ML364

别名: ML364; ML 364; ML-364 2-[[(4-甲基苯基)磺酰基]氨基]-N-(4-苯基-2-噻唑基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺; ML-364

目录号: V2858 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

ML364 是泛素特异性肽酶 2（USP2，一种去泛素酶）的小分子抑制剂，生化测定中的 IC50 为 1.1 μm。

ML364 CAS号: 1991986-30-1
产品类别: DUB

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

纯度/质量控制文件

批次：

纯度: ≥98%

COA

MSDS

产品说明书

产品描述
生物活性&实验参考方法
化学信息
溶解度数据
计算器
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相关产品

产品描述

ML364 是泛素特异性肽酶 2（USP2，一种去泛素酶）的小分子抑制剂，生化测定中的 IC50 为 1.1 μm。 ML364 用于研究 USP2 及其假定底物细胞周期蛋白 D1 的生物学特性。 ML364 诱导细胞周期蛋白 D1 降解增加，并导致细胞周期停滞，如使用 Mino 和 HCT116 癌细胞系的蛋白质印迹和流式细胞术测定所示。 ML364 在癌细胞系中具有抗增殖作用。与细胞周期蛋白 D1 在 DNA 损伤反应中的作用一致，ML364 也导致同源重组介导的 DNA 修复减少。 ML364 的这些作用支持了 USP2 作为细胞周期、DNA 修复和肿瘤细胞生长调节剂的关键作用，并且 ML364 可用于乳腺癌研究。

生物活性&实验参考方法

靶点

USP2(IC50= 1.1 μM);USP2(Kd= 5.2 μM)

体外研究 (In Vitro)

体外活性：ML364 是泛素特异性肽酶 2（USP2，一种去泛素酶）的小分子抑制剂，生化测定中的 IC50 为 1.1 μm。 ML364 用于研究 USP2 及其假定底物细胞周期蛋白 D1 的生物学特性。 ML364 诱导细胞周期蛋白 D1 降解增加，并导致细胞周期停滞，如使用 Mino 和 HCT116 癌细胞系的蛋白质印迹和流式细胞术测定所示。 ML364 在癌细胞系中具有抗增殖作用。与细胞周期蛋白 D1 在 DNA 损伤反应中的作用一致，ML364 也导致同源重组介导的 DNA 修复减少。 ML364 的这些作用支持了 USP2 作为细胞周期、DNA 修复和肿瘤细胞生长调节剂的关键作用，并且 ML364 可用于乳腺癌研究。激酶测定：使用 Kinomescan (DiscoveRx, Fremont, CA)，测试了 102 种激酶被 10 μm ML364 抑制的情况。 MMP1 和 MMP9 数据是使用其标准条件（5 μm 的 FRET 肽）从 Reaction Biology（宾夕法尼亚州马尔文）获得的。使用 Promega（威斯康星州麦迪逊）的 Caspase 6 和 Caspase 3/7 Glo 试剂盒进行 Caspase 6 和 Caspase 7 测定。该试剂盒将半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶（即半胱天冬酶）的活性与荧光素酶偶联。首先，在 10 mm Hepes、pH 7.2、2 mm DTT、10% 甘油中加入 2.5 µl caspase 6（0.5 单位/ml；Enzo Life Sciences，Farmingdale，NY）和 caspase 7（0.5 单位/ml；Enzo Life Sciences）将 0.05% CHAPS 分配到白色 1536 孔板中。在此测定中，底物的厚度为 5 μm，这是制造商提供的底物的 Km。然后，使用针工具分配23nl化合物并在室温下孵育30分钟。最后，添加 2.5 μl caspase Glo 试剂（caspase Glo 6 或 caspase Glo 3/7），并使用 Viewlux 动态监测发光，总共 50 分钟（1 秒曝光）。细胞测定：将HCT116细胞以25,000个细胞/孔的密度接种到透明96孔板（Costar，Corning，Tewksbury，MA）中，并用化合物处理24小时。然后用 4% 多聚甲醛固定细胞 15 分钟，用 PBS、0.1% Triton X-100 透化 30 分钟，并用 2× 封闭缓冲液 (Sigma) 在室温下封闭 2 小时。每个步骤后，使用 BioTek Elx406 微孔板清洗机用 PBS 彻底清洗细胞。为了定量细胞周期蛋白 D1 蛋白水平，将细胞与小鼠抗细胞周期蛋白 D1（DCS6，Cell Signaling，1:500 稀释）在 1× 封闭缓冲液 (Sigma) 中于 4 °C 孵育过夜，然后与 HRP 缀合的抗细胞周期蛋白 D1 一起孵育过夜。小鼠 IgG（Cell Signaling，1:500 稀释）在 1× 封闭缓冲液 (Sigma) 中，室温下 2 小时。每次孵育后，使用 BioTek Elx406 微孔板清洗机用 PBS、0.1% Tween 20 清洗细胞。然后向每个孔中加入100μl TMB Liquid Substrate System for ELISA (Sigma)，显色5分钟后，通过添加等体积的1m HCl终止反应。在 Envision Multilabel 读板仪上对 450 nm 处的吸光度进行定量。

