Aderamastat (FP-025)

Matrix metalloproteinase 12 (MMP-12)

阿德拉司他是一种针对炎症和纤维化疾病的高选择性口服MMP-12抑制剂。MMP-12在哮喘的病理生理学中起作用，并与疾病的严重程度有关。

阿德拉司他在屋尘螨（HDM）小鼠模型中显示出持续的抗炎作用和减弱过敏原诱导的组织病理学。重要的是，一项2期过敏原激发哮喘概念验证研究已经成功完成。

MMP-12定量[2]
根据制造商的规范，通过ELISA（MMP-12，LSBio，LS-F2819）测量BAL和肺匀浆中MMP-12的水平。

采样和原代细胞分离[2]
如前所述收集支气管肺泡灌洗液（BAL）。简言之，将小鼠通过气管插管，并通过向右肺滴注和回收1mL 0.9%无菌NaCl进行灌洗。将回收的BAL离心，储存上清液，同时将沉淀立即悬浮在无菌PBS中。然后测定每个BAL样品的细胞计数，并通过FACS分析确定细胞亚群表型。 为了去除血管内细胞池，通过肺循环向肺灌注5 ml 0.9%无菌NaCl。取下左肺（未冲洗），用虹膜切除剪刀将其切碎，然后如前所述进行酶消化和研磨2，3。简言之，为了制备肺匀浆，将肺在37℃下孵育1小时C与III型胶原酶（200 U/mL Worthington Biochemical，Lakewood，NJ）和DNAse I（100 U/mL；来自牛胰腺的II级，Sigma）在RPMI 1640中。通过70毫米尼龙筛研磨组织获得肺细胞悬浮液，并用氯化铵缓冲液裂解红细胞。然后在染色之前进行细胞计数以进行流式细胞术分析。细胞悬浮液用Greenberger缓冲液（75 mmol/L NaCl、7.5 mmol/L Tris、0.5 mmol/L MgCl2、0.5 mmol/LCaCl2、0.5%Triton X-100、4 mg/mL 4-[2-氨基乙基]苯磺酰氟、50 mg/mL Na2 EDTA、10 ng/mL Pepstatin A和10 ng/mL亮蛋白，pH 7.4）在冰上裂解30分钟，然后以680g离心10分钟。上清液在-80°C下储存，直至进一步使用。然后在染色之前进行细胞计数以进行流式细胞术分析。上清液在-80°C下储存，直至进一步使用。

Male 8-week-old C57BL/6J mice purchased from Charles River Laboratories (France) were housed under specific pathogen-free conditions and maintained on a 12-hour light – dark cycle with access to food and water ad libitum. The sensitization schedule to elicit a severe and persistent allergic inflammation of the airways was based on a well-characterized model. In short, groups of C57BL/6J mice were randomly assigned to be treated for 5 days a week for five consecutive weeks with either the aeroallergen house dust mite (HDM) (Greer Laboratories, Lenoir, NC, USA) or NaCl through intranasal (i.n.) administration. Lyophilized HDM extract was resuspended in sterile PBS at a concentration of 5 mg (protein)/ml, and 25 µg (5 µl) protein per dose per mouse was administered i.n. in a final volume of 20 µl (in NaCl) in mice lightly anesthetized with isofluorane. The H3N2 influenza A virus HK X31 stocks and viral titers were obtained by infecting Madin–Darby canine kidney (MDCK) as described before. The viral stock suspension was diluted in NaCl and animals (lightly anesthetized with isofluorane) received i.n. 20 TCID50 in 50 µl or not. The MMP-12 inhibitor FP-025 (Foresee Pharmaceuticals, Co., Ltd. Taiwan), was dissolved in sterile NaCl 0.5% methyl cellulose containing 0.2% Tween-80 and administered orally, daily, for 7 consecutive days, at a dose of 10 mg/kg or 30 mg/kg or 100 mg/kg in a volume of 50 µl per mouse. Prednisone (Sigma-Aldrich) was diluted in sterile NaCl (5 mg/kg) in 100 µl and administered daily via the intraperitoneal (i.p) route [2].

[1]. Safe administration of MMP-12 inhibitor. Patent. WO2022261624 A1.

877176-23-3

White to light yellow solid powder

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。