规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
---|---|---|---|
5mg |
|
||
10mg |
|
||
25mg |
|
||
50mg |
|
||
100mg |
|
||
250mg |
|
||
500mg |
|
||
Other Sizes |
|
靶点 |
ATM ( IC50 = 12.9 nM ); DNA-PK ( IC50 = 2500 nM ); mTOR ( IC50 = 9300 nM ); PI3K ( IC50 = 16600 nM )
|
---|---|
体外研究 (In Vitro) |
体外活性:KU-55933 抑制 DNA-PK 和 PI3K,IC50 分别为 2.5 μM 和 16.6 μM。此外,KU-55933 还可以抑制 mTOR 的活性,IC50 为 9.3 μM。 KU-55933 在细胞水平上活跃,可消除已充分表征的 ATM 依赖性磷酸化事件。 KU-55933 抑制这种 ATM 依赖性磷酸化事件具有剂量依赖性作用,IC50 为 300 nM。 KU-58050 在剂量为 30 μM 之前不会阻止 p53 丝氨酸 15 的 ATM 依赖性磷酸化。添加 KU-55933 对紫外线诱导的丝氨酸 139 上的 H2AX、丝氨酸 343 上的 NBS1、丝氨酸 345 上的 CHK1 和丝氨酸 966 上的 SMC1 磷酸化没有明显影响。与紫外线反应形成鲜明对比的是,KU-55933 消除了电离这些 ATM 底物的辐射诱导磷酸化。 KU-55933 使 HeLa 细胞对一系列电离辐射剂量敏感。 KU-55933 抑制癌细胞中生长因子诱导的 Akt 磷酸化。 KU-55933 抑制癌细胞的增殖。此外,KU-55933 抑制 ATM 可以提高生存率,这可能是通过阻止 TAp63α 下游激活来实现的。激酶测定:用于体外测定的 ATM 是通过用兔多克隆抗血清进行免疫沉淀从 HeLa 核提取物中获得的,该血清在含有 25 mM HEPES (pH 7.4)、2 mM MgCl2、250 的缓冲液中升至 ATM 的 COOH 末端 400 个氨基酸mM KCl、500 μM EDTA、100 μM Na3VO4、10% v/v 甘油和 0.1% v/v Igepal。通过与 Protein A-Sepharose 珠子一起孵育 1 小时,然后通过离心回收珠子,从核提取物中分离出 ATM-抗体复合物。在 96 孔板的孔中,将含有 ATM 的琼脂糖珠与 1 μg 底物谷胱甘肽 S-转移酶 -p53N66(p53 的 NH2 末端 66 个氨基酸与谷胱甘肽 S-转移酶融合)在 ATM 测定缓冲液中孵育 [25 mM HEPES (pH 7.4)、75 mM NaCl、3 mM MgCl2、2 mM MnCl2、50 μM Na3VO4、500 μM DTT 和 5% v/v 甘油],37 °C,存在或不存在抑制剂。轻轻摇动 10 分钟后,添加 ATP 至终浓度 50 μM,并在 37 °C 下继续反应 1 小时。将板以 250 × g 离心 10 分钟(4 °C),除去含有 ATM 的珠子,取出上清液,转移至白色不透明 96 孔板中,室温孵育 1.5 小时,使谷胱甘肽S-转移酶-p53N66 结合。然后用 PBS 清洗该板,吸干,并使用磷酸丝氨酸 15 p53 抗体通过标准 ELISA 技术进行分析。磷酸化谷胱甘肽 S-转移酶-p53N66 底物的检测是与山羊抗小鼠辣根过氧化物酶缀合的二抗结合进行的。使用增强化学发光溶液产生信号并进行化学发光检测。 细胞测定:U2OS 细胞暴露于电离辐射(3、5 或 15 Gy)或紫外线(5 或 50 J/m2),ATM 响应由下式确定: p53 丝氨酸 15 磷酸化和野生型 p53 稳定性的蛋白质印迹分析。从每个时间点获得全细胞提取物,通过 SDS-PAGE 分离蛋白质,并使用 p53 磷酸丝氨酸 15 特异性抗体测量磷酸化丝氨酸 15 的 ATM 特异性增加。使用 p53 特异性抗体 (DO-1) 还可以观察到 p53 随着时间的推移总体稳定。同样,为了研究 H2AX、CHK1、NBS1 和 SMC1 上的 ATM 依赖性磷酸化,使用以下抗体:CHK1 磷酸丝氨酸 345 和 NBS1 磷酸丝氨酸 343 抗体。还使用组蛋白 H2A (H-124) 和 CHK1 抗体,以及 SMC1 和 SMC1 磷酸丝氨酸 966 抗体。为了测定 KU-55933 的细胞 IC50,使用 2 小时的 p53 丝氨酸 15 磷酸化峰值响应时间来监测 ATM 的抑制。在电离辐射之前,将 KU-55933 滴定到细胞上并预孵育 1 小时。使用扫描密度测定法,计算相对于载体对照的抑制百分比,并计算体外测定的IC50值。
|
体内研究 (In Vivo) |
KU-55933 抑制 ATM 依赖性 STAT3 激活可通过上调表面 DR5 表达来增强 TRAIL 介导的细胞凋亡,而抑制 STAT3 和 NF-κB 似乎参与了 cFLIP 的下调,并伴随着 cFLIP 的额外增加。凋亡水平。 ATM 抑制剂 KU-55933 对 TRAIL 介导的细胞凋亡的影响比 JAK2 抑制剂 AG490 或 STAT3β 过表达更强。
|
酶活实验 |
为了获得用于体外测定的 ATM,使用涉及用 25 mM HEPES (pH 7.4)、2 mM 缓冲混合物的方法,从 HeLa 核提取物中免疫沉淀 ATM 的 COOH 末端 400 个氨基酸的兔多克隆抗血清。 MgCl2、250 mM KCl、500 μM EDTA、100 μM Na3VO4、10% v/v 甘油和 0.1% v/v Igepal。与 Protein A-Sepharose 珠子一起孵育一小时并随后离心回收珠子后,ATM-抗体复合物从核提取物中分离出来。 96 孔板的孔用于在 ATM 测定缓冲液 [25 mM HEPES ( pH 7.4)、75 mM NaCl、3 mM MgCl2、2 mM MnCl2、50 μM Na3VO4 sub>、500 μM DTT 和 5% v/v 甘油],37 °C,有或没有抑制剂。轻轻摇动 10 分钟后添加 ATP 至终浓度 50 μM,然后在 37 °C 下继续反应 1 小时。将板以 250 × g 离心 10 分钟 (4 °C),以去除含有 ATM 的珠子,从而使谷胱甘肽 S-转移酶 -p53N66 结合发生。然后取出上清液并放入白色不透明96孔板中。该孵育过程在室温下需要 1.5 小时。该板的后续步骤是 PBS 清洗、干印迹和使用磷酸丝氨酸 15 p53 抗体的标准 ELISA 分析。当使用与山羊抗小鼠辣根过氧化物酶缀合的二抗时,可以检测到磷酸化谷胱甘肽 S-转移酶-p53N66 的底物。创建信号和化学发光检测的过程涉及使用增强的化学发光溶液。进行化学发光检测并使用增强的化学发光溶液产生信号。