酶活实验

使用 Kinomescan (DiscoveRx, Fremont, CA)，测试了 102 种激酶被 10 μm ML364 抑制的情况。 MMP1 和 MMP9 数据是使用其标准条件（5 μm 的 FRET 肽）从 Reaction Biology（宾夕法尼亚州马尔文）获得的。使用 Promega（威斯康星州麦迪逊）的 Caspase 6 和 Caspase 3/7 Glo 试剂盒进行 Caspase 6 和 Caspase 7 测定。该试剂盒将半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶（即半胱天冬酶）的活性与荧光素酶偶联。首先，在 10 mm Hepes、pH 7.2、2 mm DTT、10% 甘油中加入 2.5 µl caspase 6（0.5 单位/ml；Enzo Life Sciences，Farmingdale，NY）和 caspase 7（0.5 单位/ml；Enzo Life Sciences）将 0.05% CHAPS 分配到白色 1536 孔板中。在此测定中，底物的厚度为 5 μm，这是制造商提供的底物的 Km。然后，使用针工具分配23nl化合物并在室温下孵育30分钟。最后，添加 2.5 μl caspase Glo 试剂（caspase Glo 6 或 caspase Glo 3/7），并使用 Viewlux 动态监测发光，总共 50 分钟（1 秒曝光）。

细胞实验

HCT116 细胞以 25,000 个细胞/孔的密度接种到透明 96 孔板（Costar，Corning，Tewksbury，MA）中，并用化合物处理 24 小时。然后用 4% 多聚甲醛固定细胞 15 分钟，用 PBS、0.1% Triton X-100 透化 30 分钟，并用 2× 封闭缓冲液 (Sigma) 在室温下封闭 2 小时。每个步骤后，使用 BioTek Elx406 微孔板清洗机用 PBS 彻底清洗细胞。为了定量细胞周期蛋白 D1 蛋白水平，将细胞与小鼠抗细胞周期蛋白 D1（DCS6，Cell Signaling，1:500 稀释）在 1× 封闭缓冲液 (Sigma) 中于 4 °C 孵育过夜，然后与 HRP 缀合的抗细胞周期蛋白 D1 一起孵育过夜。小鼠 IgG（Cell Signaling，1:500 稀释）在 1× 封闭缓冲液 (Sigma) 中，室温下 2 小时。每次孵育后，使用 BioTek Elx406 微孔板清洗机用 PBS、0.1% Tween 20 清洗细胞。然后向每个孔中加入100μl TMB Liquid Substrate System for ELISA (Sigma)，显色5分钟后，通过添加等体积的1m HCl终止反应。在 Envision Multilabel 读板仪上对 450 nm 处的吸光度进行定量。

动物实验

参考文献

J Biol Chem.2016 Nov 18;291(47):24628-24640;http://www.freepatentsonline.com/WO2016134026A1.html

