体外活性：OSI-420是厄洛替尼在人血浆中的主要代谢物。短暂静脉输注后，厄洛替尼从血浆中消失呈双指数，平均终末半衰期为 5.2 小时，平均清除率为 128 ml/min/m(2)。血浆中 OSI-420 暴露量 (AUC) 是厄洛替尼的 30%（范围 12-59%），OSI-420 清除率比厄洛替尼高 5 倍以上。厄洛替尼和 OSI-420 是等效的，并且厄洛替尼 + OSI-420 在 CSF 中达到的组合浓度超过了完整肿瘤细胞中 EGFR 酪氨酸激酶抑制的 IC50（7.9 ng/ml 或 20 nM）。 Erlotinib 可有效抑制完整细胞中的 EGFR 活化，包括 HNS 人头颈肿瘤细胞 (IC50 20nM)、DiFi 人结肠癌细胞和 MDA MB-468 人乳腺癌细胞。 Erlotinib (1 μM) 诱导 DiFi 人结肠癌细胞凋亡。厄洛替尼抑制一组 NSCLC 细胞系的生长，包括 A549、H322、H3255、H358 H661、H1650、H1975、H1299、H596，IC50 范围为 29 nM 至 >20 μM。 Erlotinib(2 μM) 显着抑制 AsPC-1 和 BxPC-3 胰腺细胞的生长。厄洛替尼盐酸盐与吉西他滨联合使用在 KRAS 突变的胰腺癌细胞中被认为具有累加效应。 10 微摩尔的厄洛替尼可抑制 EGFR Y845（Src 依赖性磷酸化）和 Y1068（自身磷酸化）位点的磷酸化。与厄洛替尼联合使用可以下调雷帕霉素刺激的 Akt 活性，并对细胞生长抑制产生协同作用。激酶测定：96 孔板在 37°C 下孵育过夜，每孔加入 100 μL 0.25 mg/mL PGT 的 PBS 溶液。通过抽吸除去过量的PGT，并用洗涤缓冲液（PBS中的0.1% Tween 20）洗涤板3次。激酶反应在 50 μL 50 mM HEPES (pH 7.3) 中进行，其中含有 125 mM 氯化钠、24 mM 氯化镁、0.1 mM 原钒酸钠、20 μM ATP、1.6 μg/mL EGF 和 15 ng EGFR，亲和力从A431细胞膜纯化。添加 DMSO 中的厄洛替尼 HCl，使 DMSO 最终浓度为 2.5%。通过添加 ATP 启动磷酸化，并在室温下持续摇动 8 分钟。通过抽吸反应混合物终止激酶反应并用洗涤缓冲液洗涤4次。通过每孔 50 μL HRP 偶联的 PY54 抗磷酸酪氨酸抗体孵育 25 分钟来测量磷酸化 PGT，该抗体在封闭缓冲液（PBS 中的 3% BSA 和 0.05% Tween 20）中稀释至 0.2 μg/mL。通过抽吸除去抗体，并用洗涤缓冲液洗涤板4次。通过添加 TMB Microwell 过氧化物酶底物（每孔 50 μL）来产生结肠测量信号，并通过添加 0.09 M 硫酸（每孔 50 μL）来终止。通过测量 450 nm 处的吸光度来估算磷酸酪氨酸。对照信号通常为 0.6-1.2 吸光度单位，在没有 AlP、EGFR 或 PGT 的孔中基本上没有背景，并且与 10 分钟的孵育时间成正比。细胞测定：将呈指数生长的细胞（A549、H322、H3255、H358 H661、H1650、H1975、H1299、H596 细胞）接种于 96 孔塑料板中，并暴露于埃罗替尼、培美曲塞或恒定浓度组合的连续稀释液中比例为 4:1，一式三份，持续 72 小时。通过细胞计数和 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物测定来测定细胞活力。生长抑制表示为药物处理的存活细胞与 PBS 处理的对照细胞的百分比（被认为是 100% 活力）。 IC50 值是与未处理的对照细胞相比，药物暴露 72 小时导致 50% 细胞生长抑制的浓度，并通过 CalcuSyn 软件计算。

