EGFR (Ki = 6 pM); EGFR (IC50 = 25 pM)

PD153035 (SU 5271) 抑制人表皮样癌 A431 细胞中 EGF 刺激的受体自身磷酸化，IC50 为 14 nM[1]。即使浓度为 50 μM，PD153035 (SU 5271) 对 src 酪氨酸激酶、胰岛素受体、PDGFR、FGFR、CSF-1 受体或 CSF-1 受体的影响也很小。在成纤维细胞或人表皮样癌细胞中，PD153035 (SU 5271) 在低纳摩尔剂量下快速抑制 EGF 受体的自身磷酸化，并特异性阻止 EGF 介导的细胞活动，例如有丝分裂、早期基因表达和致癌转化 [2]。 EGF 受体阳性细胞系受到 PD153035 (SU 5271) 的剂量依赖性生长抑制，其起始浓度低于微摩尔浓度，通常 IC50 低于 1 pM[3]。

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体外活性：PD 153035 对 EGF 诱导的酪氨酸磷酸化显示出有效和选择性的抑制作用，在 Swiss 3T3 成纤维细胞和 A-431 人表皮样癌细胞中的 IC50 分别为 15 nM 和 14 nM。 PD153035 在过表达 EGF 受体的人癌细胞系（包括 A431、Difi、DU145、MDA-MB-468 和 ME180 细胞）的培养物中显示出生长抑制作用，IC50 分别为 0.22 μM、0.3μM、0.4 μM、0.68 μM 和 0.95 μM 。 PD153035 在鼻咽癌 (NPC) 细胞（包括 NPC-TW01、NPC-TW04 和 HONE1 细胞系）中诱导剂量依赖性生长抑制，IC50 分别为 12.9 μM、9.8 μM 和 18.6μM。最近的一项研究表明，PD153035 可消除 Caco-2 结肠癌细胞中 PAR(2) 激活肽 2-furoyl-LIGRLO-NH(2) (2fLI) 诱导的 COX-2 表达。激酶测定：酶反应在总体积 0.1 mL，含有 25 mM Hepes (pH 7.4)、5 mM MgCl2、2 mM MnCl2、50 μM 钒酸钠、0.5 至 1.0 ng 酶（还含有足够的 EGF 以使最终浓度为 2 μg/mL） 、10 μM ATP，含有 1 μCi 的 [32P]ATP、不同浓度的 PD153035 和 200 μM 底物肽，该底物肽基于磷脂酶 C-γ1 的一部分，具有序列 Lys-His-Lys-Lys-Leu-Ala-Glu -Gly-Ser-Ala-Tyr472-Glu-Glu-Val。通过添加 ATP 引发反应。室温下 10 分钟后，加入 2 mL 75 mM 磷酸终止反应，并使溶液通过与肽结合的 2.5 cm 磷酸纤维素滤盘。将过滤器用 75 mM 磷酸洗涤五次，然后放入装有 5 mL 闪烁液的小瓶中。不受抑制的对照活性产生约 100,000 cpm。 细胞测定：将细胞（A431、Difi、DU145、MDA-MB-468 和 ME180）接种到六孔板中。第二天，将细胞更换为含有 0.5% FBS 的培养基，培养 18 小时，然后将不同浓度的 PD153035 添加到培养物中。处理72小时后，用PBS洗涤细胞一次，用PBS中的0.1%人胰蛋白酶-1 mM EDTA收获，并用Coulter计数器计数。 CMK 细胞悬浮生长，因此不需要胰蛋白酶消化。

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4-（3-溴苯胺基）-6,7-二甲氧基喹唑啉（32，PD 153035）是一种非常有效的表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶活性抑制剂（IC50 0.025 nM），在ATP位点竞争性结合。32的密切类似物的结构-活性关系非常陡峭。一些衍生物的IC50比简单的加性结合能参数预测的要好80倍，但具有类似苯基和喹唑啉取代基组合的类似物没有显示出这种“超加性”效应。由于一些自身轻度失活的取代基在正确组合使用时可以强烈激活，因此建议某些取代的类似物在结合时具有诱导受体构象变化的能力。喹唑啉的6位和7位对取代有一定的整体耐受性，因此32不是诱导构象的最佳抑制剂。二乙氧基衍生物56[4-（3-溴苯胺基）-6,7-二乙氧基喹唑啉]的IC50为0.006 nM，使其成为迄今为止报道的EGFR酪氨酸激酶活性最有效的抑制剂。[1]