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式

C24H18F3N3O3S2

分子量

517.54

精确质量

517.074

元素分析

C, 55.70; H, 3.51; F, 11.01; N, 8.12; O, 9.27; S, 12.39

CAS号

1991986-30-1

相关CAS号

1991986-30-1

PubChem CID

70789348

外观&性状

Light yellow to yellow solid powder

LogP

6.1

tPSA

125

氢键供体(HBD)数目

氢键受体(HBA)数目

可旋转键数目(RBC)

重原子数目

分子复杂度/Complexity

822

定义原子立体中心数目

SMILES

S(C1C([H])=C([H])C(C([H])([H])[H])=C([H])C=1[H])(N([H])C1C([H])=C(C(F)(F)F)C([H])=C([H])C=1C(N([H])C1=NC(=C([H])S1)C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])=O)(=O)=O

InChi Key

QZUGMNXETPARLI-UHFFFAOYSA-N

InChi Code

InChI=1S/C24H18F3N3O3S2/c1-15-7-10-18(11-8-15)35(32,33)30-20-13-17(24(25,26)27)9-12-19(20)22(31)29-23-28-21(14-34-23)16-5-3-2-4-6-16/h2-14,30H,1H3,(H,28,29,31)

化学名

2-[(4-Methylphenyl)sulfonylamino]-N-(4-phenyl-1,3-thiazol-2-yl)-4-(trifluoromethyl)benzamide

别名

ML364; ML 364; ML-364

HS Tariff Code

2934.99.9001

存储方式

Powder -20°C 3 years

4°C 2 years

In solvent -80°C 6 months

-20°C 1 month

运输条件

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO : 33~60 mg/mL ( 63.76~115.93 mM ) Ethanol : ~15 mg/mL
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 2.5 mg/mL (4.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More 配方 3 中的溶解度: 5% DMSO + Corn oil: 3mg/ml 配方 4 中的溶解度: 20 mg/mL (38.64 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO : 33~60 mg/mL ( 63.76~115.93 mM )
Ethanol : ~15 mg/mL

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 5% DMSO + Corn oil: 3mg/ml

配方 4 中的溶解度: 20 mg/mL (38.64 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.9322 mL	9.6611 mL	19.3222 mL
	5 mM	0.3864 mL	1.9322 mL	3.8644 mL
	10 mM	0.1932 mL	0.9661 mL	1.9322 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

ML364 induces cell cycle arrest and inhibits cell growth in HCT116 and Mino cells.J Biol Chem.2016 Nov 18;291(47):24628-24640. Epub 2016 Sep 28.
Kinomescan visualization for ML364 (10 μm) tested for binding to 102 kinases.J Biol Chem.2016 Nov 18;291(47):24628-24640. Epub 2016 Sep 28.
ML364 reduces cyclin D1 protein levels in a time-, dose-, and proteasome-dependent manner in HCT116 cells and Mino cells.J Biol Chem.2016 Nov 18;291(47):24628-24640. Epub 2016 Sep 28.
ML364 binds to USP2 and inhibits its activity, although a related chemical analog 2 does not.J Biol Chem.2016 Nov 18;291(47):24628-24640. Epub 2016 Sep 28.

ML364 directly targets cyclin D1 for degradation.J Biol Chem.2016 Nov 18;291(47):24628-24640. Epub 2016 Sep 28.

ML364

Inhibition of USP2 activity by ML364 causes a decrease in HR-mediated DNA repair.J Biol Chem.2016 Nov 18;291(47):24628-24640. Epub 2016 Sep 28.

ML364 exposure decreases cell viability and promotes cyclin D1 degradation in cancer cell lines.J Biol Chem.2016 Nov 18;291(47):24628-24640. Epub 2016 Sep 28.

ML364

Schematic showing the impact of ML364 on USP2, which leads to accelerated cyclin D1 degradation and subsequent G0/G1cell cycle arrest.J Biol Chem.2016 Nov 18;291(47): 24628-24640. Epub 2016 Sep 28.