Resiquimod (R848)

别名: R-848; S-28463; VML600;R848; S 28463; VML 600;R 848;S28463; VML-600. 雷西莫特; 1-(4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基-2-丙醇; 雷西莫特-D5; 4-氨基-2-乙氧基甲基-ALPHA,ALPHA-二甲基-1H-咪唑并[4,5-C]喹啉-1-乙醇; 1-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇
目录号: V1867 纯度: ≥98%
Resiquimod(以前称为 R-848;S-28463;VML-600;R848、S27609)是一种有效的基于咪唑喹啉胺的免疫反应调节剂,可作为 TLR 7/8 受体(Toll 样受体 7/8)的激动剂)具有抗病毒和抗肿瘤活性。
Resiquimod (R848) CAS号: 144875-48-9
产品类别: TLR
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
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  • Resiquimod-d5
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纯度: ≥98%

产品描述
Resiquimod(以前称为 R-848;S-28463;VML-600;R848、S27609)是一种有效的基于咪唑喹啉胺的免疫反应调节剂,可作为 TLR 7/8 受体(Toll 样受体 7)的激动剂/8) 具有抗病毒和抗肿瘤活性。它可以诱导TNF-α、IL-6和IFN-α等细胞因子的水平。 Resiquimod 是咪喹莫特(也称为 R-837、S-26308)的类似物,具有潜在的免疫刺激活性。据报道,Resiquimod 可剂量依赖性地诱导人外周血单核细胞 (PBMC) 中的细胞因子,包括 IFN、TNF、IL-1β 和 IL-6。此外,Resiquimod 可刺激细胞内 IL-1β 增加约 15%。研究结果还指出,单核细胞和 B 细胞都对 Resiquimod 产生反应,产生 IFN。 2016年4月28日,欧盟委员会授予瑞西莫德治疗皮肤T细胞淋巴瘤的孤儿药资格(EU/3/16/1653)。
生物活性&实验参考方法
靶点
Toll-like Receptor 7/8 (TLR7/8)
体外研究 (In Vitro)
Resiquimod (R-848) 会导致半抗原和过敏原特异性的循环 T 细胞(包括 TH2 效应细胞)产生 IFN-γ,甚至失去产生 IL-4 的能力 [2]。在 BrdU 掺入实验中,瑞西莫德 (R848) 增加了 BrdU 阳性细胞的数量,并以剂量依赖性方式促进 PBL 增殖。在用 R848 处理的细胞中,NF-κB 活性的报告者荧光素酶显着增加(3.5 倍)[3]。
体内研究 (In Vivo)
在动物模型中,大鼠和小鼠可用作瑞西莫德免疫介导的心脏组织损伤和细胞因子产生的模型。在 SPF 鸡中,肌肉注射 Resiquimod (R-848),剂量为 50 μg/只,可显着增加 IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-1β、IL-4、iNOS 和 IFN-α 的产生。 MHC-II 基因 [1]。
酶活实验
BrdU掺入测定法[3]
对于BrdU掺入测定,R848(1 µg/ml),CQ(10 µM)、CQ加R848或PBS加入到如前所述的6孔组织培养板中的PBL中(2 × 106 细胞/孔)。细胞在22 °C持续48 h、 并且根据制造商的说明书用BrdU细胞增殖测定试剂盒检测细胞增殖。测定进行了三次。
萤光素酶报告基因测定法[3]
对于萤光素酶测定,用萤火虫NF-κB-特异性萤光素酶报告载体pNFκB-Met-Luc2(Clontech,Mountain View,CA,USA)转染FG-9307细胞,如前所述(Chi等人,2013)。pNFκB-MetLuc2被设计用于直接从细胞培养基中监测NF-κB信号转导途径的激活。该载体含有位于最小TA启动子(PTA)上游的NF-κB增强子元件。位于PTA下游的是一个分泌的萤光素酶基因。转录因子与NF-κB增强子元件的结合允许MetLuc表达并分泌到周围的培养基中。pNFκB-MetLuc2已被证明在鱼类系统中起作用(Lauksund等人,2009)。通过与pSEAP2对照载体共转染来监测转染效率,该载体组成性地表达人分泌的增强型碱性磷酸酶(SEAP)。然后用R848(1 µg/ml),CQ(10 µM)、CQ加R848或PBS,并在22 °C持续24 h.然后分别使用萤光素酶测定试剂盒和Great EscAPe™SEAP化学发光检测试剂盒分析转染物的培养基的萤光素酶活性和SEAP活性。测定进行了三次。
细胞实验
MTT法测定细胞增殖[3]
为了制备PBL,从比目鱼尾静脉采集血液,并用L-15培养基以1:5稀释。将稀释后的血液放在61%Percoll上,并在400下离心 × 30的g 分钟。回收PBL层并用PBS洗涤三次。将细胞分布在96孔组织培养板(5 × 105 细胞/孔)在含有10%胎牛血清(FBS)的L-15培养基中,100 U/ml青霉素和100 µg/ml链霉素。用不同浓度(0、0.175、0.25、0.5、1、2、4、8和16 µg/ml)的R848用于48 h.为了抑制溶酶体酸化,将细胞与10 µM CQ用于1 R848处理前h。治疗后,20 µl,共5个 将mg/ml MTT{3-(4,5)-二甲基噻嗪(-z-y1)-3,5-二-苯并四唑溴化}加入到板中。培养板在22 °C 4 h、 和200 向板中加入µl二甲基亚砜以溶解还原的甲zan。然后在490读取铭牌 nm的微板读数器。为了确定Myd88抑制对R848诱导的细胞增殖的影响,将Myd88抑制剂Pepinh MYD(RQIKIWFQNRRMKWKK-RDVLPGTCVNS-NH2)和对照肽Pepinh control(RQIKiwFQNRRMKW KK-SLHGRGDPMEAFII-NH2)以50 µM,并将板在22 °C持续6 h.孵育后,用R848处理细胞,并如上所述进行MTT测定。为了确定NF-κB失活对R848诱导的细胞增殖的影响,将BAY-11-7082,一种IκB-α磷酸化的不可逆抑制剂,以1 µM,并将板在22 °C 1 h.孵育后,用R848处理细胞,并如前所述进行MTT测定。所有实验都进行了三次。
凋亡检测[3]
将先前制备的PBL分布在12孔组织培养板中(1 × 106 细胞/孔)在含有10%FBS的L-15培养基中,100 U/ml青霉素和100 µg/ml链霉素。R848(1 µg/ml),CQ(10 µM)、CQ加R848或PBS加入细胞中,并在22 °C持续12 h或48 h.孵育后,用冷PBS洗涤细胞两次。根据制造商的说明,使用结合了FITC的膜联蛋白V-FITC和PI细胞凋亡检测试剂盒,用FITC结合的膜联素V和碘化丙啶(PI)处理洗涤的细胞。然后使用配备有FlowJo软件(Tree Star Inc,Ashland OR)的FACSort流式细胞仪对细胞进行流式细胞术以进行数据分析。为了确定Myd88抑制对细胞凋亡的影响,将Pepinh MYD和Pepinh对照以50 µM。22孵化后 °C持续6 h、 用R848处理细胞,并如前所述进行膜联蛋白V/PI测定。为了确定NF-κB失活对R848诱导的抗细胞凋亡的影响,将BAY-11-7082以1 µM。22℃孵育后 °C 1 h、 用R848处理细胞,并如前所述进行膜联蛋白V/PI测定。所有实验都进行了三次。
