Ki: 2 µM (nNOS), 50 µM (eNOS)[1]

1400W（60 μM，1 小时）可减少原代成年小胶质细胞中 NO、3-NT 和 MDA 的产生，并防止大脑皮层神经元凋亡 [2]。

1400W(0.1-10 mg/kg，皮下注射，一次)抑制大鼠回肠漏，EC50为0.16 mg/kg[1]。

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在暴露于 LPS 诱导的 iNOS 的大鼠中，1400W 有效 (ED50=0.3 mg/kg) 减少迟发性血管损伤，但与 LPS 联合给药时，不会加重急性血管渗漏[1]。每个实验组的NOx水平都因施用1400W而降低。此外，缺氧后期（48小时和5天）以脂质过氧化、凋亡细胞比例和硝化蛋白表达为标志[3]。

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据报道，诱导型一氧化氮合酶（iNOS）产生的一氧化氮（NO（*））可以保护或促进缺氧/复氧肺损伤。本研究旨在阐明缺氧肺中的这一双重作用。为此，对接受缺氧/再氧合（缺氧30分钟；再氧合0小时、48小时和5天）的Wistar大鼠进行了随访研究，无论是否事先用选择性iNOS抑制剂1400W（10mg/kg）治疗。分析了NO（*）水平（NOx）、脂质过氧化、细胞凋亡和蛋白质硝化。这是首次研究1400W在大鼠肺缺氧/再氧合过程中的作用。结果表明，1400W的给药降低了所有实验组的氮氧化物水平。此外，脂质过氧化、凋亡细胞百分比和硝化蛋白表达在缺氧后后期（48小时和5天）下降。我们的结果表明，缺氧肺中iNOS的抑制减少了1400W治疗前观察到的损伤，表明iNOS衍生的NO（*）可能在缺氧/再氧合过程中对该器官产生负面影响。这些发现是值得注意的，因为它们表明，任何旨在控制iNOS过量产生NO（*）的治疗策略都可能有助于减轻缺氧肺中NO（*s）介导的不良反应[3]。

[14C]1400 W与iNOS孵育的反相色谱[1]
[14C]1400 W（15μM）与iNOS（浓度为2μM/min，可转化10μML精氨酸）一起孵育，并在10、20和40分钟通过HPLC分析反应。除不包括L-精氨酸外，反应与上述NOS相同。对照反应无酶或无NADPH。50μl等分试样通过Ultrafree MC过滤器过滤，并应用于Waters Symmetry C18 HPLC柱。用5mM 1-辛烷磺酸在22%乙腈中以1ml/min的流速等度展开该柱。在15分钟时从柱中洗脱1400W。

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NO生产分析[2]
硝酸盐/亚硝酸盐浓度被认为是NO产生的指标，并按照制造商的说明，使用市售的一氧化氮荧光检测试剂盒进行测量，如前所述。使用Thermo Scientific Varioskan Flash荧光阅读器在360nm激发/450nm发射下测量荧光。荧光是溶液中亚硝酸钠浓度的指示剂，亚硝酸钠浓度用于绘制标准曲线，从中计算亚硝酸盐浓度。使用小胶质细胞培养基和大脑皮层组织匀浆来评估NO的产生。NO的产生值以nmol/mg蛋白质表示。

细胞毒性试验[2]
如前所述，使用MTT法评估细胞存活率。将细胞接种到96孔板中，并在37°C下保持24小时。将细胞暴露于不同浓度的1400 W（20、40、60、80和100μM）。暴露24小时后，向每个孔中加入0.5mg/ml的DPBS中的MTT，并再孵育4小时。然后向孔中加入150μl DMSO以溶解甲赞晶体，并使用Thermo Scientific Varioskan Flash微孔板读数器在490 nm处测量吸光度。根据吸光度值测定细胞活力，并与未处理的对照组进行比较。

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流式细胞术检测细胞凋亡[2]
将细胞以4×104个细胞/cm2的密度接种到96孔板中，并在37°C下保持24小时。然后将细胞在补充了500μM精氨酸的完全DMEM/F12培养基中培养，并置于缺氧加湿培养箱（1%O2）中。缺氧12小时后，将细胞在常氧条件下培养0、6或24小时进行复氧。在h/R前1小时，将溶解在PBS中的1400 W（60μM）加入细胞培养物中，对照培养物仅接受载体（PBS）。H/R后，收集细胞并用冰冷的PBS洗涤三次。细胞以每500μl结合缓冲液4×105个细胞的浓度重新悬浮，并在室温下与膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶（PI）在黑暗中孵育15分钟。使用BD FACSCanto II流式细胞仪分析样品。凋亡率定义为膜联蛋白V阳性/PI阴性细胞（右下象限）与总细胞的比率。

