ML221

别名: ML 221; ML221; ML-221

目录号: V3030 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

ML221 是 apelin (APJ) 受体的有效功能拮抗剂。

ML221 CAS号: 877636-42-5
产品类别: APJ

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

纯度/质量控制文件

批次：

纯度: ≥98%

COA

MSDS

产品说明书

产品描述
生物活性&实验参考方法
化学信息
溶解度数据
计算器
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产品描述

ML221 是 apelin (APJ) 受体的有效功能拮抗剂。它源自使用 MLSMR 库的 HTS，该库收集了约 330,600 种化合物。 ML221 抑制 apelin-13 介导的 APJ 激活，cAMP 测定中的 IC50 为 0.70 μM，β-arrestin 测定中的 IC50 为 1.75 μM，两种测定中的 EC 80 均为 10 nM。在基于细胞的检测中，ML221 对 APJ 的选择性是密切相关的血管紧张素 II 1 型 (AT1) 受体的 37 倍以上。除 κ-阿片类药物和苯二氮卓酮受体外，该拮抗剂对其他 29 种 GPCR 没有显着的结合活性（10 μM 时 <50/<70%I）。

生物活性&实验参考方法

靶点

APJ ( IC50 = 1.75 μM )

体外研究 (In Vitro)

体外活性：将细胞（血管紧张素 II 受体样 1 (AGTRL-1) 细胞系（DiscoveRx，目录号 93-0250C2））以 1000 个细胞/孔（1536 板，Corning）接种在 4 μL 中并培养过夜（16 -18 小时），37°C，5% CO2，100% 湿度，然后将 60 nL DMSO 对照或 2 mM DMSO 储备测试化合物转移到每个孔中，然后加入 2 μL 30 nM Apelin-13 至阴性对照和测试化合物孔，以及阳性对照孔中加入 2 μL 测定培养基（补充有 10% hi-FBS、1×青霉素/链霉素的 F12 营养混合物 HAM）。这样得到的测试化合物的最终浓度为 20 μM，最终 DMSO 为 1%。检测在室温下孵育 90 分钟，然后用 3 μL 检测试剂（PathHunter 检测试剂（DiscoveRx，目录号 93-0001））显色 60 分钟，并在 Perkin Elmer ViewLux 上读取发光读数。激酶测定：使用两种互补的 APJ 功能测定来评估 ML221 对 apelin-13 介导的 APJ 激活的拮抗作用；抑制 cAMP 和募集 β-arrestin。在两种测定中，增加 ML221 的浓度会拮抗固定浓度的 Ap13 (EC80 = 10 nM)，计算出的 IC50 在 cAMP 测定中等于 0.70 μM，在 β-arrestin 测定中等于 1.75 μM。细胞测定：根据制造商的说明（Phoenix Pharmaceuticals, INC.），使用 Apelin-36（人）EIA 试剂盒，从 H69 和选定的 CCA 细胞系的上清液（37°C 孵育 48 小时）测量 Apelin 水平。根据方案一式三份制备未稀释的样品（50 mL）。在微孔板分光光度计（VersaMax，Molecular Devices，Sunnyvale，CA）上测量 450 nm 处的吸光度 OD。使用 PRISM® 软件 (GraphPad) 制作标准曲线并计算每个样品中 apelin 的浓度。数据表示为平均浓度±SEM。

体内研究 (In Vivo)

将八周龄的雄性 BALB/c 裸鼠 (nu/nu) 饲养在温度和光照受控的环境中，可自由获取饮用水和啮齿动物食物。将 300 万个 Mz-ChA-1 细胞悬浮在细胞外基质凝胶中，并皮下注射到这些裸鼠的后侧。通过尾静脉注射每周 3 次对小鼠进行 ML221 (150 μg/kg) 治疗，持续 4 周。使用电子卡尺每周测量肿瘤生长3次，体积测定如下：肿瘤体积(mm 3 )=长度(mm)×宽度(mm)×高度(mm)。允许肿瘤生长直至达到 Baylor Scott & White Healthcare IACUC 肿瘤负荷政策规定的最大允许肿瘤负荷。治疗4周后，用戊巴比妥钠（50mg/kg ip）对小鼠实施安乐死。使用购自 ScyTek Laboratories, INC 的 H&E 染色试剂盒进行苏木精和伊红 (H&E) 染色。通过阳性 IHC 染色和细胞角蛋白-19 (CK-19)（一种胆管细胞特异性标记物）的免疫印迹，证实肿瘤主要是 CCA 细胞。 IHC 和免疫印迹用于证明 APLNR、p-ERK 和 t-ERK 的表达。使用购自 abcam 的小鼠单克隆抗 α 微管蛋白抗体，将 α 微管蛋白用作相对对照。通过测量增殖标记物（PCNA、Ki-67）、血管生成标记物（VEGF-A、VEGF-C、Ang-1 和 Ang-2）和肿瘤进展标记物（Vimentin、MMP-9、MMP-3）（Qiagen）使用上述方案进行 rtPCR。

酶活实验

ML221 对 apelin-13 介导的 APJ 激活的拮抗作用通过两种互补的 APJ 功能测定进行评估：β-arrestin 募集和 cAMP 抑制。在两种测定中，增加 ML221 的浓度会拮抗固定浓度的 Ap13 (EC80 = 10 nM)，计算出的 IC50 在 cAMP 测定中等于 0.70 μM，在 β-arrestin 测定中等于 1.75 μM。