|
细胞实验 |
ATM 反应通过对暴露于电离辐射(3、5 或 15 Gy)或 UV(5 或 50 J/m< sup>2)。提取每个时间点的全细胞提取物,使用 SDS-PAGE 分离蛋白质,并使用 p53 磷酸化丝氨酸 15 特异性抗体来测量磷酸化丝氨酸 15 的 ATM 特异性增加。当使用 p53 特异性抗体 (DO- 1),随着时间的推移,p53 总体稳定。同样,以下抗体用于研究 H2AX、CHK1、NBS1 和 SMC1 上的 ATM 依赖性磷酸化:NBS1 磷酸丝氨酸 343 和 CHK1 磷酸丝氨酸 345 抗体。还使用 SMC1 和 SMC1 磷酸丝氨酸 966 抗体,以及抗组蛋白 H2A (H-124) 和 CHK1 的抗体。 p53 丝氨酸 15 磷酸化的两小时峰值响应时间用于追踪 ATM 抑制,以确定 KU-55933 的细胞 IC50。在应用电离辐射之前,将 KU-55933 滴定到细胞上并预孵育一小时。 IC 50 值的测定与体外测定类似,并且使用扫描密度测定法计算相对于媒介物对照的抑制百分比。
|
动物实验 |
BALB/c nu/nu nude mice bearing LU1205 cells
10 μM |
参考文献 |
">[1]. Cancer Res
. 2004 Dec 15;64(24):9152-9.
|
分子式 |
C21H17NO3S2
|
|
---|---|---|
分子量 |
395.49
|
|
精确质量 |
395.064
|
|
元素分析 |
C, 63.77; H, 4.33; N, 3.54; O, 12.14; S, 16.22
|
|
CAS号 |
587871-26-9
|
|
相关CAS号 |
|
|
外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
|
密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
|
沸点 |
628.0±55.0 °C at 760 mmHg
|
|
熔点 |
229.98° C
|
|
闪点 |
333.6±31.5 °C
|
|
蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
|
|
折射率 |
1.714
|
|
LogP |
6.13
|
|
tPSA |
93.28
|
|
SMILES |
S1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2SC2=C([H])C([H])=C([H])C(=C12)C1=C([H])C(C([H])=C(N2C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C2([H])[H])O1)=O
|
|
InChi Key |
XRKYMMUGXMWDAO-UHFFFAOYSA-N
|
|
InChi Code |
InChI=1S/C21H17NO3S2/c23-14-12-16(25-20(13-14)22-8-10-24-11-9-22)15-4-3-7-19-21(15)27-18-6-2-1-5-17(18)26-19/h1-7,12-13H,8-11H2
|
|
化学名 |
2-morpholin-4-yl-6-thianthren-1-ylpyran-4-one
|
|
别名 |
|
|
HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
|
存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
|
运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
溶解度 (体外实验) |
|
|||
---|---|---|---|---|
溶解度 (体外实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 5% DMSO and 47.5% PEG300: 10mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
1 mM | 2.5285 mL | 12.6425 mL | 25.2851 mL | |
5 mM | 0.5057 mL | 2.5285 mL | 5.0570 mL | |
10 mM | 0.2529 mL | 1.2643 mL | 2.5285 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Suppression of ATM activity by KU-55933 increased G2/M cell cycle arrest after γ-irradiation. Cancer Res . 2009 Apr 15;69(8):3510-9. td> |
KU-55933 increased DR5 surface expression and TRAIL-mediated apoptosis of γ-irradiated LU1205 and WM35 melanoma cells. Cancer Res . 2009 Apr 15;69(8):3510-9. td> |
Effect of KU-55933 and KU-58050 on cellular survival of HeLa and A-T fibroblasts in response to ionizing radiation. Cancer Res . 2004 Dec 15;64(24):9152-9 td> |
Potentiation of topoisomerase poison induced killing by KU-55933 but not KU-58050. Cancer Res . 2004 Dec 15;64(24):9152-9 td> |