OSU-03012 (AR-12)

PDK-1 (IC50 = 5 μM)

OSU-03012 可诱导 PC-3 细胞凋亡，IC50 为 5 µM，并降低免疫沉淀 p70S6K 的活性。 OSU-03012 在低至 3-5 m 的浓度下即可完全抑制多种肿瘤细胞系的细胞生长，而塞来昔布所需的浓度至少为 50 m。 [1]与未转化的星形胶质细胞相比，OSU-03012 更强烈地促进神经胶质瘤细胞的细胞杀伤。 OSU-03012 以剂量依赖性方式诱导细胞死亡，不受 p53 突变、ERBB1 VIII 表达或 10 号染色体同源缺失导致的磷酸酶和张力蛋白功能丧失的影响。电离辐射和 OSU-03012以累加的、不依赖半胱天冬酶的方式增加细胞死亡。 OSU-03012 作为单一药物或与信号调节剂联合使用时的致死率在缺乏 BIM 或 BAX/BAK 表达的细胞中不会改变。 OSU-03012 促进溶酶体室释放组织蛋白酶 B，并促进线粒体释放 AIF。在蛋白激酶 R 样内质网激酶-/- 细胞中，OSU-03012 的致死率降低，这与 BID 裂解减少以及组织蛋白酶 B 和 AIF 释放到细胞质中的减少相关。 [2] OSU-03012 抑制甲状腺癌细胞（NPA、WRO 和 ARO 细胞）的生长、迁移和凋亡，导致 S 期细胞增加，但 G2 细胞增加。 OSU-03012 是一种 ATP 竞争性 PAK 活性抑制剂，可防止甲状腺癌细胞磷酸化 AKT。 [3] OSU-03012 的 IC50 值低于 1 M，可抑制用于研究肝细胞癌的 Huh7、Hep3B 和 HepG2 细胞系的生长。在 Huh7 细胞中，OSU-03012 诱导自噬，但不会抑制 PDK1 或 AKT 活性或引起细胞凋亡。 OSU-03012 处理后，还发现活性氧 (ROS) 的积累。 [4] 根据最近的一项研究，OSU-03012可能使(Bcr)-Abl突变细胞系更容易受到伊马替尼引起的细胞凋亡的影响。 [5]

OSU-03012 在 200 mg/kg 浓度下可抑制 Huh7 肿瘤异种移植物中肿瘤生长 57.59% 并增加裂解的 LC3。 [4] 与载体对照相比，OSU-03012 显着降低肿瘤中 EGFR 蛋白表达 48%，并抑制 YB-1 与 MDA-MB-435/LCC6 异种移植物中的 EGFR 启动子结合。 [6] 口服 OSU-03012 可抑制 HMS-97 神经鞘瘤异种移植物的 55% 生长，并且耐受性良好。 [7]

该体外测试使用 PDK-1 激酶测定试剂盒。这种无细胞测定基于重组 PDK-1 在 DMSO 载体或 OSU-03012 存在下激活其下游血清和糖皮质激素调节激酶的能力，后者反过来磷酸化 Akt/血清和糖皮质激素调节激酶具有 [γ-32P]ATP 的特异性肽底物 RPRAATF。使用 P81 磷酸纤维素纸并用 0.75% 磷酸洗涤 3 次，然后将 32P-磷酸化肽底物与剩余的 [γ-32P]-ATP 分离。然后在闪烁计数器中测量该数量。

通过使用 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物测定法六次重复评估 OSU-03012 对 PC-3 细胞活力的影响。在 96 孔平底板中，细胞在添加有 10% FBS 的 RPMI 1640 中生长 24 小时。将它们暴露于溶解在 DMSO 中的不同浓度的 OSU-03012 (0-10 μM)（最终浓度≤0.1%）和含 1% 血清的 RPMI 1640 中，持续不同时间长度（–72 小时）。在与 OSU-03012 处理细胞的水平相当的情况下，对照组给予 DMSO 载体。添加 200 L 含 10% FBS 的 RPMI 1640 中的 0.5 mg/mL 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物代替培养基。将细胞在 CO2 培养箱中 37°C 培养两小时。从孔中除去上清液后，将还原的 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物染料溶解在每孔 200 L DMSO 中。使用读板器测定 570 nm 处的吸光度。