Endotoxin-induced Vascular Leakage in Rats[1]
The effects of 1400 W on plasma leakage were assessed in rats by determining the leakage of [125I]human serum albumin from plasma into organs essentially as described. 1400 W (0.1-10 mg/kg, subcutaneous) was dissolved in isotonic saline and administered either concurrently with endotoxin or 3 h following LPS administration (E. coli LPS, 3 mg/kg intravenously). Plasma leakage was then assessed 1 or 5 h after delivery of 1400W. The intravascular volumes were subtracted, and the results were expressed as Δμl g−1 tissue.

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Animals were randomly assigned to one of four experimental groups: vehicle-treated normoxia group, 1400 W-treated normoxia group, vehicle-treated hypoxia group, and 1400 W-treated hypoxia group. The 1400 W-treated groups were pretreated with ip injections of 1400 W (20 mg/kg, optimum dose) at 12 h intervals as previously described. 1400 W was dissolved in sterile distilled water at a concentration of 20 mg/ml. Vehicle-treated groups were pretreated with ip injections of an equal volume of sterile distilled water. Two hours after administration of vehicle or 1400 W, normoxia groups were maintained in a normoxic environment while hypoxia groups were exposed to simulated hypobaric hypoxia (HH) and reoxygenation as previously described. In brief, rats were exposed to simulated HH for 12 h at 8000 m (267 Torr) in an animal decompression chamber with the temperature and humidity maintained at 22 ± 2 °C and 30 ± 5%, and animals were provided with food and water ad libitum. After 12 h of HH, the hypoxia groups were brought down to sea level. Subjects from each experimental group were assessed at 0, 1 or 3 days post-HH with behavioral experiments or by resection of the cerebral cortex for embedding in paraffin and preparing tissue homogenate. Treatment of all 1400 W treated animals was stopped prior to spatial memory retention trial or resection of the cerebral cortex.

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[1]. 1400W is a slow, tight binding, and highly selective inhibitor of inducible nitric-oxide synthase in vitro and in vivo. J Biol Chem. 1997 Feb 21;272(8):4959-63.

[2]. 1400W ameliorates acute hypobaric hypoxia/reoxygenation-induced cognitive deficits by suppressing the induction of inducible nitric oxide synthase in rat cerebral cortex microglia. Behav Brain Res. 2017 Feb 15;319:188-199.

[3]. Inducible NOS inhibitor 1400W reduces hypoxia/re-oxygenation injury in rat lung. Redox Rep. 2010;15(4):169-78.

N-[3-(aminomethyl)benzyl]acetamidine is an aralkylamine that is Nbenzylacetamidine substituted at position 3 on the benzene ring by an aminomethyl group. An inhibitor of nitric oxide synthase. It has a role as an EC 1.14.13.39 (nitric oxide synthase) inhibitor, a geroprotector and an angiogenesis inhibitor. It is a carboxamidine, an aralkylamine and a primary amino compound.
N-(3-(Aminomethyl)benzyl)acetamidine has been reported in Crotalaria pallida with data available.

C10H15N3

177.25

177.127

C, 67.76; H, 8.53; N, 23.71

180001-34-7

180001-34-7; 214358-33-5 (HCl)

1433

Typically exists as solid at room temperature

1.09 g/cm3

329ºC at 760 mmHg

208-220ºC

152.7ºC

0.000183mmHg at 25°C

2.423

61.9

2

2

3

13

177

0

RODUKNYOEVZQPR-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C10H15N3/c1-8(12)13-7-10-4-2-3-9(5-10)6-11/h2-5H,6-7,11H2,1H3,(H2,12,13)

N'-[[3-(aminomethyl)phenyl]methyl]ethanimidamide

180001-34-7; 1400W; N-(3-(AMINOMETHYL)BENZYL)ACETAMIDINE; n-[3-(aminomethyl)benzyl]acetamidine; N-{[3-(aminomethyl)phenyl]methyl}ethanimidamide; W 1400; CHEBI:90721; UNII-M1VB8VP8OH;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。