Carnitine palmitoyltransferase I (CPT-I)

在 H9c2 细胞中，依托莫昔尔促进脂肪酸和甘油前体通过独特的代谢通道转化为心磷脂 [2]。尽管依托莫昔尔减少了[1-14C]棕榈酸或[1-14C]油酸掺入心磷脂，但它对参与心磷脂生物合成和重塑的酶的活性没有影响[2]。依托莫昔尔可增加心磷脂与[1,3-3H]甘油的结合。该过程涉及甘油激酶活性增加 33%，从而导致通过心磷脂生物合成从头途径的甘油通量增加 [2]。

Etomoxir 可抑制 BMSC 分化的成骨细胞的减少，并显着抑制高脂肪 (HF) 和 db/db 饮食喂养的小鼠骨矿物质密度 (BMD) 和破骨强度的下降[3]。在喂食 HF 和 db/db 的小鼠中，依托泊昔抑制成骨细胞和小鼠线粒体 ROS 生成的增加[3]。依托莫克舍引起的体内肉碱棕榈酰转移酶-I (CPT-I) 部分抑制不会改变心脏长链脂肪酸的摄取和氧化速率[4]。

---

本研究评估了2型糖尿病患者游离脂肪酸（FFA）、ROS产生、线粒体功能障碍与骨密度（BMD）之间的关联，并探讨了其分子机制。db/db和高脂肪（HF）喂养的小鼠接受CPT1、MitoQ抑制剂Etomoxir和P53抑制剂PFT-α的治疗。评估骨代谢因素，分离BMSCs并诱导成骨分化。2型糖尿病患者的FFA、脂质过氧化和mtDNA拷贝数与BMD相关Etomoxir、MitoQ和PFT-α显著抑制了db/db和HF喂养的小鼠BMD和骨断裂强度的降低，并抑制了BMSCs分化成骨细胞的减少。Etomoxir和MitoQ，而不是PFT-α，抑制了db/db和HF喂养的小鼠和成骨细胞线粒体ROS产生的增加。此外，Etomoxir、MitoQ和PFT-α显著抑制了成骨细胞的线粒体功能障碍。此外，db/db和HF喂养的小鼠成骨细胞中的线粒体凋亡被激活，而Etomoxir、MitoQ和PFT-α则抑制了线粒体凋亡。此外，P53的线粒体积累募集Bax并引发凋亡事件的分子事件。这些结果表明，脂肪酸氧化导致ROS产生，激活P53/Bax介导的线粒体凋亡，导致T2DM成骨分化和骨丢失减少。[3]

---

尽管CPT-I（肉碱棕榈酰基转移酶-I）通常被认为是线粒体β氧化的主要速率控制位点，但CPT-I是否在心脏的整体LCFA（长链脂肪酸）通量中起限速作用尚不完全清楚。心脏中调节LCFA通量的另一个重要部位是CD36和FABPpm（质膜脂肪酸结合蛋白）促进的跨肌膜LCFA转运。因此，我们探讨了在LCFA-CoA线粒体进入水平上对LCFA通量的慢性药理学阻断在多大程度上会影响肌膜LCFA摄取。每天给大鼠注射生理盐水或依托莫西（一种特定的CPT-I抑制剂），持续8天，剂量为20mg/kg体重。etomoxir治疗的大鼠心脏CPT-I活性降低了44%。与对照组相比，依托莫西治疗的大鼠心脏中CD36和FABPpm的肌浆含量以及LCFA转运能力没有改变。此外，无论是在基础代谢需求下还是在急性诱导的最大代谢需求下，依托莫西治疗大鼠的LCFA摄取和氧化率以及心肌细胞对葡萄糖的摄取率与对照组大鼠没有差异。最后，依托莫西治疗大鼠的心脏没有显示出三酰甘油的积累。因此，CPT-I似乎不是心脏总LCFA通量的主要心率控制位点。肌膜LCFA进入而非线粒体LCFA-CoA进入可能是心脏代谢疾病中LCFA通量正常化的有前景的靶点[4]。