在 100 mg/kg 的剂量下，厄洛替尼完全阻止 EGF 诱导的人类 HN5 肿瘤中 EGFR 的自磷酸化，该肿瘤作为无胸腺小鼠的异种移植物以及治疗小鼠的肝脏 EGFR 的自磷酸化。厄洛替尼可减少异种移植的人类 AML 细胞的生长。

包被 96 孔板的过程包括每孔加入 100 μL 0.25 mg/mL PGT 的 PBS 溶液，在 37 °C 下孵育一整夜。使用抽吸去除多余的 PGT，并对板进行 3 次洗涤缓冲液洗涤（PBS 中的 0.1% Tween 20）。使用 50 μL 50 mM HEPES (pH 7.3)，其中含有 0.1 mM 原钒酸钠、125 mM 氯化钠、24 mM 氯化镁、20 μM ATP、1.6 μg/mL EGF 和来自 A431 细胞膜的 15 ng 亲和纯化的 EGFR用于激酶反应。通过在 DMSO 中添加盐酸厄洛替尼可达到 2.5% 的最终 DMSO 浓度。添加 ATP 后，磷酸化开始并在室温下持续八分钟，同时不断摇动。抽吸反应混合物终止激酶反应，并使用洗涤缓冲液洗涤混合物四次。为了测量磷酸化 PGT，每孔加入 50 μL HRP 缀合的 PY54 抗磷酸酪氨酸抗体，在封闭缓冲液（含 3% BSA 和 0.05% Tween 20 的 PBS）中孵育 25 分钟，稀释至 0.2 μg/mL。通过吸出抗体，使用洗涤缓冲液将板清洗四次。添加 TMB Microwell 过氧化物酶底物（每孔 50μL）以产生结肠信号。添加 0.09 M 硫酸（每孔 50μL）以终止信号。 450 nm 处的吸光度用于估计磷酸酪氨酸。对照信号与 10 分钟的孵育时间成正比，通常范围为 0.6 至 1.2 吸光度单位。在缺乏 AlP、EGFR 或 PGT 的孔中，信号可以忽略不计。

将呈指数生长的细胞（A549、H322、H3255、H358、H661、H1650、H1975、H1299 和 H596）一式三份接种到 96 孔塑料板中，并暴露于厄洛替尼、培美曲塞或 4:1 的恒定浓度比中72小时。除细胞计数外，还使用 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物测定法测量细胞活力。与 PBS 处理的对照细胞（被视为 100% 存活率）相比，经药物处理的对照细胞存活的比例称为生长抑制。 CalcuSyn 程序确定 IC50 值，即与未处理的对照细胞相比，药物暴露 72 小时导致细胞生长抑制 50% 的浓度。

Male 5-week-old BALB-nu/nu mice with HPAC
50 mg/kg
Oral administration

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[4]. Mol Cancer Ther. 2008 Jun;7(6):1708-19.

[5]. Mol Cancer Ther. 2006 Nov;5(11):2676-84.

[6]. Anticancer Drugs. 2004 Jun;15(5):503-12.

[7]. Oncol Lett. 2010 Mar;1(2):231-235.

C21H21N3O4.HCL

415.87

415.129

C, 66.48; H, 5.58; N, 11.08; O, 16.87

183320-51-6

Desmethyl Erlotinib;183321-86-0

18924996

White to off-white solid powder

3.626

85.73

3

7

10

29

511

0

OCCOC1=CC2=C(N=CN=C2NC3=CC=CC(C#C)=C3)C=C1OCCOC.Cl

BUOXOWNQZVIETJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H21N3O4.ClH/c1-3-15-5-4-6-16(11-15)24-21-17-12-19(27-8-7-25)20(28-10-9-26-2)13-18(17)22-14-23-21;/h1,4-6,11-14,25H,7-10H2,2H3,(H,22,23,24);1H

2-[4-(3-ethynylanilino)-7-(2-methoxyethoxy)quinazolin-6-yl]oxyethanol;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: Please store this product in a sealed and protected environment, avoid exposure to moisture.

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。