gt1b(Ki=0.01±<0.01 nM);gt1a(Ki=0.01±0.01 nM);gt2a(Ki=0.08±0.02 nM);gt2b(Ki=0.15±0.06 nM);gt3a(Ki=0.90±0.2 nM)

体外活性：MK-5172 (Grazoprevir) 在针对常见耐药突变的主要基因型和变异体的生化检测中有效，Ki 为 0.01±<0.01 nM (gt1b)、0.01±0.01 nM (gt1a)、0.08±0.02 nM (gt2a)、0.15±0.06nM(gt2b)、0.90±0.2nM(gt3a)、0.07±0.01nM(gt1bR155K)、0.14±0.03nM(gt1bD168V)、0.30±0.04nM(gt1bD168Y)、5.3±0.9nM(gt1bD168Y) 1bA156T ) 和 12±2 nM (gt1bA156V)。在复制子测定中，MK-5172 对基因型 1a、1b 和 2a 表现出亚纳摩尔至低纳摩尔 EC50，对于 gt1bcon1、gt1a 和 gt2a 的 EC50 分别为 0.5±0.1 nM、2±1 nM 和 2±1 nM，分别。 MK-5172 对一组 HCV 复制突变体 NS5A (Y93H) (EC50=0.7±0.3 nM)、NS5B 核苷 (S282T) (EC50=0.3±0.1 nM) 和 NS5B (C316Y) (EC50=0.4±0.2) 有效。 ）。 MK-5172 保持了针对 gt 3a 酶以及多种突变酶的优异功效，在复制子系统中具有优异的功效 [gt1b IC50(50% NHS)=7.4 nM； gt1a IC50(40% NHS)=7 nM]，并且显示出优异的大鼠肝脏暴露。激酶测定：从大肠杆菌中表达并纯化重组 HCV NS3/4A 酶。酶序列源自基因型 1a (gt1a) H77、gt1b con1、gt2a JFH1、gt2b HCJ8 和 gt3a NZL1。在时间分辨荧光测定中测定含有 MK-5172 (Grazoprevir)、Vaniprevir 或参考化合物 Danoprevir 和 TMC435 的反应混合物中 HCV NS3/4A 蛋白酶活性的抑制。基于细胞的 HCV 复制子测定是在 10% 胎牛血清 (FBS) 或 40% 正常人血清 (NHS) 存在下，在基因型 1b (con1) 稳定细胞系 HB1 或 gt2a 细胞系 (JFH) 中进行。使用基于 TaqMan 的测定法确定针对一组基因型或突变复制子细胞系的 50% 有效浓度 (EC50)。使用 MTS 测定在 HCV 复制子细胞系中测定 50% 细胞毒性浓度 (CC50)。使用基于细胞的瞬时表型测定来确定针对临床基因型 1 NS3/4A 序列的效力。 NS3/4A 患者分离株是从感染 HCV 的人血浆中克隆出来的。 MDS Pharma Services 进行了广泛的反筛选，评估 MK-5172 在 10 μM 浓度下的抑制效力。细胞测定：将HB1细胞（每孔30,000个）按照药物浓度接种到6孔组织培养板中。第二天（第 0 天），用新鲜培养基和适当药物浓度的 MK-5172 补充培养基。在第 0、1 和 2 天从每个药物浓度的单个孔中收获细胞，洗涤并冷冻保存直至评估。第四个孔在第 3.5 天以类似方式收获，不同之处在于用新鲜培养基和适当药物浓度的 MK-5172 重新接种 30,000 个细胞。对于其他时间点，每半周传代并收获细胞，持续 2 周。第三周，对细胞进行类似处理，不同之处在于细胞接受含有0.5mg/ml G418且不含蛋白酶抑制剂的补充培养基。

MK-5172（Grazoprevir）对慢性 HCV 感染的黑猩猩表现出高体内功效。当给狗给药时，MK-5172 在静脉给药后显示出 5 mL/min/kg 的低清除率和 3 小时的半衰期，并且在口服 1 mg/kg 剂量后具有良好的血浆暴露（AUC=0.4 μM h）。狗肝活检研究表明，口服 1 mg/kg 剂量后 MK-5172 在 24 小时时间点的肝脏浓度为 1.4 μM。与在大鼠中的行为类似，MK-5172 在狗口服给药 24 小时后表现出有效分配到肝组织中并相对于效力保持较高的肝脏浓度。

重组 HCV NS3/4A 酶从大肠杆菌中表达和纯化。酶序列源自基因型 1a (gt1a) H77、gt1b con1、gt2a JFH1、gt2b HCJ8 和 gt3a NZL1。在时间分辨荧光测定中测定含有 MK-5172 (Grazoprevir)、Vaniprevir 或参考化合物 Danoprevir 和 TMC435 的反应混合物中 HCV NS3/4A 蛋白酶活性的抑制。基于细胞的 HCV 复制子测定在 10% 胎牛血清 (FBS) 或 40% 正常人血清 (NHS) 存在下，在基因型 1b (con1) 稳定细胞系 HB1 或 gt2a 细胞系 (JFH) 中进行。使用基于 TaqMan 的测定法确定针对一组基因型或突变复制子细胞系的 50% 有效浓度 (EC50)。使用 MTS 测定在 HCV 复制子细胞系中测定 50% 细胞毒性浓度 (CC50)。使用基于细胞的瞬时表型测定来确定针对临床基因型 1 NS3/4A 序列的效力。 NS3/4A 患者分离株是从感染 HCV 的人血浆中克隆出来的。 MDS Pharma Services 进行了广泛的反筛选，评估 MK-5172 在 10 μM 浓度下的抑制效力。

