Phosphoglycerides

溶血磷脂酰肌醇（LPI）是一种众所周知的生物活性脂质，能够激活与细胞增殖、迁移、存活和肿瘤发生相关的信号级联。我们之前的工作表明，LPI参与了癌症的进展，因为它可以在Ras转化的成纤维细胞的培养基中释放，并可以作为细胞生长的自分泌调节剂。不同的研究小组已经确定，LPI是G蛋白偶联受体55（GPR55）的特异性和功能性配体，并且该GPR55-LPI轴能够激活与不同细胞功能相关的信号级联。我们实验室的工作最近揭示了一个自分泌回路，通过该回路，由细胞质磷脂酶A₂（cPLA₂）合成的LPI被ATP结合盒（ABC）转运蛋白C1（ABCC1）/多药耐药蛋白1（MRP1）泵出细胞，启动GPR55下游的信号级联。我们目前的工作表明，阻断这一途径可能是抑制癌症细胞增殖的一种新策略[1]。

最近的研究发现，在编码含7（MBOAT7）和跨膜通道样4（TMC4）的膜结合O-酰基转移酶结构域的两个基因附近存在一个遗传变异rs641738，这两个基因与病毒性肝炎感染者患非酒精性脂肪肝（NAFLD）、非酒精性脂性肝炎（NASH）、酒精相关性肝硬化和肝纤维化的风险增加有关（Buch等人，2015；Mancina等人，2016；Luukkonen等人，2016年；Thabet等人，2016）。基于肝脏表达定量性状位点分析，有人认为MBOAT7功能丧失会促进肝脏疾病进展（Buch等人，2015；Mancina等人，2016；Luukkonen等人，2016年；Thabet等人，2016，Viitasalo等人，2016），但这从未经过正式测试。在这里，我们表明，在高脂肪饮食的情况下，小鼠体内Mboat7的缺失，而不是Tmc4的缺失，足以促进NAFLD的进展。Mboat7功能丧失与其底物溶血磷脂酰肌醇（LPI）脂质的积累有关，直接给予LPI以Mboat7依赖的方式促进肝脏炎症和纤维化转录变化。这些研究揭示了MBOAT7驱动的LPI脂质酰化在抑制NAFLD进展中的新作用[2]。

溶血磷脂酰肌醇酰基转移酶生化测定[2]
[1-14C]-花生四烯酸辅酶A是商业获得的。酶测定中使用的溶血磷脂酰肌醇（LPI）底物（16:0 LPI、18:0 LPI和18:1 LPI）和脂质标准品是从商业获得的。从Mboat7-ASO和对照ASO处理的小鼠中分离出的肝微粒体用于测量LPIAT活性，这些小鼠同时食用食物和高脂肪饮食。测定缓冲液含有50 mM Tris-HCL（pH 8.0）、150 mM NaCl、50μM 18:0-LPI、20μM[1-14C]花生四烯酸辅酶a（0.025µCi）和15µg微粒体，总体积为100µL。底物在CHAPS（0.01mM终浓度）中制备。将测定混合物在37°C下孵育30分钟，通过加入1:2:1（v/v/v）氯仿：甲醇：2%正磷酸来停止反应。使用氯仿/丙酮/乙酸/甲醇/水（50:20:15:10:5，v/v）作为溶剂系统，在硅胶TLC板上提取和分离脂质。通过相对于标准物的迁移来鉴定单个脂质分子。通过放射自显影监测酶产物，从TLC板上刮下相应的斑点，用液体闪烁计数器定量放射性。

Isolation and characterization of lipid droplets from mouse liver[2]
Hepatic LDs were isolated by sucrose gradient centrifugation as we have previously described (Ferguson et al., 2017). Approximately 100 mg of tissue was minced with a razor blade on a cold surface. Minced tissue was transferred to a Potter-Elvehjem homogenizer, and then 200 μl of 60% sucrose was added to the tissue sample and incubated on ice for 10 min. Next, 800 μl of lysis buffer was added and mixed, and then incubated on ice for 10 min. Samples were homogenized with five strokes of a Teflon pestle and transferred to a 2 ml centrifuge tube. Lysis buffer (600 μl) was carefully layered on top of homogenate and centrifuged for 2 hr at 20,000 g at 4°C. The tube was then frozen at −80°C and cut at the 1,000 μl mark. The bottom piece of the centrifuge tube contained the non-LD fraction, which was allowed to thaw before being transferred to a new tube. The LD fraction was collected by cutting an ∼4–6 mm piece from the top of the ice cylinder and placing it in a new 2 ml tube. To increase the purity of the LD fraction, this process was repeated once more. Briefly, 200 μl of 60% sucrose was added to the LD fraction. Next, 800 μl of lysis buffer was added and mixed followed by careful layering with 600 μl of lysis buffer and then centrifugation for 2 hr at 20,000 g at 4°C. After freezing at −80°C, the tube was cut and the LD fraction was collected by cutting an ∼4–6 mm piece from the top of the ice cylinder and placing it in a new tube. Protein analysis was performed using the modified Lowry assay, as previously described (Ferguson et al., 2017), and Western blotting was performed as described below. MBOAT7 substrate (lysophosphatidylinositol) and product (phosphatidylinositol) lipids in the LD fraction were extracted and quantified using the targeted LC-MS/MS methods described below.

[1]. Lysophosphatidylinositol: a novel link between ABC transporters and G-protein-coupled receptors. Biochemical Society transactions, 2014, 42(5), 1372-1377.
[2]. Obesity-linked suppression of membrane-bound O-acyltransferase 7 (MBOAT7) drives non-alcoholic fatty liver disease. eLife, 2019 Oct 17:8:e49882.

1-hexadecanoyl-sn--glycero-3-phospho-D-myo-inositol(1-) is a 1-acyl-sn-glycero-3-phospho-1D-myo-inositol(1-) in which the acyl group is specified as hexadecanoyl (palmitoyl); major species at pH 7.3. It is a 1-acyl-sn-glycero-3-phospho-1D-myo-inositol(1-) and a lysophosphatidylinositol 16:0(1-). It is a conjugate base of a 1-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phospho-D-myo-inositol.

572.623130559921

572.296163544

1425501-12-7

141553-69-7 (ammonium salt)

71296206

Typically exists as solids (or liquids in special cases) at room temperature

2.3

206Ų

[C@@H]1(OP(OC[C@H](O)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O

UOXRPRZMAROFPH-OAOCPRPWSA-N

InChI=1S/C25H49O12P/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-19(27)35-16-18(26)17-36-38(33,34)37-25-23(31)21(29)20(28)22(30)24(25)32/h18,20-26,28-32H,2-17H2,1H3,(H,33,34)/p-1/t18-,20?,21-,22+,23-,24-,25?/m1/s1 InChI=1S/C25H49O12P/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-19(27)35-16-18(26)17-36-38(33,34)37-25-23(31)21(29)20(28)22(30)24(25)32/h18,20-26,28-32H,2-17H2,1H3,(H,33,34)/t18-,20-,21-,22+,23-,24-,25-/m1/s1

[(2R)-3-(hexadecanoyloxy)-2-hydroxypropoxy]({[(1S,2R,3R,4S,5S,6R)-2,3,4,5,6-pentahydroxycyclohexyl]oxy})phosphinic acid

1-palmitoylglycerophosphoinositol; 1-palmitoyl-GPI; 1-palmitoyl-GPI (16:0); CHEBI:72833; 1-16:0-2-lysophosphatidylinositol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O (0.21 g/L), Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。