Mice[3]
SCID/Rag2m mice (6-8 weeks old, female) are subcutaneously injected with 1×107 MDA-MB-435/LCC6 cells stably transfected with HER-2/neu. The right and left sides of the lower back of each mouse are injected with the cells. We inject two tumors into each of the eight mice. The mice are randomly divided into the vehicle, 0.5% methyl cellulose/0.1% Tween 80, or OSU-03012 groups after six weeks. The vehicle or OSU-03012 are administered orally to mice once daily for three days. On the fourth day of the experiment, mice are killed, the tumors are removed, and chromatin immunoprecipitation (ChIP) and protein isolations are performed on the tumors.

[1]. Oncotarget . 2015 Aug 21;6(24):20570-7.

[2]. Mol Cancer Res . 2014 May;12(5):803-12.

OSU-03012 is a member of the class of pyrazoles that is N-[4-(pyrazol-1-yl)phenyl]glycinamide in which the pyrazole ring is substituted at positions 3 and 5 by trifluoromethyl and phenanthrene-2-yl groups respectively. It has a role as an EC 2.7.11.1 (non-specific serine/threonine protein kinase) inhibitor, an antineoplastic agent and an apoptosis inducer. It is a member of pyrazoles, a member of phenanthrenes, an organofluorine compound, a glycine derivative, an aromatic amide and an antibiotic antifungal drug.
PDK1 Inhibitor AR-12 is an orally bioavailable, small-molecule, celecoxib-derived inhibitor of phosphoinositide-dependent kinase-1 (PDK1) with potential antineoplastic activity. Devoid of any COX inhibiting activity, PDK1 inhibitor AR-12 binds to and inhibits the phosphorylation of 3-phosphoinositide-dependent kinase-1 (PDK-1).; subsequently, the phosphorylation and activation of the serine/threonine protein kinase Akt (protein kinase B or PKB) is inhibited, which may result in inhibition of the PI3K/Akt signaling pathway, inhibition of tumor cell proliferation, and the induction of tumor cell apoptosis. In addition, this agent appears to induce the activity of protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase (PERK), which plays a key role in the endoplasmic reticulum stress pathway. Activation and dysregulation of the PI3K/Akt signaling pathway is frequently associated with tumorigenesis and dysregulated PI3K/Akt signaling may contribute to tumor resistance to a variety of antineoplastic agents.

C26H19F3N4O

460.4505

460.151

C, 67.82; H, 4.16; F, 12.38; N, 12.17; O, 3.47

742112-33-0

742112-33-0;1471979-81-3 (HCl);

10027278

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

683.0±55.0 °C at 760 mmHg

177-180 °C

366.9±31.5 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.649

5.38

72.94

2

6

4

34

711

0

FC(C1C([H])=C(C2C([H])=C([H])C3C4=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C4C([H])=C([H])C=3C=2[H])N(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])N([H])C(C([H])([H])N([H])[H])=O)N=1)(F)F

YULUCECVQOCQFQ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H19F3N4O/c27-26(28,29)24-14-23(33(32-24)20-10-8-19(9-11-20)31-25(34)15-30)18-7-12-22-17(13-18)6-5-16-3-1-2-4-21(16)22/h1-14H,15,30H2,(H,31,34)

2-amino-N-{4-[5-(2-phenanthrenyl)-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-1-yl]-phenyl} acetamide

AR12; AR 12; AR-12; OSU-03012; OSU03012; OSU 03012

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~11 mg/mL (~23.9 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.43 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.43 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.43 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 0.5% methylcellulose+0.2% Tween 80: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。