| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
USP1-UAF1, in Ub-Rho assay(IC50=76 nM);USP1-UAF1(Ki= 68 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：ML323 通过抑制 H596 细胞中的 USP1-UAF1 活性来抑制 PCNA 和 FANCD2 的去泛素化。此外，ML323 通过靶向两种主要的 DNA 损伤反应途径（TLS 和 FA），增强顺铂对 NSCLC H596 细胞和 U2OS 骨肉瘤细胞的细胞毒性。激酶测定：对于 HTS，使用泛素-罗丹明 110 作为底物监测 USP1-UAF1 活性，其中泛素 C 端甘氨酸和罗丹明之间的酰胺键水解导致荧光增加。该测定在 1,536 孔格式中小型化至 4 μL 体积，用于在定量 HTS 模式下筛选大约 402,701 种化合物，每种化合物在四到五个浓度范围内进行测试。该测定显示出稳健的性能，整个屏幕的平均 Z' 因子为 0.8。细胞测定：对于集落形成测定，细胞以每孔 300-500 个细胞的密度接种在六孔板中并生长过夜。然后用指定浓度的单独 ML323、单独顺铂或顺铂和 ML323 组合（1:1 或 1:4）处理细胞。用等体积的DMSO和盐水处理的细胞用作对照。处理 48 小时后，添加新鲜生长培养基，并将细胞再培养 5-10 天，以形成集落。对于 UV 组合处理，用指定浓度的 ML323 或等体积的 DMSO 处理细胞。 48小时后，除去培养基，并以指定剂量在254 nm处照射细胞。添加新鲜的生长培养基，并将细胞再培养 5-10 天，以形成集落。将未经UV照射但用ML323或等体积DMSO处理的细胞作为对照并指定为100%。集落形成后，用甲醇固定细胞并用0.5%结晶紫染色。对由 >50 个细胞组成的集落进行评分。菌落数由一式三份的平板确定。使用 GraphPad Prism 生成剂量反应曲线，并使用 CalcuSyn 进行分析以计算组合指数，该指数是针对添加固定比例的顺铂和 USP1-UAF1 抑制剂后受影响的细胞分数确定的。
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| 体内研究 (In Vivo) |
ML323促进病毒在体内的复制。[2]
在腹腔注射LPS之前用ML323预处理小鼠。ML323治疗降低了血清IFN-β水平，但没有显著降低TNF-α的量（图5、G和H），表明ML323在体内具有活性。然后，我们研究了ML323在体内VSV感染背景下对IFN-β表达和病毒复制的调节作用。ML323处理抑制了VSV诱导的腹膜灌洗中IFN-β的产生（图5I），并抑制了腹膜渗出细胞中TBK1蛋白的表达（图5J）。此外，在ML323处理的小鼠的血清中，VSV感染诱导的IFN-β分泌远低于对照小鼠（图5K）。因此，ML323处理的小鼠的肝脏、肺和脾脏中IFN-βmRNA的表达低于对照组（图5L）。根据IFN-β表达的减少，ML323处理的小鼠的肝、肺和脾脏中的VSV复制高于对照组（图5M）。与VSV感染后的对照小鼠相比，在ML323处理的小鼠的肺中观察到免疫细胞的严重浸润（图5N）。总之，这些数据表明，ML323在体外和体内减弱了VSV诱导的IFN-β表达，从而促进了VSV的复制。 |
| 酶活实验 |
ML-323 以 10 μM 单剂量重复测试，用于 DUB 分析。作为底物，Ub-7-amido-4-methylcoumarin (AMC) 用于追踪 DUB 活性。斜率的初始线性部分（信号/分钟）是随时间分析的游离 AMC 荧光信号增加的唯一部分。当酶不含化合物时，其活性为 100%。 ML-323 从 20 μM 开始针对 70 种蛋白酶进行三倍系列稀释，以进行蛋白酶分析。在添加适当的酶底物之前，将化合物与蛋白酶预孵育五到十五分钟。通过分析荧光标记肽的荧光信号，可以确定酶的活性[1]。
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| 细胞实验 |
使用 CCK-8 溶液，细胞计数试剂盒 (CCK) 测定可确定细胞的活力。在六孔板中，细胞以每孔 300-500 个细胞的密度接种，用于集落形成测定，并在那里生长一整晚。然后，在指定浓度下，用单独的 ML-323、单独的顺铂或顺铂和 ML-323 的组合（1:1 或 1:4）处理细胞。作为对照，使用用相同体积的 DMSO 和盐水处理的细胞。为了实现集落形成，处理 48 小时后添加新鲜的生长培养基，然后将细胞再孵育 5-10 天。使用推荐浓度的 ML-323 或等体积的 DMSO 处理细胞以进行 UV 组合治疗。 48小时后除去培养基，并对细胞施加规定剂量的254 nm辐射。为了形成集落，添加新鲜的生长培养基，并将细胞再培养五到十天。作为对照，未暴露于紫外线但用 ML-323 或等量 DMSO 处理的细胞表示为 100%。集落形成后，用甲醇固定细胞并用 0.5% 结晶紫染色。细胞数超过 50 个的集落会被评分。一式三份的板用于计算菌落数。使用 GraphPad Prism 创建剂量反应曲线，并使用 CalcuSyn 进行分析以确定组合指数，该指数基于添加固定的后受影响细胞的百分比顺铂和 USP1-UAF1 抑制剂的比例[1]。
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| 动物实验 |
In vivo LPS challenge[3]
C57BL/6J mice (females, 6–8 wk old) were i.p. injected with 10 mg/kg ML323 for 6 h and then i.p. injected with 10 mg/kg LPS for 2 h. Serum levels of IFN-β and TNF-α were measured by ELISA. Viral pathogenesis in mice[3] C57BL/6J mice (females, 8 wk old) were i.p. infected with VSV (5 × 107 PFU/mouse). 10 mg/kg ML323 was i.p. administered 6 h before VSV infection. Lungs from control or virus-infected mice were dissected, fixed in 10% (vol/vol) phosphate-buffered formalin, embedded into paraffin, sectioned, stained with hematoxylin and eosin (H&E) solution, and examined by light microscopy for histological changes. |
| 参考文献 |
[3]. J Exp Med. 2017 Dec 4; 214(12): 3553–3563.
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| 其他信息 |