定量实时逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)[3]
用RNAprep组织试剂盒从PBL中提取总RNA。使用M-MLV逆转录酶将1微克总RNA用于cDNA合成。如前所述(Zheng和Sun,2011),在Eppendorf Mastercycler中使用SYBR ExScript qRT-PCR试剂盒进行qRT-PCR。在每次PCR结束时进行扩增产物的熔解曲线分析,以确认仅扩增并检测到一种PCR产物。以β-肌动蛋白为内参照,采用比较阈值循环法分析靶基因的表达水平(Zhang et al.,2013)。实验进行了三次。
动物实验
R848 and chloroquine (CQ) were resuspended in PBS to 200 µg/ml and 100 µM respectively. Japanese flounder (average 11.6 g) were divided randomly into four groups and administered by intramuscular (i.m.) injection with 50 µl R848, CQ, R848 plus CQ, or PBS. At 24 h post-administration, the fish were challenged by intraperitoneal (i.p.) injection with 50 µl megalocytivirus that had been suspended in PBS to 1 × 107 copies/ml. At 3 d, 5 d, and 7 d post-challenge, kidney and spleen were collected from the fish (4 fish/time point), and the viral amounts in the tissues were determined by absolute quantitative real time PCR as reported previously (Zhang et al., 2012). The experiment was performed three times[3].
Although the solitary adjuvant potential of R-848 is well established in mammals, such reports are not available in avian species hitherto. Hence, the adjuvant potential of R-848 was tested in SPF chicken in this study. Two week old chicks were divided into four groups (10 birds/group) viz., control (A), inactivated Newcastle disease virus (NDV) vaccine prepared from velogenic strain (B), commercial oil adjuvanted inactivated NDV vaccine prepared from lentogenic strain (C) and inactivated NDV vaccine prepared from velogenic strain with R-848 (D). Booster was given two weeks post primary vaccination. Humoral immune response was assessed by haemagglutination inhibition (HI) test and ELISA while the cellular immune response was quantified by lymphocyte transformation test (LTT) and flow cytometry post-vaccination. Entire experiment was repeated twice to check the reproducibility. Highest HI titre was observed in group D at post booster weeks 1 and 2 that corresponds to mean log2 HI titre of 6.4 ± 0.16 and 6.8 ± 0.13, respectively. The response was significantly higher than that of group B or C (P<0.01). LTT stimulation index (P ≤ 0.01) as well as CD4(+) and CD8(+) cells in flow cytometry (P<0.05) were significantly high and maximum in group D. Group D conferred complete protection against virulent NDV challenge, while it was only 80% in group B and C. To understand the effects of R-848, the kinetics of immune response genes in spleen were analyzed using quantitative real-time PCR after R-848 administration (50 μg/bird, i.m. route). Resiquimod significantly up-regulated the expression of IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-1β, IL-4, iNOS and MHC-II genes (P<0.01). In conclusion, the study demonstrated the adjuvant potential of R-848 when co-administered with inactivated NDV vaccine in SPF chicken which is likely due to the up-regulation of immune response genes[1].
Dissolved in saline; 50 nmol; i.p. injection
Wild-type mice, TLR7-deficient mice, and MyD88-deficient mice
参考文献

