Intermediate for synthesis of FAPI-QS

成纤维细胞活化蛋白（FAP）是一种脯氨酸选择性丝氨酸蛋白酶，在肿瘤基质和许多其他以组织重塑为特征的疾病的病变中过度表达。2014年，研究人员开发了一种最有效的fap抑制剂（称为UAMC1110），该抑制剂具有低纳摩尔fap亲和力，对相关酶如脯氨酰寡肽酶（PREP）和二肽基肽酶（DPPs）： DPP4、DPP8/9和DPP2具有高选择性。这种抑制剂最近已被其他团体采用，通过偶联双功能螯合剂-连接系统来制造放射性药物。在这里，我们报道了基于UAMC1110的含有双功能DATA5m和DOTA螯合剂的方酸（SA）作为药效剂。新型放射性药物DOTA.SA.FAPi和DATA5m.SA。分别测定了FAPi及其非放射性衍生物对FAP和PREP的体外抑制效果，并用镓-68进行了放射化学研究。此外，采用[68Ga]Ga-DOTA.SA.FAPi进行了首次体内概念验证动物研究，随后进行了体外生物分布测定。
结果:ga [68] Ga-DOTA.SA。FAPi和[68Ga]Ga-DATA5m.SA。DOTA.SA.FAPi和DATA5m.SA与FAP的亲和性表明，FAPi在10 min后具有高络合率> 97%的放射化学产率，在2 h内具有高稳定性。FAPi及其natGa和natlu标记衍生物表现优异，IC50值在0.7-1.4 nM之间。此外，这5种化合物对相关蛋白酶PREP具有低亲和力（IC50值为1.7 ~ 8.7 μM）。[68Ga]Ga-DOTA.SA在体内pet成像动物研究中的首次原理验证。FAPi前体在HT-29人类结直肠癌异种移植小鼠模型中显示出高蓄积（suv均值为0.75）和低背景信号的良好效果。体外生物分布显示，注射后60分钟，肿瘤组织的摄取量最高（5.2%ID/g），健康组织的摄取量总体较低。
结论：合成了靶向成纤维细胞活化蛋白的新型PET示踪剂，并对其进行了生化研究。新化合物的关键亚结构是一个源自方酸、DOTA和DATA5m双功能螯合剂基本基序的方酰胺连接单元和一个fap靶向片段。总之，这些新的fap配体在进一步的研究和开发以及首次人类应用方面都很有前景。[1]

[1]. Targeting fibroblast activation protein (FAP): next generation PET radiotracers using squaramide coupled bifunctional DOTA and DATA5m chelators. EJNMMI Radiopharm Chem. 2020 Jul 29;5(1):19.

[2]. Preclinical combination of radiation and fibroblast activation protein inhibition in pancreatic cancer. Journal of Clinical Oncology. 2016, 34 (15).

Background: Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is characterized by a fibrotic stroma and poor immune infiltrate, in part driven by cancer-associated fibroblasts (CAFs). CAFs contribute to immune escape via sequestration of anti-tumor CD8 T cells, upregulation of immune checkpoint ligand expression, and immunosuppressive cytokine production and polarization of tumor infiltrating immune cells. Methods: We established syngeneic pancreatic tumors in immune competent C57BL/6 mice using Panc02 cells. From day 7-20, mice were treated with fibroblast activation protein (FAP) inhibitor UAMC-1110 or control. Radiation (RT) was delivered exclusively to the tumor using a 1cm collimator on the Small Animal Radiation Research Platform, 10Gy x 3 daily fractions on day 14, 15, and 16. Tumors were measured, and mice followed for survival. Using the same treatment groups above, tumors were harvested for flow cytometry and multiparameter immunofluorescence on day 14, 23 and 43. Results: UAMC-1110 alone had no effect on tumor growth or survival. RT caused a transient growth delay, resulting in a survival advantage. Combination treatment with radiation and UAMC-1110 resulted in two temporally distinct growth delays: an initial tumor growth delay significant over radiation alone at day 22, and a second late response at day 43; but did not translate to a survival advantage over RT. At day 14, UAMC-1110 treatment resulted in fewer intratumoral myeloid cells. At day 23, RT increased CD11b tumor infiltrate, MDSCs, and CD3 infiltrate. Tumors from combination treated mice had increased Gr1HI cells and CD4 T cells, including Tregs. Macrophages increased with UAMC-1110, RT, and combination therapy in an additive manner. While CD8 to CD11b ratio increased with UAMC-1110 treatment, only 3 CD8 T cells were present per 100 myeloid cells. Tumor immune infiltrate was equivalent at day 43. Conclusions: We tested a novel specific FAP inhibitor with radiation in a murine PDAC model. We found FAP inhibition altered tumor immune infiltrate and caused two temporally distinct decreases in tumor growth when combined with RT. Interrogation of tumor immune infiltrate demonstrates alterations in innate and adaptive immune populations.[2]

C23H24F5N5O5

545.46

545.1697

2990021-73-1

NH2-UAMC1110;2758337-19-6

163197094

Off-white to yellow solid powder

159Ų

O=C(N1[C@@H](CC(F)(C1)F)C#N)CNC(C2=CC=NC3=C2C=C(OCCCCN)C=C3)=O.O=C(O)C(F)(F)F

CCMVWHIZASXFHY-UQKRIMTDSA-N

InChI=1S/C21H23F2N5O3.C2HF3O2/c22-21(23)10-14(11-25)28(13-21)19(29)12-27-20(30)16-5-7-26-18-4-3-15(9-17(16)18)31-8-2-1-6-24;3-2(4,5)1(6)7/h3-5,7,9,14H,1-2,6,8,10,12-13,24H2,(H,27,30);(H,6,7)/t14-;/m0./s1

6-(4-aminobutoxy)-N-[2-[(2S)-2-cyano-4,4-difluoropyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]quinoline-4-carboxamide;2,2,2-trifluoroacetic acid

NH2-UAMC1110 (TFA); NH2-UAMC1110 TFA; 2990021-73-1; S)-6-(4-aminobutoxy)-N-(2-(2-cyano-4,4-difluoropyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)quinoline-4-carboxamide 2,2,2-trifluoroacetic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O :~250 mg/mL (~458.33 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。