Optimal activation of TANK-binding kinase 1 (TBK1) is crucial for initiation of innate antiviral immunity and maintenance of immune homeostasis. Although several E3 ubiquitin ligases have been reported to regulate TBK1 activation by mediating its polyubiquitination, the functions of deubiquitinase on TBK1 activity remain largely unclear. Here, we identified a deubiquitinase complex, which is formed by ubiquitin specific peptidase 1 (USP1) and USP1-associated factor 1 (UAF1), as a viral infection-induced physiological enhancer of TBK1 expression. USP1-UAF1 complex enhanced TLR3/4 and RIG-I-induced IFN regulatory factor 3 (IRF3) activation and subsequent IFN-β secretion. Mechanistically, USP1 and UAF1 bound to TBK1, removed its K48-linked polyubiquitination, and then reversed the degradation process of TBK1. Furthermore, we found that ML323, a specific USP1-UAF1 inhibitor, attenuated IFN-β expression and enhanced viral replication both in vitro and in vivo. Therefore, our results outline a novel mechanism for the control of TBK1 activity and suggest USP1-UAF1 complex as a potential target for the prevention of viral diseases.[3]
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| 分子式 |
C23H24N6
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|---|---|---|
| 分子量 |
384.480
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| 精确质量 |
384.206
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| 元素分析 |
C, 71.85; H, 6.29; N, 21.86
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| CAS号 |
1572414-83-5
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
60167849
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| 外观&性状 |
White solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
515.4±60.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
265.5±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.651
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| LogP |
4.61
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| tPSA |
68.52
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
492
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
N([H])(C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])N1C([H])=C([H])N=N1)C1C(C([H])([H])[H])=C([H])N=C(C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])N=1
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| InChi Key |
VUIRVWPJNKZOSS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H24N6/c1-16(2)20-6-4-5-7-21(20)23-24-14-17(3)22(27-23)25-15-18-8-10-19(11-9-18)29-13-12-26-28-29/h4-14,16H,15H2,1-3H3,(H,24,25,27)
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| 化学名 |
N-(4-(1H-1,2,3-triazol-1-yl)benzyl)-2-(2-isopropylphenyl)-5-methylpyrimidin-4-amine
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 49~76 mg/mL ( 127.44~197.66 mM )
Ethanol : ~38 mg/mL |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6009 mL | 13.0046 mL | 26.0092 mL | |
| 5 mM | 0.5202 mL | 2.6009 mL | 5.2018 mL | |
| 10 mM | 0.2601 mL | 1.3005 mL | 2.6009 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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TCID
RA-9 UPS inhibitor
LDN-57444
IU1-47
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