Lificiguat (YC 1)   中文名称: 利非西呱,YC-1

sGC ( Kd = 0.6-1.1 μM )

可溶性鸟苷酸环化酶 (sGC) 是一种异二聚体血红素蛋白，也是主要的 NO 受体。 Liificiguat (YC-1) 靠近或直接结合到 β 亚基的含血红素结构域。在没有 CO 的情况下，Lificiguat (YC-1) 的结合 Kd=9-21 μM，具体取决于构建体。当存在 CO 时，这些值会降低至 0.6-1.1 μM。正如预期的那样，Lificiguat (YC-1) 大大增强了 CO 与异二聚体 sGC 的结合 (Kd=1 μM)。在没有 NO 的情况下，Lificiguat (YC-1) 可刺激 sGC 两到四倍，但与 CO 或 NO 协同作用可实现数百倍的激活。 Lificiguat(YC-1) 的结合也可以克服 sGC 的抑制性磷酸化[1]。 Lificiguat (YC-1) 是一种可溶性鸟苷酸环化酶 (sGC) 激活剂。 HCC 细胞系 HepG2、BEL-7402 和 HCCLM3 与索拉非尼和/或 Lificiguat (YC-1) 一起孵育 72 小时。索拉非尼或 Lificiguat (YC-1) 单独以剂量依赖性方式抑制 HCC 细胞增殖。此外，Sorafenib 和 Lificiguat (YC-1) 的组合以剂量依赖性方式显着抑制 HCC 细胞的增殖。此外，在索拉非尼和 Lificiguat (YC-1) 的 ED50 剂量下，HepG2 中的组合指数值 (CI)=0.93，BEL-7402 中为 0.95，HCCLM3 中为 0.72，表明索拉非尼和 Lificiguat (YC-1)协同抑制HCC细胞增殖[2]。

Lificiguat (YC-1)（30 或 60 mg/kg，腹腔注射）以剂量依赖性方式抑制 MDA-MB-468 肿瘤生长。还研究了 Lificiguat (YC-1) 的前药制剂 YC-1-S 在 MDA-MB-468 荷瘤小鼠中的作用。体内药代动力学分析表明，YC-1-S 很快转化为其活性形式。小鼠以 20、40 或 80 mg/kg YC-1-S po 给药，YC-1-S 还表现出对 MDA-MB468 肿瘤生长的剂量依赖性抑制。 Lificiguat (YC-1) 和 YC-1-S 均可剂量依赖性地降低肿瘤重量。此外，与载体治疗组相比，小鼠的平均体重不受 Liificiguat (YC-1) 或 YC-1-S 的影响[3]。 Liificiguat (YC-1) 是一种有效的 NO-GC 激活剂，据报道在莫里斯水迷宫 (MWM) 和回避测试中可以改善啮齿动物的学习行为。 Lificiguat (YC-1) 通过 NO-cGMP-PKG 依赖性途径增强海马 Schafer 侧支 CA1 突触的长时程增强 (LTP)，并增强杏仁核中的 LTP 诱导，增加 ERK 的激活，并增强脑源性神经营养因子（BDNF）cAMP反应元件结合蛋白（CREB）对恐惧记忆测试的反应[4]。

在将饱和溶液中的 CO 滴定到 sGC 蛋白中的同时，监测 CO 结合的 Soret 吸收带的出现，以确定 CO 解离常数。将过量的连二亚硫酸盐添加到已清除 Ar 的缓冲液中，以制备 Ms sGC β₁(1-380) 和 Bt sGC β₁(1-197) 样品。使用带有改进样品架的 Cary 50 分光光度计，在 10 cm 光程比色皿中对 Ms sGC-β₁(1-380) 和 Ms sGC-NT21 进行 CO 结合实验。 SigmaPlot 中的单位点饱和配体结合模型用于绘制存在和不存在 50 μM Liificiguat (YC-1) 的情况下的结合数据。

测量细胞增殖的测定使用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)。简而言之，将3×10³/孔的细胞在96孔板中培养，孵育24小时，然后用Lificiguat (YC-1)或索拉非尼处理。每个孔在 72 小时处理后添加 CCK-8 试剂。 37°C 孵育 2.5 小时后，使用自动 ELISA 酶标仪在 450 nm 处测量吸光度。利用Microsoft Excel软件，测量由化合物组合产生的任何协同效应，以计算组合指数值(CI>1：拮抗效应，CI=1：相加效应，CT<1：协同效应)。

Mice: The nu/nu mice used are fifty-eight females that are four weeks old. The mammary fat pads of naked mice are inoculated with MDA-MB-468 breast cancer cells (5×10⁶ cells/mouse) suspended in 0.1 mL of Matrigel solution (50% v/v Matrigel in PBS). The tumor-bearing mice are randomly assigned to treatment groups after the tumor masses reach 100 mm³. These groups receive varying doses of Lificiguat (YC-1)/YC-1-S. A YC-1 injection (30 or 60 mg/kg) or a YC-1-S oral administration is given to the mice. Tumor volume (mm³) is computed using the formula length×(width)²×0.5. Tumor size and mouse body weight are measured once every three days. Tumor nodules are removed and weighed when the experiments are over and the mice are put down. Western blotting is used to examine tumor samples.
Rats: Male Wistar albino rats, ages 4 months (200-250 g) and 24 months (550-600 g), are utilized. Before use, ligiguat (YC-1) is prepared and administered intraperitoneally (i.p.) in a dose of 0.1 mL per 100 g of body weight. For two weeks, each rat was given 1 mg/kg/day of ligiguat (YC-1). Rats that are 4 months and 24 months old (n = 10, for each group) are given DMSO. All outcomes are measured, and doses are chosen to validate the chosen doses on locomotor activity.

[1]. Proc Natl Acad Sci U S A . 2001 Nov 6;98(23):12938-42.

[2]. J Natl Cancer Inst . 2003 Apr 2;95(7):516-25.

Lificiguat is a member of the class of indazoles that is 1H-indazole which is substituted by a benzyl group at position 1 and a 5-(hydroxymethyl)-2-furyl group at position 3. It is an activator of soluble guanylate cyclase and inhibits platelet aggregation. It has a role as an antineoplastic agent, a soluble guanylate cyclase activator, an apoptosis inducer, a platelet aggregation inhibitor and a vasodilator agent. It is a member of indazoles, a member of furans and an aromatic primary alcohol.

C19H16N2O2

304.34

304.121

C, 74.98; H, 5.30; N, 9.20; O, 10.51

170632-47-0

170632-47-0

5712

White solid powder

1.2±0.1 g/cm3

522.2±50.0 °C at 760 mmHg

269.6±30.1 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.653

3.55

51.19

1

3

4

23

386

0

O1C(C([H])([H])O[H])=C([H])C([H])=C1C1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N(C([H])([H])C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])N=1

OQQVFCKUDYMWGV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H16N2O2/c22-13-15-10-11-18(23-15)19-16-8-4-5-9-17(16)21(20-19)12-14-6-2-1-3-7-14/h1-11,22H,12-13H2

[5-(1-benzylindazol-3-yl)furan-2-yl]methanol

Lificiguat; YC1; YC 1; YC-1

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~61 mg/mL (~200.43 mM)
Ethanol: ~31 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (8.21 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。