细胞实验

bEnd 的扩增。与 ML221 (0-30 μM) 孵育 24 小时后，使用 BrdU 掺入测定和 MTT 测定对 3 个细胞进行评估。 bEnd 是一种小鼠内皮细胞系 Dulbecco 改良的 Eagle 培养基，用 10% 热灭活胎牛血清增强，用于维持三个细胞。对于 MTT 和 BrdU 掺入测定，将细胞以 2.5 × 10⁴/孔的密度接种在 24 孔培养板中。为了进行 BrdU 掺入测定，将 10 μM BrdU 添加到培养基中。 2小时后用4%多聚甲醛固定细胞10分钟。链霉亲和素异硫氰酸荧光素与生物素化的山羊抗小鼠 IgG 抗体相结合，可以实现一抗的可视化。要检测细胞核，请使用 Hoechst 33342。每个 Hoechst 阳性细胞的 BrdU 阳性细胞数用于计算 BrdU 掺入率。

动物实验

150 μg/kg; 3× weekly via tail vein injection for 4 weeks

Male BALB/c eight week old nude (nu/nu) mice

参考文献

[1]. Bioorg Med Chem Lett . 2012 Nov 1;22(21):6656-60.

[2]. Cancer Lett . 2017 Feb 1:386:179-188.

其他信息

4-nitrobenzoic acid [4-oxo-6-[(2-pyrimidinylthio)methyl]-3-pyranyl] ester is a nitrobenzoic acid.

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式

C17H11N3O6S

分子量

385.04

精确质量

385.037

元素分析

C, 52.99; H, 2.88; N, 10.90; O, 24.91; S, 8.32

CAS号

877636-42-5

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

Representative dose response curve for ML221.Bioorg Med Chem Lett. 2012 Nov 1; 22(21): 6656–6660.
GPCR profiling panel forML221.Bioorg Med Chem Lett. 2012 Nov 1; 22(21): 6656–6660.
A: Positive APLNR staining by IHC in four human CCA tissues (bottom row) compared to adjacent non-malignant liver tissues (top row).Cancer Lett.2017Feb 1;386:179-188.

ML221

A: Treatment of benign human cholangiocytes (H69) with 10 μM of ML221 over 24 h increased Ki-67 gene expression, but significantly decreased expression of angiogenic factors (VEGF-A, VEGF-C, Ang-1, and Ang-2) via rtPCR. B. Treatment of HuH-28 cholangiocarcinoma cells with 10 μM of ML221 over 24 h significantly decreased Ki-67 gene expression, as well as angiogenic factors (VEGF-A, VEGF-C, Ang-1, and Ang-2) via rtPCR. C. Treatment of SG231 cholangiocarcinoma cells with 10 μM of ML221 over 24 h significantly decreased Ki-67 gene expression, as well as angiogenic factors (VEGF-A, VEGF-C, Ang-1, and Ang-2) via rtPCR.

Cancer Lett.2017Feb 1;386:179-188.

ML221

A: Apelin treatment promotes Mz-ChA-1 gene expression of Ki-67 and PCNA (left), whereas, ML221 treatment decreases Mz-ChA-1 gene expression of Ki-67 and PCNA in a dose dependent manner (n = 5) via rtPCR. B: Gene expression of angiogenic factors (VEGF-A, Ang-1, and Ang-2) is increased when Mz-ChA-1 cells are treated with increasing concentrations of apelin (left), whereas, gene expression is decreased with increasing concentrations of ML221, an APLNR antagonist (right) (n = 5) via rtPCR. C: 10 μM of ML221 treatment significantly decreases cell proliferation and migration at 6, 12, 24, and 48 h during wound-healing assay (* = P < 0.05). D: Mz-ChA-1 cell invasiveness did not significantly change following treatment with 10 μM of ML221 for 24 h compared to untreated control cells.Cancer Lett.2017Feb 1;386:179-188.

ML221

A: Parenteral administration of ML221 in nu/nu mice decreases Mz-ChA-1 tumor size (bottom row) compared to untreated control tumors (top row). B: Mz-ChA-1 tumor volume significantly increases in untreated control tumors (n = 9) compared to ML221 treated tumors (n = 12). C: H&E staining of control (left) and ML221 treated (right) Mz-ChA-1 tumors isolated from nu/nu mice.

ML221

A: Immunoblots of protein isolated from control and ML221 treated Mz-ChA-1 tumors shows expression of CK-19. p-ERK and t-ERK expression is decreased in ML221 treated Mz-ChA-1 tumors compared to untreated Mz-ChA-1 tumors. B: Control and ML221 treated Mz-ChA-1 tumors demonstrate positive staining for CK-19, a cholangiocyte specific marker, shown by IHC. C: IHC shows positive staining for APLNR in control and ML221 treated Mz-ChA-1 tumors. D. Mz-ChA-1 tumors treated with ML221 demonstrated decreased gene expression of proliferative markers (PCNA, Ki-67), angiogenic factors (VEGF-A, VEGF-C, Ang-1, and Ang-2), and markers of tumor progression (Vimentin, MMP-9, MMP-3) via rtPCR.

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	2.5971 mL	12.9857 mL	25.9713 mL
	5 mM	0.5194 mL	2.5971 mL	5.1943 mL
	10 mM	0.2597 mL	1.2986 mL	2.5971 mL