[1]. Factors Influencing the Differentiation of Human Monocytic Myeloid-Derived Suppressor Cells Into Inflammatory Macrophages. Front Immunol. 2018 Mar 26;9:608.

[2]. FK506-Binding Protein 11 Is a Novel Plasma Cell-Specific Antibody Folding Catalyst with Increased Expression in Idiopathic Pulmonary Fibrosis. Cells. 2022 Apr 14;11(8):1341.

[3]. Resiquimod, a TLR7/8 agonist, promotes differentiation of myeloid-derived suppressor cells into macrophages and dendritic cells. Arch Pharm Res. 2014;37(9):1234-40.

其他信息
Resiquimod is an imidazoquinoline.
A substance being studied in the treatment of some types of skin cancer. When put on the skin, resiquimod causes some immune cells to make certain chemicals that may help them kill tumor cells. It is also being studied to find out if adding it to a tumor vaccine improves the antitumor immune response. It is a type of imidazoquinoline and a type of immunomodulator.
Resiquimod is an imidazoquinolinamine and Toll-like receptor (TLR) agonist with potential immune response modifying activity. Resiquimod exerts its effect through the TLR signaling pathway by binding to and activating TLR7 and 8 mainly on dendritic cells, macrophages, and B-lymphocytes. This induces the nuclear translocation of the transcription activator NF-kB as well as activation of other transcription factors. This may lead to an increase in mRNA levels and subsequent production of cytokines, especially interferon-alpha (INF-a) and other cytokines, thereby enhancing T-helper 1 (Th1) immune responses. In addition, topical application of resiquimod appears to activate Langerhans' cells, leading to an enhanced activation of T-lymphocytes. Due to its immunostimulatory activity, this agent may potentially be useful as a vaccine adjuvant.
Drug Indication
Investigated for use/treatment in genital herpes.
Mechanism of Action
Resiquimod is a Toll-like receptor 7 (TLR7) and TLR8 agonist that is a potent inducer of alpha interferon (IFN-alpha) and other cytokines.
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C17H22N4O2
分子量
314.38
精确质量
314.174
元素分析
C, 64.95; H, 7.05; N, 17.82; O, 10.18
CAS号
144875-48-9
相关CAS号
Resiquimod-d5;2252319-44-9;Resiquimod;144875-48-9
PubChem CID
159603
外观&性状
White to light yellow solid
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
553.6±50.0 °C at 760 mmHg
熔点
193 °C
闪点
288.6±30.1 °C
蒸汽压
0.0±1.6 mmHg at 25°C
折射率
1.635
LogP
2.15
tPSA
86.19
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
23
分子复杂度/Complexity
406
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])N1C(C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])[H])=NC2C(N([H])[H])=NC3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C3C1=2
InChi Key
BXNMTOQRYBFHNZ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C17H22N4O2/c1-4-23-9-13-20-14-15(21(13)10-17(2,3)22)11-7-5-6-8-12(11)19-16(14)18/h5-8,22H,4,9-10H2,1-3H3,(H2,18,19)
化学名
1-(4-amino-2-(ethoxymethyl)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-1-yl)-2-methylpropan-2-ol
别名
R-848; S-28463; VML600;R848; S 28463; VML 600;R 848;S28463; VML-600.
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO:63 mg/mL (200.4 mM)
Water:<1 mg/mL
Ethanol:21 mg/mL (66.8 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.95 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。


配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,您可以将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.1809 mL 15.9043 mL 31.8086 mL
5 mM 0.6362 mL 3.1809 mL 6.3617 mL
10 mM 0.3181 mL 1.5904 mL 3.1809 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
Lung Immune Challenge Study: Controlled Exposure to Inhaled Resiquimod (R848)
CTID: NCT06488118
Phase: N/A
Status: Recruiting
Date: 2024-07-10
Dendritic Cell Vaccine for Patients With Brain Tumors
CTID: NCT01204684
Phase: Phase 2
Status: Active, not recruiting
Date: 2024-04-25
Nasal Immune Challenge Study
CTID: NCT06021002
Phase: N/A
Status: Recruiting
Date: 2023-09-01
Tumor and Vaccine Site With a Toll Like Receptor (TLR) Agonist
CTID: NCT00960752
Phase: Phase 2
Status: Completed
Date: 2021-08-13
Vaccine Therapy and Resiquimod in Treating Patients With Stage II-IV Melanoma That Has Been Removed By Surgery
CTID: NCT01748747
Phase: Early Phase 1
Status: Completed
Date: 2018-10-09
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