GSK2194069

β-ketoyl reductase (KR) of fatty acid synthase (FASN) (IC50 = 7.7 nM)

GSK2194069（100 nM；24 小时）可抑制癌细胞系（KATO-III、MKN45、A549、SNU-1）中的脂肪酸合酶 (FAS)，但不会降低 FAS 产生蛋白的量 [1]。 GSK2194069 的半最大有效浓度 (EC50) 值为 15.5 ± 9 nM (n = 78)，可降低 A549 细胞中的磷脂酰胆碱水平，这与棕榈酸酯产量减少有关 [1]。 LNCaP 细胞中的 FASN 表达水平较高，而与 FASN 阴性 PC3 细胞相比，GSK2194069（5 μM 和 20 μM）在 FASN 阳性 LNCaP 细胞中表现出更高的有效性 [2]。 GSK2194069（50 μM；24 小时）可抑制 LNCaP-LN3 人前列腺癌细胞的增殖 [3]。 LNCaP-LN3 细胞中 GSK2194069（60.4 nM；24 h）的代谢组学特征包括还原的 L-乙酰肉碱、硬脂酰肉碱、空肉碱和棕榈酰-L-肉碱 [3]。

我们的目的是合成和评估一系列基于GSK2194069的小分子三唑酮，这是一种FASN抑制剂，IC50=7.7±4.1 nM，用于FASN表达的PET成像。这些三唑酮以良好的产率和优异的放射化学纯度用碳-11标记，并且与FASN阳性的LNCaP细胞的结合显著高于FASN阴性的PC3细胞。然而，尽管有这些有希望的特征，这些分子在体内表现出较差的药代动力学，并且主要保留在淋巴结和肝胆系统中。未来的研究将寻求确定结构修饰，以提高肿瘤靶向性，同时保持这些第一代11C-甲基三唑酮的排泄特性[2]。

测定了探针对高表达FASN的LNCaP细胞和PC3前列腺癌症细胞的活性，PC3前列腺癌细胞以低得多的水平表达FASN，并作为我们的阴性对照。在收获的计数标准化为蛋白质含量后，每种化合物与LNCaP细胞的结合比与PC3细胞的结合更高。结合的特征是快速的初始吸收速率，然后是一段平衡期。细胞结合峰值在10-15分钟后达到，在LNCaP细胞中高出两倍。在添加活性后的50分钟内，放射性的流出可以忽略不计。[11C]5和[11C]6与LNCaP细胞的结合峰值相当（4.23±0.14 vs.5.06±0.18%的添加活性），而[11C]4的结合峰值略低（2.37±0.21%的添加活力）。[11C]5与LNCaP细胞的结合显著高于PC3细胞（p=0.03）[2]。

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： A549
测试浓度： 0、10、100、1000 nM
孵育时间： 48 hrs（小时）或 120 hrs（小时）
实验结果： FAS 蛋白水平没有降低。

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蛋白质印迹分析 [2]
细胞类型： FASN 阳性 LNCaP 细胞、FASN 阴性 PC3 细胞
测试浓度： 1 nM- 0.1 mM
孵育时间：48小时
实验结果：显着抑制肿瘤细胞的生长，对肿瘤细胞有较好的效果减少 LNCaP 细胞。

MicroPET/CT Imaging [2]
Method A: Tumor-bearing mice were injected intravenously with 100 µL of the final product solution, containing 8–10 MBq [11C]4, 9–11 MBq [11C]5, or 9–11 MBq [11C]6. The mice were then placed on the imaging bed and a 60 min dynamic acquisition was performed by microPET/CT. The acquisition typically began 15 min after injection of the radiotracer. A CT scan was performed immediately upon conclusion of the microPET scan for attenuation correction and anatomical co-registration. The images were processed using open-source image processing software (AMIDE).
Method B: A 500 µL aliquot containing approximately 111 MBq (38 ng) [11C]5 in 10% EtOH/saline was added to a vial containing 50 mg Captisol® in 0.5 mL saline, prepared 4 h previously. The mixture was shaken vigorously for 10 min. A control solution was prepared by diluting a 500 µL aliquot containing approximately 111 MBq (38 ng) [11C]5 in 10% EtOH/saline with 0.5 mL saline.
Two male athymic nu/nu mice bearing LNCaP xenograft tumors (150–500 mm3) were injected intravenously with 100 µL of the solution, containing 9–11 MBq [11C]5 and 5 mg Captisol®. In parallel, two mice were injected intravenously with 100 µL of the control solution, containing 9–11 MBq. The mice were then placed on the imaging bed and a 60 min dynamic acquisition was performed by microPET/CT. The acquisition typically began 15 min after injection of [11C]5. A CT scan was performed immediately upon conclusion of the microPET scan for attenuation correction and anatomical co-registration. The images were processed using AMIDE.

[1]. A human fatty acid synthase inhibitor binds β-ketoacyl reductase in the keto-substrate site. Nat Chem Biol. 2014 Sep;10(9):774-9.

[2]. Synthesis and Evaluation of 11C-Labeled Triazolones as Probes for Imaging Fatty Acid Synthase Expression by Positron Emission Tomography. Molecules. 2022 Feb 25;27(5):1552.

[3]. Deciphering Fatty Acid Synthase Inhibition-Triggered Metabolic Flexibility in Prostate Cancer Cells through Untargeted Metabolomics. Cells. 2020 Nov 10;9(11):2447.

C25H24N4O3

428.4831

428.185

1332331-08-4

67376285

Light yellow solid

3.712

84.13

1

4

5

32

773

1

O=C(C1([H])C([H])([H])C1([H])[H])N1C([H])([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])C2=NN([H])C(N2C2C([H])=C([H])C(C3C([H])=C([H])C4=C(C([H])=C([H])O4)C=3[H])=C([H])C=2[H])=O)C1([H])[H]

AQTPWCUIYUOEMG-INIZCTEOSA-N

InChI=1S/C25H24N4O3/c30-24(18-1-2-18)28-11-9-16(15-28)13-23-26-27-25(31)29(23)21-6-3-17(4-7-21)19-5-8-22-20(14-19)10-12-32-22/h3-8,10,12,14,16,18H,1-2,9,11,13,15H2,(H,27,31)/t16-/m0/s1

4-[4-(5-Benzofuranyl)phenyl]-5-[[(3S)-1-(cyclopropylcarbonyl)-3-pyrrolidinyl]methyl]-2,4-dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-one

GSK-2194069; GSK 2194069; GSK2194069.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 100 mg/mL (~233.38 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。