| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Smo ( IC50 = 5.8 nM ); Smo ( Ki = 4.6 nM )
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：PF-5274857 完全抑制 Shh 诱导的 Hh 通路活性，根据 MEF 细胞中 Smo 下游基因 Gli1 的转录活性测得，IC50 为 2.7 nM。 μ-阿片受体被 PF-5274857 弱抑制，随后在功能测定中测定解离常数为 36 μM。激酶测定：过表达人 Smo（氨基酸 181-787）的 HEK293 细胞在补充有 10% FBS、青霉素链球菌和 0.1 mg/mL 潮霉素的 Dulbeccos Modified Eagles Media (DMEM) 中生长至 90% 汇合。用冷的 Dulbeccos PBS 洗涤后，将细胞沉淀重悬于膜制备缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，250 mM 蔗糖和罗氏完全蛋白酶混合物）中并匀浆。离心匀浆，将细胞沉淀重悬于测定缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，100 mM NaCl，25 mM MgCl2，1 mM EDTA 和 0.1% 无蛋白酶牛血清白蛋白）中，并在玻璃杯中匀浆组织研磨机。使用 Pierce BCA 蛋白质测定法测定含有 Smo 的膜制剂中的总蛋白质。对于竞争性结合测定，将 100 μL 测定缓冲液添加到 96 孔 GF/B 过滤板中 10 分钟以预润湿过滤器，然后取出。然后添加以下试剂：20 μL 测定缓冲液、10 μL 化合物系列稀释液、20 μL 3H-Smo 拮抗剂（3 nM 最终浓度）和 50 μL 膜制剂（40 μg 总蛋白）。将板在室温下孵育2小时，然后洗涤并真空干燥。然后将板在 60°C 烘箱中干燥 1 小时，然后添加 45 μL Microscint 20，并在室温下孵育 30 分钟至 1 小时，然后在 TopCount 闪烁计数器中计数。使用 GraphPad Prism 软件分析数据。细胞测定：Gli-Luc/MEF 细胞在补充有 10% 热惰性 FBS、2 mM L-谷氨酰胺和 0.55 mM β-巯基乙醇的敲除 DMEM 中生长，直至 90% 汇合。第 1 天，将细胞用胰蛋白酶消化并接种到白色 384 孔板中，每孔含有 20 μL OptiMEM 培养基，并补充有 1% 热惰性 FBS 和 1 mM 丙酮酸钠，浓度为每孔 7,500 个细胞。将板在 37°C 和 5% CO2 下孵育过夜。第 2 天，以 3 倍系列稀释将 PF-5274857 添加至细胞，终浓度范围为 3 μM 至 50 pM，然后添加重组小鼠 Sonic Hedgehog，终浓度为 2 μg/mL。将细胞与 PF-5274857 和 Shh 在 37 °C 和 5% CO2 下孵育 48 小时。第 4 天使用 Bright-Glo 荧光素酶测定系统进行荧光素酶测定。简而言之，将 Bright-Glo 荧光素酶试剂 (25 μL) 添加到含有培养基的 384 孔板的每个孔中。将板在室温下放置 5 分钟，然后在发光板读数器上读数。计算 PF-5274857 的 IC50 值。
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| 体内研究 (In Vivo) |
PF-5274857 显示出显着的剂量依赖性肿瘤生长抑制 (TGI)，并在高剂量 (>10 mg/kg) 下诱导肿瘤消退。PF-5274857 不同程度地下调 Gli1、Gli2、Ptch1 和 Ptch2 基因表达水平，最大程度降低给药后 6 至 12 小时内即可达到效果（Gli1 是最敏感的基因），而 PF-5274857 对 Smo 水平几乎没有影响。在皮肤组织中，PF-5274857 也在相似的时间过程中观察到 Gli1 和 Gli2 的下调。在 Ptch+/-p53+/- 髓母细胞瘤同种异体移植小鼠中，PF-5274857 对肿瘤 Gli1 mRNA 产生率 (IC50) 的半最大抑制的模型衍生药物浓度确定为 8.9 nM，这在数学上相当于肿瘤消退 119在此浓度下血浆暴露 6 天后的 % TGI。在 Ptch+/-p53−/− 髓母细胞瘤同种异体移植小鼠中，IC50 值估计为 3.5 nM，与 Ptch+/-p53+/- 结果一致。 PF-5274857 还能够在给药后 4 小时内穿过大鼠的血脑屏障。
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| 酶活实验 |
在补充有 10% FBS、青霉素链球菌和 0.1 mg/mL 潮霉素的 Dulbecco 改良 Eagles 培养基 (DMEM) 中，过表达人 Smo（氨基酸 181-787）的 HEK293 细胞生长至 90% 汇合。将细胞沉淀重悬于膜制备缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，250 mM 蔗糖和 Roche 完全蛋白酶混合物）中，并在用冷 Dulbeccos PBS 洗涤后匀浆。离心匀浆后，将细胞沉淀重悬于测定缓冲液中，该缓冲液含有 0.1% 无蛋白酶牛血清白蛋白、50 mM Tris-HCl、pH 7.5、100 mM NaCl、25 mM MgCl2 和 1 mM EDTA。均质化过程在玻璃组织研磨机中进行。 Pierce BCA 蛋白质测定用于测定含有 Smo 的膜制剂中的总蛋白质。为了进行竞争性结合测定，将 96 孔 GF/B 过滤板用 100 μL 测定缓冲液预润湿 10 分钟，然后除去过滤器。之后，添加以下试剂：50 μL 膜制剂（40 μg 总蛋白）、10 μL 化合物连续稀释液、20 μL 3H-Smo 拮抗剂（3 nM 最终浓度）和 20 μL 测定缓冲液。室温孵育两小时后，清洁板并真空干燥。在 60°C 的烘箱中进行一小时的干燥过程后，将 45 μL Microscint 20 添加到板中，然后在室温下孵育 30 至 1 小时，然后使用 TopCount 闪烁计数器进行计数。名为 GraphPad Prism 的软件用于分析数据。
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| 细胞实验 |
在生长过程中将含有 10% 热惰性 FBS、2 mM L-谷氨酰胺和 0.55 mM β-巯基乙醇的敲除 DMEM 添加到 Gli-Luc/MEF 细胞中，直至 90% 汇合。第 1 天：使用每孔 20 μL OptiMEM 培养基，以每孔 7,500 个细胞的浓度将胰蛋白酶处理的细胞接种到白色 384 孔板中，并补充 1% 热惰性 FBS 和 1 mM 丙酮酸钠。过夜，将板在 37°C、5% CO2 下孵育。第 2 天，以 3 倍系列稀释，以 3 μM 至 50 pM 的终浓度添加 PF-5274857 后，将重组小鼠 Sonic Hedgehog 以 2 μg/mL 的终浓度添加到细胞中。将 PF-5274857 和 Shh 添加到细胞中，并在 37 °C、5% CO2 下孵育 48 小时。使用 Bright-Glo 荧光素酶测定系统进行第 4 天的荧光素酶测定。总之，将 25 μL Bright-Glo 荧光素酶试剂引入 384 孔板固定介质的每个孔中。室温储存五分钟后，使用发光板读数器读取板。计算 PF-5274857 的 IC50 值。