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一种名为PD 153035的小分子以5-pM的抑制常数抑制表皮生长因子（EGF）受体酪氨酸激酶。该抑制剂对EGF受体酪氨酸激酶具有特异性，仅在微摩尔或更高浓度下抑制其他纯化的酪氨酸激酶。PD 153035在低纳摩尔浓度下迅速抑制成纤维细胞或人表皮样癌细胞中EGF受体的自磷酸化，并选择性阻断EGF介导的细胞过程，包括有丝分裂、早期基因表达和致癌转化。PD 153035在抑制分离的EGF受体酪氨酸激酶方面比其他酪氨酸激酶抑制剂的效力提高了四至五个数量级，在抑制细胞磷酸化方面提高了三至四个数量级。[2]

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据报道，PD 153035是表皮生长因子（EGF）受体酪氨酸激酶的特异性和强效抑制剂，在较小程度上也是密切相关的HER2/neu受体的抑制剂。我们发现PD153035抑制EGF依赖性EGF受体磷酸化，并抑制大量EGF受体过表达人癌症细胞系的增殖和克隆原性。在过表达EGF受体的细胞中，当PD153035浓度>75 nM时，EGF受体对外源性EGF的自磷酸化反应被完全抑制。相比之下，PD153035仅在显著更高的浓度（1400-2800nM）下降低了HER2/neu过表达细胞系中heregulin依赖性酪氨酸磷酸化。PD153035暴露不影响EGF受体或HER2/neu的表达。PD153035在低微摩尔浓度下引起EGF受体过表达细胞系的剂量依赖性生长抑制，在大多数测试的细胞系中，单层培养的IC50小于1微摩尔。在高达2.5微M的剂量下，未达到HER2/neu过表达细胞的IC50。在集落形成试验中，内源性（自分泌）配体驱动的培养物中的PD153035生长抑制活性与EGF受体数量相关，在表达更多EGF受体的细胞中活性更高，在表达正常数量EGF受体但HER2/neu水平较高的细胞中仅具有最低活性。PD153053也消除了外源EGF介导的所有生长效应；这种情况可以在去除化合物后逆转。与抗EGF受体阻断单克隆抗体C225共处理进一步增强了PD153035的抗肿瘤活性，表明C225的作用机制不是与配体结合竞争。后一项发现还表明，联合抗EGF受体策略可能对EGF受体表达水平高的肿瘤有更大的益处。[3]

单次腹腔 (ip) 注射 80 mg/kg 后，肿瘤和血浆中的 PD153035 (SU 5271) 水平也在 15 分钟后升至 22 μM 和 50 μM。在肿瘤中，PD153035 (SU 5271) 仍保持微摩尔浓度至少 12 小时，尽管其血浆水平在三小时后降至 1 μM 以下。肿瘤迅速使 EGF 受体的酪氨酸磷酸化降低 80-90%[4]。

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在免疫缺陷裸鼠中作为异种移植物生长的 A431 人表皮样肿瘤中，80 mg/kg 的PD 153035 抑制 EGF 受体酪氨酸激酶活性。 PD153035 可改善 HFD 喂养小鼠的葡萄糖耐量、胰岛素敏感性和信号传导，并减少亚临床炎症。 EGFR抑制剂预处理24小时显着增强阿霉素、紫杉醇、顺铂和5-氟尿嘧啶对NPCTW04细胞的细胞毒作用。

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PD 153035 是一种强效（Ki=6 pm）和特异性的表皮生长因子（EGF）受体酪氨酸激酶抑制剂，在细胞培养中以纳摩尔浓度抑制A431细胞中EGF受体的酪氨酸磷酸化。我们研究了该化合物的药代动力学及其在免疫缺陷裸鼠异种移植的A431人表皮样肿瘤中快速抑制EGF受体磷酸化的能力。在单次腹腔注射80mg/kg剂量后，血浆和肿瘤中的药物水平在15分钟内分别上升到50和22微摩尔。虽然PD153035的血浆水平在3小时内降至1微摩尔以下，但在肿瘤中，它仍保持微摩尔浓度至少12小时。EGF受体的酪氨酸磷酸化在肿瘤中被快速抑制了80-90%。然而，尽管药物的浓度根据之前的体外结果预测会保持抑制，但受体磷酸化在3小时后恢复到控制水平。肿瘤提取物中EGF刺激的酪氨酸激酶活性降低并恢复，与PD153035对受体磷酸化的影响平行，尽管三小时后活性仅达到对照活性的一半左右。这些结果证明了使用小分子抑制剂在体内抑制EGF受体酪氨酸激酶的潜力，尽管对其潜在抗癌活性的公平评估必须等待持续递送问题的解决方案，这可能使我们能够维持对EGF受体磷酸化的抑制[4]。

