TS (Ki = 1.3 nM); DHFR (IC50 = 7.2 nM); GARFT (IC50 = 65 nM)

培美曲塞（LY231514）二钠是一种新型经典抗叶酸药物，其抗肿瘤活性可能来自于其多聚谷氨酸代谢物，可同时多重抑制多种重要的叶酸需求酶。目前已知存在的 FPGS 酶的最佳底物之一是培美曲塞 (LY231514)（K_m=1.6 μM 和 V_max/K_{m< /sub>=621）。 LY231514 的选择性和抗肿瘤活性可能很大程度上受到多谷氨酸化和这种新药的多谷氨酸代谢物的影响。 LY23l5l4 的五谷氨酸比 LY23l5l4 强 100 倍（Ki=3.4 nM），而 LY23l5l4 仅中度抑制 TS（Ki=340 nM，重组小鼠）[ 1]。这使得 LY231514 成为最有效的叶酸 TS 抑制剂之一。}

培美曲塞二钠在人 H460 非小细胞肺癌异种移植物中引起持续时间依赖性肿瘤生长延迟 (TGD)。

观察到产物 7,8-二氢叶酸的形成导致 340 nm 处吸光度增加，然后将其用于测量 TS 活性。测定缓冲液的成分如下：25 mM MgCl₂、6.5 mM 甲醛、1 mM EDTA、75 mM 2-巯基乙醇、50 mM N-三[羟甲基·甲基-2-氨基乙磺酸]。 hIS、6R-MTHF 和脱氧尿苷酸单磷酸的浓度分别为 30 μM、100 μM 和 30 nM（1.7 毫单位/mL）。在 6R-MTHF 浓度下测试未抑制的反应和六种抑制剂浓度。 K_{i app} 值是通过应用非线性回归分析并在 ENZFITTER 程序的帮助下将数据拟合到 Morrison 方程而获得的。 Ki 值的计算公式如下： 当 [S] 等于 30 μM，Km 等于 3 μM 时，K_{i app}= K_i(1 + [S ]/K_m）。 NADPH 和 7,8-二氢叶酸（底物）在 340 nm 处消失，这就是 DHFR 活性的分光光度分析的方法。该反应在 0.5 mL 50 mM 磷酸钾缓冲液中于 25°C 下进行。缓冲液的 pH 值为 7.5，含有 150 mM KCl、10 nM 2-巯基乙醇和 14 nM (0.34 milliunitlmL) DHFR。 7,8-二氢叶酸的浓度为 5、10 或 15 μM，而 NADPH 的浓度为 10 μM。测试了七种抑制剂浓度以及每个 7,8-二氢叶酸饱和度下的未抑制反应。 ENZFITI'ER 微机程序通过非线性回归分析将数据拟合到 Morrison 方程，从而确定 K_{i app} 值。对于每一种使用的 7,8-二氢叶酸，[S] 代表其浓度，K_m 相当于 0.15 μM。 K_{i app}= K_i(1 + [S]/K_m)。当 5,8-二脱氮杂叶酸在 295 nm 处形成时，会观察到吸光度增加，这就是 GARFT 活性的分光光度分析的定量方法。反应溶剂由 50% 甘油、25% HEPES 和 50% α-硫代甘油组成，pH 值为 7.5，25°C。使用以下浓度的底物和酶：10 μM α,β-甘氨酰胺核糖核苷酸、0-10 μM 10-甲酰基-5,8-二脱氮杂叶酸和 10 nM（1.9 毫单位/mL）GARFT。 Ki 值使用 Beckman DU640 分光光度计的酶机制程序确定，该程序使用非线性回归分析将数据拟合到用于竞争性抑制的 Michaelis-Menten 方程。

通过创建剂量反应曲线可以找到 50% 生长抑制 (IC50) 所需的浓度。培美曲塞二钠溶解于 DMSO 中，起始浓度为 4 mg/mL。然后用细胞培养基调节浓度。 124 孔簇板充满 2.0 mL 完全培养基中的 CCRF-CEM 白血病细胞。为了使 DMSO 最终体积达到 0.5%，重复孔中充满了不同浓度的培美曲塞二钠。在 5% CO₂ 空气气氛中，将板在 37°C 下孵育 72 小时。孵育结束时测量 ZBI Coulter 计数器上的细胞计数。在多项研究中，确定了每种化合物在 300 μM AICA、5 μM 胸苷、100 μM 次黄嘌呤或 5 μM 乙二苷和 100 μM 次黄嘌呤混合物中的半衰期。通过修改原始 MTT 比色测定法来测定贴壁肿瘤细胞的细胞毒性。在平底 96 孔组织培养板中，每孔使用 100 μL 测定培养基接种人类肿瘤细胞。测定培养基中叶酸的唯一来源是 2.3 μM 或 2 nM 叶酸，以及 10% FCS 和不含叶酸的 RPMI 1640。未填充孔 1A。抗叶酸储备溶液（每毫升 1 毫克）制备于Dulbecco's PBS，然后在 PBS 中连续进行 2 倍稀释。一式三份的孔中填充有每种浓度的 10 μL 等分试样。将板在空气中含有 5% CO2 的湿润气氛中于 37°C 孵育 72 小时。 MTT 以 5 mg/mL 的浓度溶解在 PBS 中后，将 10 µL MTF 库存溶液添加到测定的每个孔中。然后将板在 37°C 下再孵育两小时。孵育后每孔加入 100 μL DMSO。在甲臜完全溶解后，使用 570 nm 的测试波长和 630 nm 的参考波长在 Dynatech MR600 读数器上读取板。与未处理的对照相比，阻碍细胞生长 50% 所需的药物浓度称为抑制浓度 (IC50)。

Mice: The mice used are female CBA mice and female NOD/SCID mice (NOD.CB17-Prkdc^scid) that are 6–8 weeks old. In order to investigate the synergistic effect of premetrexed (100 mg/kg) in combination with anti-CD25 Ab or IgG control, tumor-bearing mice receive it intraperitoneally (i.p.) from days 4–8 (5 consecutive days). Based on earlier research conducted on mice, the current study's Pemetrexed dosage and schedule were chosen.