shRNA-GFP慢病毒质粒的构建与感染[1] 使用标准分子生物学技术，用GFP cDNA代替5个针对CPT1A的shRNA慢病毒质粒中的嘌呤霉素抗性基因。简言之，从慢病毒PELPS-GFP质粒中将1.4kb的GFP cDNA插入物亚克隆到pLKO.1 shRNA质粒中的Kpn和BamH位点。通过免疫印迹分析测定每个慢病毒质粒的效力。按照描述进行慢病毒感染36。将表达针对CPT1A的shRNA的淋巴细胞与相应的对照质粒进行比较，我们也将其改造为表达GFP而不是嘌呤霉素抗性。对照质粒编码来自人β-肌动蛋白基因的扰乱shRNA序列。实验中慢病毒感染的效率在60-90%之间。在细胞增殖评估中，在对GFP+细胞进行门控后，使用基于珠的计数方法进行计数。争夺GFP和shRNA-CPT1A-GFP病毒上清液的滴度分别为9.45e6和7.34e6 TU/ml。[1]

80 male C57BLKS/J lar-Leprdb/db mice and 20 wild type littermates (8 week) were obtained from Model Animal Research Centre, Nanjing University, China. Mice were housed in cages in a limited access room, under temperature (23 ± 2 °C) and humidity (55 ± 5%) condition with a standard light (12 h light/dark) cycle and fed a regular diet. db/db mice were randomly divided into four groups: db/db group, Etomoxir group, MitoQ group, and PFT-α group. In the Etomoxir group, mice were intraperitoneally injected with 1 mg/kg Etomoxir twice every week. In the MitoQ group, 50 μmol/L MitoQ was given to the mice in water. Water bottles, containing either MitoQ, were covered with aluminum foil, and all bottles were refilled every 3 days. In the PFT-α group, mice were intraperitoneally injected with 1 mg/kg PFT-α twice every week. WT mice were administrated with vehicle instead. The experimental period is 8 weeks. At the end, peripheral blood samples and bone marrow cells were harvested for the assays. 100 C57BL/6 mice obtained from Experimental Animal Centre of Fourth Military Medical University. The mice were randomly divided into five groups: Control group, HF diet group, Etomoxir group, MitoQ group, and PFT-α group. Mice in HF diet, Etomoxir, MitoQ, and PFT-α groups were given high fat diet for 20 weeks and mice in Etomoxir, MitoQ, and PFT-α groups were administrated with Etomoxir, MitoQ, and PFT-α in the last 10 weeks. The administration of Etomoxir, MitoQ, and PFT-α were identical to the treatment in db/db mice. Control mice were administrated with vehicle instead [3].

[1]. The CPT1a inhibitor, etomoxir induces severe oxidative stress at commonly used concentrations.Sci Rep. 2018 Apr 19;8(1):6289.

[2]. Etomoxir mediates differential metabolic channeling of fatty acid and glycerol precursors into cardiolipin in H9c2 cells.J Lipid Res. 2003 Feb;44(2):415-23.

[3]. FFA-ROS-P53-mediated mitochondrial apoptosis contributes to reduction of osteoblastogenesis and bone mass in type 2 diabetes mellitus.Sci Rep. 2015 Jul 31;5:12724.

[4]. Etomoxir-induced partial carnitine palmitoyltransferase-I (CPT-I) inhibition in vivo does not alter cardiac long-chain fatty acid uptake and oxidation rates.Biochem J. 2009 Apr 15;419(2):447-55.

C15H18CLKO4

336.85200

336.053

C, 53.48; H, 5.39; Cl, 10.52; K, 11.61; O, 19.00

132308-39-5

828934-41-4 (sodium); 82258-36-4 (racemate); 828934-40-3 (S-isomer); 132308-39-5 (R-isomer potassium); 124083-20-1

23706479

Typically exists as solid at room temperature

2.188

61.89

0

4

9

21

321

1

[K+].ClC1=CC=C(OCCCCCC[C@@]2(CO2)C([O-])=O)C=C1

WBBGJSPIXZAHCU-XFULWGLBSA-M

InChI=1S/C15H19ClO4.K/c16-12-5-7-13(8-6-12)19-10-4-2-1-3-9-15(11-20-15)14(17)18/h5-8H,1-4,9-11H2,(H,17,18)/q+1/p-1/t15-/m1./s1

(R)-2-[6-(4-Chlorophenoxy)hexyl]oxiranecarboxylic Acid Potassium Salt

R-(+)-Etomoxir Carboxylate, Potassium Salt

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。