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非酒精性脂肪肝（NAFLD）是慢性肝病的主要病因之一。NAFLD始于肝脏中脂质过度积聚，进展为非酒精性脂肪性肝炎（NASH）和肝硬化。NAFLD与肝脏脂质代谢失调密切相关。尽管最近的研究报告称表皮生长因子受体（EGFR）信号传导调节脂质代谢，但EGFR和EGFR抑制剂作为脂质代谢调节剂的作用在很大程度上是未知的。在这里，我们研究了使用EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）PD153035抑制EGFR是否可以改善NAFLD。我们的研究结果表明，在高脂饮食（HFD）诱导的NAFLD小鼠的肝组织中，EGFR被激活。使用PD153035抑制EGFR可显著降低磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号传导和甾醇反应性基本结合蛋白1和2的表达，从而通过减少从头脂肪生成和胆固醇合成以及增强脂肪酸氧化来预防HFD诱导的肝脂肪变性和高胆固醇血症。此外，抑制EGFR改善了HFD诱导的葡萄糖不耐受。总之，这些结果表明EGFR在NAFLD中起着重要作用，是一个潜在的治疗靶点[5]。

酶反应在总体积为 0.1 mL 的溶液中进行，其中含有 25 mM Hepes (pH 7.4)、5 mM MgCl2、2 mM MnCl2、50 μM 钒酸钠、0.5 至 1.0 ng 酶（还含有足够的 EGF 以达到最终浓度） 2μg/mL)、含有1μCi的[32P]ATP的10μM ATP、不同浓度的PD153035和200μM基于具有序列Lys-His-Lys-Lys-的磷脂酶C-γ1的一部分的底物肽Leu-Ala-Glu-Gly-Ser-Ala-Tyr472-Glu-Glu-Val。将 ATP 添加到混合物中以开始反应。 10 分钟后，在室温下添加 2 mL 75 mM 磷酸终止反应。然后将混合物通过 2.5 厘米磷酸纤维素滤盘，该滤盘与肽结合。用 75 mM 磷酸清洗五次后，将过滤器放入装有 5 mL 闪烁液的小瓶中。不受抑制的对照活动估计产生 100,000 cpm。

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酶测定：如前所述，通过免疫亲和色谱法从人A431癌细胞脱落的膜囊泡中制备EGFR，32并按照之前的报道进行测定。13所使用的底物基于磷脂酶Cγ1的一部分，其序列为Lys-His-Lys-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Ser-Ala-Tyr472-Glu-Glu-Val。在室温下使反应进行10分钟，然后加入2 mL 75 mM磷酸停止反应。然后将溶液通过结合肽的2.5cm磷酸纤维素盘。用75mM磷酸（5×）洗涤该过滤器，并通过在含水荧光灯中闪烁计数来评估掺入的标记。对照活动（无药物）的计数约为100000 cpm。至少绘制了两条独立的剂量-反应曲线，并计算了IC50值。报告值为平均值；变异一般为±15%[1]。

PD153035 以递增的 0.125-2.5 pM 浓度应用于各种 EGF 受体过表达细胞系（A43 1、Difi、MDA-MB-468、MDA-MB-231、DU145、SiHa、C4i 和 MEl 80）。评估了单层细胞培养中生长抑制剂的影响[3]。

