 的骨髓纤维化患者的脾脏体积减少了至少 35%，而接受最佳可用治疗的组中这一比例为 0%。到第 48 周时，使用最佳可用疗法时，平均可触及脾脏长度增加了 4%，但使用 Ruxolitinib 时则下降了 56%。接受鲁索替尼治疗的患者整体生活质量指标有所改善，并且骨髓纤维化相关症状有所减轻[3]。

用N-末端表位标签通过PCR克隆人JAK1（837-1142）、JAK2（828-1132）、JAK3（781-1124）和Tyk2（873-1187）的激酶结构域。使用Sf21细胞和杆状病毒载体表达重组蛋白，并用亲和层析纯化。JAK激酶测定使用肽底物（-EQUEDEPEGDYFEWLE）的均匀时间分辨荧光测定。用测试化合物或对照、JAK酶、500nM肽、三磷酸腺苷（ATP；1mM）和2.0%二甲基亚砜（DMSO）进行每种酶反应1小时。50%抑制浓度（IC50）计算为抑制50%荧光信号所需的化合物浓度。CHK2和c-MET酶的生化测定使用标准条件（Michaelis常数[Km]ATP）进行，具有来自每种蛋白质和合成肽底物的重组表达的催化结构域。 使用标准条件（CEREP；www.CEREP.com）使用200nM INCB018424进行额外的激酶测定（Abl、Akt1、AurA、AurB、CDC2、CDK2、CDK4、CHK2、c-kit、c-Met、EGFR、EphB4、ERK1、ERK2、FLT-1、HER2、IGF1R、IKKα、IKKβ、JAK2、JAK3、JNK1、Lck、MEK1、p38α、p70S6K、PKA、PKCα、Src和ZAP70）。显著抑制被定义为与对照值相比大于或等于30%（重复测定的平均值）。

菌落形成测定[1] 通过Ficoll离心从PV患者或正常对照者的外周血中分离单核细胞。将来自对照组或PV患者的总共2×105个细胞接种到补充有重组细胞因子（50 ng/mL干细胞因子、10 ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、10 mg/mL粒细胞集落刺激因素、10 ng/mL IL-3和3 U/mL红细胞生成素）和指定浓度的INCB018424或DMSO载体的甲醇培养基H88434上。为了评估内源性红系集落生长，将PV患者的3至4×105个细胞接种到含有INCB018424或载体的最小方法培养基上。每种条件一式三份。14天后对来源于红系（突发形成单位[BFU]和集落形成单位[CFU]-E）和髓系（CFU-粒细胞-巨噬细胞）祖细胞的集落进行计数。

[1]. Preclinical characterization of the selective JAK1/2 inhibitor INCB018424: therapeutic implications for the treatment of myeloproliferative neoplasms. Blood, 2010, 115(15), 3109-3117.

[2]. A double-blind, placebo-controlled trial of ruxolitinib for myelofibrosis. N Engl J Med, 2012, 366(9), 799-807.

[3]. JAK inhibition with ruxolitinib versus best available therapy for myelofibrosis. N Engl J Med. 2012 Mar 1;366(9):787-98.

Background: Ruxolitinib, a selective inhibitor of Janus kinase (JAK) 1 and 2, has clinically significant activity in myelofibrosis.
Methods: In this double-blind trial, we randomly assigned patients with intermediate-2 or high-risk myelofibrosis to twice-daily oral ruxolitinib (155 patients) or placebo (154 patients). The primary end point was the proportion of patients with a reduction in spleen volume of 35% or more at 24 weeks, assessed by means of magnetic resonance imaging. Secondary end points included the durability of response, changes in symptom burden (assessed by the total symptom score), and overall survival.
Results: The primary end point was reached in 41.9% of patients in the ruxolitinib group as compared with 0.7% in the placebo group (P<0.001). A reduction in spleen volume was maintained in patients who received ruxolitinib; 67.0% of the patients with a response had the response for 48 weeks or more. There was an improvement of 50% or more in the total symptom score at 24 weeks in 45.9% of patients who received ruxolitinib as compared with 5.3% of patients who received placebo (P<0.001). Thirteen deaths occurred in the ruxolitinib group as compared with 24 deaths in the placebo group (hazard ratio, 0.50; 95% confidence interval, 0.25 to 0.98; P=0.04). The rate of discontinuation of the study drug because of adverse events was 11.0% in the ruxolitinib group and 10.6% in the placebo group. Among patients who received ruxolitinib, anemia and thrombocytopenia were the most common adverse events, but they rarely led to discontinuation of the drug (in one patient for each event). Two patients had transformation to acute myeloid leukemia; both were in the ruxolitinib group.
Conclusions: Ruxolitinib, as compared with placebo, provided significant clinical benefits in patients with myelofibrosis by reducing spleen size, ameliorating debilitating myelofibrosis-related symptoms, and improving overall survival. These benefits came at the cost of more frequent anemia and thrombocytopenia in the early part of the treatment period. (Funded by Incyte; COMFORT-I ClinicalTrials.gov number, NCT00952289.).

C17H18N6.H2O4S

404.4435

404.127

1092939-16-6

Ruxolitinib;941678-49-5;Ruxolitinib (S enantiomer);941685-37-6;Ruxolitinib phosphate;1092939-17-7

25127111

Typically exists as off-white to gray solids at room temperature

3.894

166.16

3

8

4

28

535

1

[H][C@@](C1CCCC1)(N2N=CC(C3=C4C=CNC4=NC=N3)=C2)CC#N.O=S(O)(O)=O

LGJWVXWQCTZSGC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H18N6.H2O4S/c18-7-5-15(12-3-1-2-4-12)23-10-13(9-22-23)16-14-6-8-19-17(14)21-11-20-16;1-5(2,3)4/h6,8-12,15H,1-5H2,(H,19,20,21);(H2,1,2,3,4)

3-cyclopentyl-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)pyrazol-1-yl]propanenitrile;sulfuric acid

INCB-018424 sulfate, INCB 018424, INCB018424; INC424, INC424, INC-424; INCB18424, INCB 18424, INCB-18424; Jakafi and Jakavi (trade name)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。