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| 动物实验 |
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| 参考文献 |
| 分子式 |
C20H25CLN4O3S
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|---|---|---|
| 分子量 |
436.96
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| 精确质量 |
436.133
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| 元素分析 |
C, 54.98; H, 5.77; Cl, 8.11; N, 12.82; O, 10.98; S, 7.34
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| CAS号 |
1373615-35-0
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| 相关CAS号 |
PF-5274857 hydrochloride; 1613439-62-5
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| PubChem CID |
56956240
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
686.0±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
368.7±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.590
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| LogP |
1.44
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| tPSA |
91.85
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
663
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1=C([H])N=C(C([H])=C1C1=C(C([H])([H])[H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])=N1)N1C([H])([H])C([H])([H])N(C(C([H])([H])C([H])([H])S(C([H])([H])[H])(=O)=O)=O)C([H])([H])C1([H])[H]
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| InChi Key |
BBVNTTZIOTWDSV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H25ClN4O3S/c1-14-10-15(2)20(23-12-14)16-11-18(22-13-17(16)21)24-5-7-25(8-6-24)19(26)4-9-29(3,27)28/h10-13H,4-9H2,1-3H3
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| 化学名 |
1-[4-[5-chloro-4-(3,5-dimethylpyridin-2-yl)pyridin-2-yl]piperazin-1-yl]-3-methylsulfonylpropan-1-one
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: Saline: 30 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2885 mL | 11.4427 mL | 22.8854 mL | |
| 5 mM | 0.4577 mL | 2.2885 mL | 4.5771 mL | |
| 10 mM | 0.2289 mL | 1.1443 mL | 2.2885 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Inhibition of smoothened by PF-5274857.Mol Cancer Ther.2012 Jan;11(1):57-65.
Imaging of Hh pathway in brain of Gli-luc transgenic mice.Mol Cancer Ther.2012 Jan;11(1):57-65. |
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 Pharmacokinetics and biomarker response in single dose study.Mol Cancer Ther.2012 Jan;11(1):57-65.
Modulation of Hh pathway genes in tumor (A) and skin (B) in Ptch+/−p53−/−medulloblastoma allograft mice treated with a single dose of 30 mg/kg PF-5274857.Mol Cancer Ther.2012 Jan;11(1):57-65. |
 PF-5274857 penetrates blood–brain barrier in primary Ptch+/−p53−/−medulloblastoma mice.
In vivoeffects of PF-5274857 in Ptch+/−p53+/−medulloblastoma allograft mice.Mol Cancer Ther.2012 Jan;11(1):57-65. |
RU-SKI 43 hydrochloride (RU-SKI 43 (hydrochloride))
RL-0070933
Hedgehog IN-5
Hedgehog IN-2
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