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人A431表皮样癌细胞中EGFR自身磷酸化。[1]
细胞在6孔板（直径35 mm）中生长至融合，暴露于无血清培养基中18小时，然后用4或PD 153035（32）处理2小时，接着用EGF（100 ng/mL）处理5分钟。单层在0.2 mL沸腾的Laemlli缓冲液（2%十二烷基硫酸钠、5%2-巯基乙醇、10%甘油和50 mm Tris，pH 6.8）中裂解，裂解物加热至100°C 5分钟。裂解物中的蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，并电泳转移到硝化纤维中。将膜在10 mM Tris、pH 7.2、150 mM NaCl和0.01%叠氮化物（TNA）中洗涤一次，并在含有3%牛血清白蛋白和1%卵清蛋白的TNA中封闭过夜。用抗磷酸酪氨酸抗体（UBI，封闭缓冲液中1μg/mL）印迹膜2小时，然后在TNA中洗涤两次，一次在含有0.05%吐温-20和0.05%非检测P-40的TNA中，两次在TNA。然后将膜在含有0.1μCi/mmol[125I]蛋白的阻断缓冲液中孵育2小时，然后如上所述再次洗涤。待印迹干燥后，将其装入胶片暗盒中，并暴露于X-AR X射线胶片1-7天。带强度用分子图形激光密度计测定。

Male C57BL/6J mice and high-fat diet (HFD) composed of 60% fat were used. The animals were maintained in a controlled environment (12 h light/12 h dark cycle; 50–60% humidity; ambient temperature 22 ± 2°C). Eight-week-old male mice were fed a normal chow diet (NCD) or HFD for 8 consecutive weeks and then divided randomly into three groups: the NCD group were fed an NCD without treatment, the HFD group were fed a HFD without treatment, and the HFD+PD group were fed a HFD and treated with PD 153035 (30 mg/kg/day O.G) for the final 4 weeks. [5]

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Dissolved in water.; 80 mg/kg; i.p. injection

A431 cells are injected into the outbred nude mice.

[1]. Tyrosine kinase inhibitors. 8. An unusually steep structure-activity relationship for analogues of 4-(3-bromoanilino)-6,7-dimethoxyquinazoline (PD 153035), a potent inhibitor of the epidermal growth factor receptor. J Med Chem. 1996 Jan 5;39(1):267-76.

[2]. A specific inhibitor of the epidermal growth factor receptor tyrosine kinase. Science. 1994 Aug 19;265(5175):1093-5.

[3]. PD153035, a tyrosine kinase inhibitor, prevents epidermal growth factor receptoractivation and inhibits growth of cancer cells in a receptor number-dependent manner. Clin Cancer Res. 1997 Nov;3(11):2099-106.

[4]. Inhibition of the epidermal growth factor receptor tyrosine kinase by PD153035 in human A431 tumors in athymic nude mice. Invest New Drugs. 1996;13(4):295-302.

[5]. Epidermal growth factor receptor inhibition attenuates non-alcoholic fatty liver disease in diet-induced obese mice. PoS One . 2019 Feb 8;14(2):e0210828.

PD-153035 is a member of the class of quinazolines carrying a 3-bromophenylamino substituent at position 4 and two methoxy substituents at positions 6 and 7. It has a role as an EC 2.7.10.1 (receptor protein-tyrosine kinase) inhibitor and an epidermal growth factor receptor antagonist. It is a member of quinazolines, an aromatic amine, a secondary amino compound, a member of bromobenzenes and an aromatic ether. It is a conjugate base of a PD-153035(1+).
AG 1517 is a quinazoline derivative that selectively inhibits EGFR kinase activity and suppresses the growth of psoriatic keratinocytes.

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PD-153035 hydrochloride is a hydrochloride obtained by combining PD-153035 with one equivalent of hydrochloric acid. It has a role as an epidermal growth factor receptor antagonist and an EC 2.7.10.1 (receptor protein-tyrosine kinase) inhibitor. It contains a PD-153035(1+).
AG 1517 is a quinazoline derivative that selectively inhibits EGFR kinase activity and suppresses the growth of psoriatic keratinocytes.

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4-(3-Bromoanilino)-6,7-dimethoxyquinazoline (32, PD 153035) is a very potent inhibitor (IC50 0.025 nM) of the tyrosine kinase activity of the epidermal growth factor receptor (EGFR), binding competitively at the ATP site. Structure-activity relationships for close analogues of 32 are very steep. Some derivatives have IC50s up to 80-fold better than predicted from simple additive binding energy arguments, yet analogues possessing combinations of similar phenyl and quinazoline substituents do not show this "supra-additive" effect. Because some substituents which are mildly deactivating by themselves can be strongly activating when used in the correct combinations, it is proposed that certain substituted analogues possess the ability to induce a change in the conformation of the receptor when they bind. There is some bulk tolerance for substitution in the 6- and 7-positions of the quinazoline, so that 32 is not the optimal inhibitor for the induced conformation. The diethoxy derivative 56 [4-(3-bromoanilino)-6,7-diethoxyquinazoline] shows an IC50 of 0.006 nM, making it the most potent inhibitor of the tyrosine kinase activity of the EGFR yet reported.[1]