Effects During Pregnancy and Lactation
◉ Summary of Use during Lactation
Most sources consider breastfeeding to be contraindicated during maternal high-dose antineoplastic drug therapy. The manufacturer recommends that mothers should not to breastfeed during treatment with pemetrexed and for one week after the last dose. Chemotherapy may adversely affect the normal microbiome and chemical makeup of breastmilk.[1] Women who receive chemotherapy during pregnancy are more likely to have difficulty nursing their infant.[2]
◉ Effects in Breastfed Infants
Relevant published information was not found as of the revision date.
◉ Effects on Lactation and Breastmilk
Relevant published information was not found as of the revision date.
28170295

[1]. LY231514, a pyrrolo[2,3-d]pyrimidine-based antifolate that inhibits multiple folate-requiring enzymes. Cancer Res. 1997 Mar 15;57(6):1116-23.

[2]. Synergistic antitumor effects of regulatory T cell blockade combined with pemetrexed in murine malignantmesothelioma. J Immunol. 2010 Jul 15;185(2):956-66.

Pemetrexed disodium heptahydrate is an organic sodium salt that is the heptahydrate form of pemetrexed disodium. Inhibits thymidylate synthase (TS), 421 dihydrofolate reductase (DHFR), and glycinamide ribonucleotide formyltransferase (GARFT). It has a role as an antimetabolite, an antineoplastic agent, an EC 1.5.1.3 (dihydrofolate reductase) inhibitor, an EC 2.1.1.45 (thymidylate synthase) inhibitor and an EC 2.1.2.2 (phosphoribosylglycinamide formyltransferase) inhibitor. It is an organic sodium salt and a hydrate. It contains a pemetrexed disodium.
A guanine-derived ANTINEOPLASTIC AGENT that functions as a NUCLEIC ACID SYNTHESIS INHIBITOR through its binding to, and inhibition of, THYMIDYLATE SYNTHASE.
See also: Pemetrexed (has active moiety).

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Drug Indication
Malignant pleural mesotheliomaPemetrexed Baxter in combination with cisplatin is indicated for the treatment of chemotherapy naïve patients with unresectable malignant pleural mesothelioma. Non-small cell lung cancer Pemetrexed Baxter in combination with cisplatin is indicated for the first line treatment of patients with locally advanced or metastatic non-small cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology (see section 5. 1). Pemetrexed Baxter is indicated as monotherapy for the maintenance treatment of locally advanced or metastatic non-small cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology in patients whose disease has not progressed immediately following platinum-based chemotherapy (see section 5. 1). Pemetrexed Baxter is indicated as monotherapy for the second line treatment of patients with locally advanced or metastatic non-small cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology (see section 5. 1).
Malignant pleural mesotheliomaAlimta in combination with cisplatin is indicated for the treatment of chemotherapy-naïve patients with unresectable malignant pleural mesothelioma. Non-small-cell lung cancer Alimta in combination with cisplatin is indicated for the first-line treatment of patients with locally advanced or metastatic non-small-cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology. Alimta is indicated as monotherapy for the maintenance treatment of locally advanced or metastatic non-small-cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology in patients whose disease has not progressed immediately following platinum-based chemotherapy. Alimta is indicated as monotherapy for the second line treatment of patients with locally advanced or metastatic non-small-cell lung cancer other than predominantly squamous cell histology.

C20H33N5NA2O13

597.49

597.187

C, 40.21; H, 5.57; N, 11.72; Na, 7.70; O, 34.81

357166-29-1

Pemetrexed;137281-23-3;Pemetrexed disodium;150399-23-8

135564751

white solid powder

261.53

11

14

7

40

737

1

[Na+].[Na+].O=C1C2=C(N=C(N([H])[H])N1[H])N([H])C([H])=C2C([H])([H])C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(C(N([H])[C@]([H])(C(=O)[O-])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)[O-])=O)=C([H])C=1[H].O([H])[H].O([H])[H].O([H])[H].O([H])[H].O([H])[H].O([H])[H].O([H])[H]

QJVSMHJWAOSBMD-MYXYZBIASA-L

InChI=1S/C20H21N5O6.2Na.7H2O/c21-20-24-16-15(18(29)25-20)12(9-22-16)6-3-10-1-4-11(5-2-10)17(28)23-13(19(30)31)7-8-14(26)27;;;;;;;;;/h1-2,4-5,9,13H,3,6-8H2,(H,23,28)(H,26,27)(H,30,31)(H4,21,22,24,25,29);;;7*1H2/q;2*+1;;;;;;;/p-2/t13-;;;;;;;;;/m0........./s1

disodium;(2S)-2-[[4-[2-(2-amino-4-oxo-3,7-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)ethyl]benzoyl]amino]pentanedioate;heptahydrate

LY231514; LY-231514; HSDB 7316; LY 231514; HSDB7316; HSDB-7316; Pemetrexed; trade name: ALIMTA; MTA

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O: ~100 mg/mL (~166.8 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。