EGFR(L858R/T790M)

用 JBJ-04-125-02（0-1000 nM；72 小时）处理的 H1975 细胞在低纳摩尔浓度下表现出细胞生长减少 [1]。在转染 EGFRL858R、EGFRL858R/T790M 或 EGFRL858R/T790M/C797S 突变的 Ba/F3 细胞中，JBJ-04-125-02 疗法还可抑制细胞增殖 [1]。在 Ba/F3、H1975 和 NIH-3T3 细胞中，研究了 JBJ-04-125-02 (0.01-10 μM) 对 EGFR 磷酸化的抑制作用。 JBJ-04-125-02 抑制 AKT 和 ERK1/2 以及突变型 EGFR 的下游磷酸化，表现出突变体选择性 [1]。

使用 JBJ-04-125-02（50 mg/kg；口服灌胃；每天一次；持续 15 周；EGFRL858R/T790M/C797S 转基因小鼠）治疗 4 周内观察到肿瘤显着消退 [1]。接受 3 mg/kg 静脉 (IV) 剂量后，JBJ-04-125-02 显示出较高的曲线下面积 (728,577 min·ng/mL) 和 3 小时的中等半衰期。当JBJ-04-125-02以20mg/kg的剂量口服时，平均最大血浆浓度为1.1μmol/L，口服生物利用度为3%[1]。

基于HTRF的EGFR生化检测[1] 使用均相时间分辨荧光（HTRF）KinEASE TK测定法进行了L858R/T790M EGFR的生化测定。酶浓度为20pM，ATP浓度为100µM。使用D300数字分配器将DMSO中的抑制剂化合物直接分配到384孔板中，然后立即使用多点组合试剂分配器添加缓冲水溶液。IC50值用11或23点抑制曲线测定。

细胞增殖测定[1]
细胞类型： H1975 细胞
测试浓度： 0 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM、1000 nM
孵育持续时间：72小时
实验结果：低纳摩尔浓度抑制H1975细胞的细胞增殖。

Animal/Disease Models: EGFRL858R/T790M/C797S genetically engineered mice (GEM) [1]
Doses: 50 mg/kg
Route of Administration: po (oral gavage); one time/day; lasted for 15 weeks.
Experimental Results: Tumors were Dramatically diminished within 4 weeks of treatment.

[1]. To C, et al. Single and Dual Targeting of Mutant EGFR with an Allosteric Inhibitor. Cancer Discov. 2019 Jul;9(7):926-943.

In summary, we identify a single agent mutant-selective allosteric EGFR inhibitor, JBJ-04-125-02. Although effective in vitro and in vivo, there are still limitations to this approach. The identification of JBJ-04-125-02 serves as an important proof of concept to demonstrate the feasibility of developing a single agent mutant selective allosteric EGFR inhibitor. Current efforts should focus on developing an allosteric inhibitor that can ideally target not only L858R but also Del_19 mutation; however, since the allosteric pocket in which JBJ-04-125-02 and previous allosteric inhibitors bind is uniquely formed in the presence of the L858R mutation, it remains a challenge to develop an allosteric inhibitor that could simultaneously inhibit both mutant forms of EGFR. Intriguingly, although osimertinib is more effective than gefitinib or erlotinib in EGFR TKI naïve patients, it is disproportionally more effective in patients with EGFR exon 19 deletions (median PFS 21.4 vs. 11.0 months) compared to those with an L858R mutation (median PFS 14.4 vs. 9.5 months), suggesting a need to continue to develop new therapeutic approaches specifically for patients with EGFR L858R mutant NSCLC. The greatest therapeutic potential of JBJ-04-125-02 is observed when it is combined with osimertinib, and as such, the two-drug combination could potentially lead to enhanced clinical benefits beyond those currently achievable with single agent osimertinib in patients with EGFR L858R mutant lung cancer.[1]

C29H26FN5O3S

543.6118

543.17

C, 64.07; H, 4.82; F, 3.49; N, 12.88; O, 8.83; S, 5.90

2060610-53-7

(Rac)-JBJ-04-125-02;2140807-05-0

124173751

Typically exists as solid at room temperature

3.8

126Ų

3

8

6

39

870

1

C1CN(CCN1)C2=CC=C(C=C2)C3=CC4=C(CN(C4=O)[C@H](C5=C(C=CC(=C5)F)O)C(=O)NC6=NC=CS6)C=C3

VHQVOTINPRYDAO-AREMUKBSSA-N

InChI=1S/C29H26FN5O3S/c30-21-5-8-25(36)24(16-21)26(27(37)33-29-32-11-14-39-29)35-17-20-2-1-19(15-23(20)28(35)38)18-3-6-22(7-4-18)34-12-9-31-10-13-34/h1-8,11,14-16,26,31,36H,9-10,12-13,17H2,(H,32,33,37)/t26-/m1/s1

(2R)-2-(5-fluoro-2-hydroxyphenyl)-2-[3-oxo-5-(4-piperazin-1-ylphenyl)-1H-isoindol-2-yl]-N-(1,3-thiazol-2-yl)acetamide

JBJ-04-125-02; 2060610-53-7; (2R)-2-(5-fluoro-2-hydroxyphenyl)-2-{1-oxo-6-[4-(piperazin-1-yl)phenyl]-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl}-N-(1,3-thiazol-2-yl)acetamide; (2R)-2-(5-fluoro-2-hydroxyphenyl)-2-[3-oxo-5-(4-piperazin-1-ylphenyl)-1H-isoindol-2-yl]-N-(1,3-thiazol-2-yl)acetamide; SCHEMBL18360815; GTPL12982; BCP32863; EX-A4047

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。