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A small molecule called PD 153035 inhibited the epidermal growth factor (EGF) receptor tyrosine kinase with a 5-pM inhibition constant. The inhibitor was specific for the EGF receptor tyrosine kinase and inhibited other purified tyrosine kinases only at micromolar or higher concentrations. PD 153035 rapidly suppressed autophosphorylation of the EGF receptor at low nanomolar concentrations in fibroblasts or in human epidermoid carcinoma cells and selectively blocked EGF-mediated cellular processes including mitogenesis, early gene expression, and oncogenic transformation. PD 153035 demonstrates an increase in potency over that of other tyrosine kinase inhibitors of four to five orders of magnitude for inhibition of isolated EGF receptor tyrosine kinase and three to four orders of magnitude for inhibition of cellular phosphorylation.[2]

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PD153035 is reported to be a specific and potent inhibitor of the epidermal growth factor (EGF) receptor tyrosine kinase and, to a lesser degree, of the closely related HER2/neu receptor. We show that PD153035 inhibits EGF-dependent EGF receptor phosphorylation and suppresses the proliferation and clonogenicity of a wide panel of EGF receptor-overexpressing human cancer cell lines. EGF receptor autophosphorylation in response to exogenous EGF was completely inhibited at PD153035 concentrations of >75 nM in cells overexpressing the EGF receptor. In contrast, PD153035 only reduced heregulin-dependent tyrosine phosphorylation in HER2/neu-overexpressing cell lines at significantly higher concentrations (1400-2800 nM). PD153035 exposure did not affect the expression of either EGF receptors or HER2/neu. PD153035 caused a dose-dependent growth inhibition of EGF receptor-overexpressing cell lines at low micromolar concentrations, and the IC50 in monolayer cultures was less than 1 microM in most cell lines tested. At doses of up to 2.5 microM, the IC50 for HER2/neu-overexpressing cells was not reached. In colony-forming assays, the PD153035 growth-inhibitory activity in cultures driven by endogenous (autocrine) ligand was correlated with EGF receptor number, with higher activity in cells expressing higher numbers of EGF receptors and only minimal activity in cells expressing normal numbers of EGF receptors but high HER2/neu levels. PD153053 also abolished all growth effects mediated by the addition of exogenous EGF; this condition could be reversed upon removal of the compound. Cotreatment with C225, an anti-EGF receptor-blocking monoclonal antibody, further enhanced the antitumor activity of PD153035, suggesting mechanisms of action for C225 other than competition with ligand binding. This latter finding also suggests that combined anti-EGF receptor strategies may be of enhanced benefit against tumors with high levels of EGF receptor expression.[3]

C16H14BRN3O2

360.2053

359.026

C, 53.35; H, 3.92; Br, 22.18; N, 11.67; O, 8.88

153436-54-5

PD153035 Hydrochloride;183322-45-4; PD153035;153436-54-5; 205195-07-9 (xHCl); 586347-97-9 (nitrate)

4705

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

472.1±45.0 °C at 760 mmHg

239.3±28.7 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.679

4.08

56.27

1

5

4

22

360

0

BrC1=C([H])C([H])=C([H])C(=C1[H])N([H])C1C2=C([H])C(=C(C([H])=C2N=C([H])N=1)OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H]

LSPANGZZENHZNJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H14BrN3O2/c1-21-14-7-12-13(8-15(14)22-2)18-9-19-16(12)20-11-5-3-4-10(17)6-11/h3-9H,1-2H3,(H,18,19,20)

N-(3-bromophenyl)-6,7-dimethoxyquinazolin-4-amine

PD153035; PD 153035; PD-153035; 153436-54-5; N-(3-bromophenyl)-6,7-dimethoxyquinazolin-4-amine; PD153,035; PD-153,035; pd 153,035; 4-(3-BROMOANILINO)-6,7-DIMETHOXYQUINAZOLINE; WHI-P-79; NSC-669364; ZM 252868; Tyrphostin AG 1517; AG 1517; ZM 252868;ZM-252868; ZM252868; SU-5271, SU 5271;SU5271;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: 30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W:30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。