PRMT1 (IC50 = 30 nM); PRMT3 (IC50 = 119 nM); PRMT4 (IC50 = 83 nM); PRMT6 (IC50 = 4 nM); PRMT8 (IC50 = 5 nM)

在 MCF7 细胞中，MS023 抑制 PRMT1 甲基转移酶活性（1-1000 nM；48 小时）[1]。在 HEK293 细胞中，MS023（1-1000 nM；20 小时）抑制 PRMT6 甲基转移酶活性 [1]。

当与 PKC412（100 mg/kg，ig）联合使用时，MS023（160 mg/kg，ip）可通过阻止功能性 MLL-r ALL 起始细胞的维持来预防 MLL-r 急性淋巴细胞白血病 (ALL) 的生长。分散[2]。

PRMT生化测定[1]
闪烁邻近度测定（SPA）用于评估试验化合物对抑制PRMT催化的甲基转移反应的影响，如前所述。27简言之，氚化的S-腺苷-L-甲硫氨酸被用作甲基的供体。将（3H）甲基化生物素标记肽捕获在链亲和素/闪烁体包被的微孔板中，使掺入的3H甲基和闪烁体接近，从而产生发光，通过追踪TopCount NXT™微孔板闪烁和发光计数器测量的放射性信号（每分钟计数）来量化发光。必要时，使用非氚化SAM来补充反应。在平衡条件下，通过滴定反应混合物中的测试化合物，在底物和辅因子的Km浓度下测定IC50值。

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细胞PRMT1测定[1]
MCF7细胞在补充有10%FBS、青霉素（100单位mL−1）和链霉素（100μg mL−1。将40%汇合的细胞用不同浓度的MS023和化合物4-6以指定浓度或DMSO对照处理48小时。将细胞在100μL总裂解缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8、150 mM NaCl、1 mM EDTA、10 mM MgCl2、0.5%TritonX-100、12.5 U mL−1苯并酶、完全不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物）中裂解。在RT下孵育3分钟后，将SDS添加到最终1%的浓度。在SDS-PAGE上运行裂解物，并如下所述进行免疫印迹以在蛋白质印迹中测定H4R3me2a、精氨酸不对称二甲基化、精氨酰对称二甲基化和精氨酸单甲基化。

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细胞PRMT6测定[1]
HEK293细胞在补充有10%FBS、青霉素（100 U mL−1）和链霉素（100μg mL−1）的DMEM中的12孔板中生长。按照制造商的说明，使用jetPRIME®转染试剂（Polyplus Transferion），用FLAG标记的PRMT6或突变体V86K/D88A PRMT6（每孔1μg DNA）转染50%的融合细胞。4小时后移除培养基，并用指示浓度的MS023或DMSO对照处理细胞。20小时后，取出培养基，并在100μL的总裂解缓冲液中裂解细胞。

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： MCF7 和 HEK293 细胞
测试浓度： 1.4、4、12、37、111、333 和 1000 nM
孵育时间：MCF7 细胞为 48 小时； HEK293 细胞 20 小时
实验结果： 有效治疗且浓度依赖性降低 H4R3me2a 的细胞水平 (IC50=9±0.2 nM)。治疗浓度依赖性地降低 H3R2me2a 标记 (IC50=56±7 nM)。

Animal/Disease Models: NOD-scid IL2Rgnull (NSG) mice bearing primary MLL-r ALL cells[2]
Doses: 160 mg/kg
Route of Administration: intraperitoneal (ip)injection; PKC412 (100 mg/kg, ig), MS023 (160 mg/kg, ip ), or a combination for 4 weeks
Experimental Results: Combinatorial treatment extended survival of leukemic mice relative to single treatments.

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In vivo treatment of MLL-r ALL-engrafted mouse model[1]
For studying inducible short hairpin PRMT1 (shPRMT1), SEM cells stably expressing either doxycycline (DOX)-inducible short hairpin control (shCtrl) or PRMT1 short hairpin RNA (shRNA) (shPRMT1) were transplanted into irradiated immunodeficient NOD-scid IL2Rgnull (NSG) mice (1 × 106 cells per mouse). Each group was administered DOX treatment (10 mg/kg) orally for 3 weeks after engraftment. To assess R972/973 function in leukemogeneis, KOCL45 cells transduced with constructs expressing an FLT3 variant were sorted by using red fluorescent protein and injected into mice (1 × 105 cells per mouse), and mouse survival was monitored daily. To assess MS023 effects in vivo, we transplanted primary MLL-r ALL cells into NSG mice (0.5 × 106 cells per mouse). After engraftment, grouped mice were treated with vehicle, PKC412 (100 mg/kg, intragastrically), MS023 (160 mg/kg, intraperitoneally), or a combination for 4 weeks. After treatment, engrafted human cells were identified. Secondary transplantations of whole bone marrow (BM) cells from treated or control mice were then performed. Animal procedures were performed in accordance with federal and state government guidelines and established institutional guidelines and protocols approved by the Institutional Animal Care and Use Committee at City of Hope.

[1]. A Potent, Selective, and Cell-Active Inhibitor of Human Type I Protein Arginine Methyltransferases. ACS Chem Biol. 2016 Mar 18;11(3):772-81.

[2]. Targeting PRMT1-mediated FLT3 methylation disrupts maintenance of MLL-rearranged acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2019 Oct 10;134(15):1257-1268.

MS023 is a type I PRMTs inhibitor.

C17H25N3O

287.4

287.199

C, 71.04; H, 8.77; N, 14.62; O, 5.57

1831110-54-3

MS023 dihydrochloride;1992047-64-9;MS023 trihydrochloride;2108631-19-0

92136227

Typically exists as white to light yellow solids at room temperature

1.1±0.1 g/cm3

437.8±45.0 °C at 760 mmHg

218.6±28.7 °C

0.0±1.1 mmHg at 25°C

1.567

2.28

54.3Ų

2

3

7

21

290

0

O(C(C)C)C1C=CC(=CC=1)C1=CNC=C1CN(C)CCN

FMTVWAGUJRUAKE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H25N3O/c1-13(2)21-16-6-4-14(5-7-16)17-11-19-10-15(17)12-20(3)9-8-18/h4-7,10-11,13,19H,8-9,12,18H2,1-3H3

N1-((4-(4-isopropoxyphenyl)-1H-pyrrol-3-yl)methyl)-N1-methylethane-1,2-diamine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 53.33 mg/mL (185.56 mM) in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。