将 HB1 细胞（每孔 30,000 个）按照药物浓度接种到 6 孔组织培养板中。第二天（第 0 天），用新鲜培养基和适当药物浓度的 MK-5172 补充培养基。在第 0、1 和 2 天从每个药物浓度的单个孔中收获细胞，洗涤并冷冻保存直至评估。第四个孔在第 3.5 天以类似方式收获，不同之处在于用新鲜培养基和适当药物浓度的 MK-5172 重新接种 30,000 个细胞。对于其他时间点，每半周传代并收获细胞，持续 2 周。第三周，对细胞进行类似处理，不同之处在于细胞接受含有0.5mg/ml G418且不含蛋白酶抑制剂的补充培养基。

[1]. Antimicrob Agents Chemother.2012 Aug;56(8):4161-7

[2]. ACS Med Chem Lett.2012 Mar 2;3(4):332-6.

[3]. Signal Transduct Target Ther. 2021 May 29;6(1):212.

HCV NS3/4a protease inhibitors are proven therapeutic agents against chronic hepatitis C virus infection, with boceprevir and telaprevir having recently received regulatory approval as add-on therapy to pegylated interferon/ribavirin for patients harboring genotype 1 infections. Overcoming antiviral resistance, broad genotype coverage, and a convenient dosing regimen are important attributes for future agents to be used in combinations without interferon. In this communication, we report the preclinical profile of MK-5172, a novel P2-P4 quinoxaline macrocyclic NS3/4a protease inhibitor currently in clinical development. The compound demonstrates subnanomolar activity against a broad enzyme panel encompassing major hepatitis C virus (HCV) genotypes as well as variants resistant to earlier protease inhibitors. In replicon selections, MK-5172 exerted high selective pressure, which yielded few resistant colonies. In both rat and dog, MK-5172 demonstrates good plasma and liver exposures, with 24-h liver levels suggestive of once-daily dosing. When administered to HCV-infected chimpanzees harboring chronic gt1a or gt1b infections, MK-5172 suppressed viral load between 4 to 5 logs at a dose of 1 mg/kg of body weight twice daily (b.i.d.) for 7 days. Based on its preclinical profile, MK-5172 is anticipated to be broadly active against multiple HCV genotypes and clinically important resistance variants and highly suited for incorporation into newer all-oral regimens.[1]

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A new class of HCV NS3/4a protease inhibitors containing a P2 to P4 macrocyclic constraint was designed using a molecular modeling-derived strategy. Building on the profile of previous clinical compounds and exploring the P2 and linker regions of the series allowed for optimization of broad genotype and mutant enzyme potency, cellular activity, and rat liver exposure following oral dosing. These studies led to the identification of clinical candidate 15 (MK-5172), which is active against genotype 1-3 NS3/4a and clinically relevant mutant enzymes and has good plasma exposure and excellent liver exposure in multiple species.[2]

C38H49N6O9SNA

788.89

788.317

C, 57.86; H, 6.26; N, 10.65; Na, 2.91; O, 18.25; S, 4.06

1425038-27-2

Grazoprevir;1350514-68-9;Grazoprevir potassium salt;1206524-86-8;Grazoprevir hydrate;1350462-55-3

72187677

Typically exists as solid at room temperature

193Ų

2

12

8

55

1590

7

COC1=CC2=C(N=C(CCCCC[C@@H]3C[C@H]3OC4=O)C(O[C@H]5CN(C([C@H](C(C)(C)C)N4)=O)[C@H](C(N[C@@]([C@@H]6C=C)(C6)C([N-]S(C7CC7)(=O)=O)=O)=O)C5)=N2)C=C1.[Na+]

HWKZBIVJZNPHGU-CIAYNJNFSA-M

InChI=1S/C38H50N6O9S.Na/c1-6-22-19-38(22,35(47)43-54(49,50)25-13-14-25)42-32(45)29-18-24-20-44(29)34(46)31(37(2,3)4)41-36(48)53-30-16-21(30)10-8-7-9-11-27-33(52-24)40-28-17-23(51-5)12-15-26(28)39-27;/h6,12,15,17,21-22,24-25,29-31H,1,7-11,13-14,16,18-20H2,2-5H3,(H3,41,42,43,45,47,48);/q;+1/p-1/t21-,22-,24-,29+,30-,31-,38-;/m1./s1

sodium ((1R,2S)-1-((33R,35S,91R,92R,5S)-5-(tert-butyl)-17-methoxy-4,7-dioxo-2,8-dioxa-6-aza-1(2,3)-quinoxalina-3(3,1)-pyrrolidina-9(1,2)-cyclopropanacyclotetradecaphane-35-carboxamido)-2-vinylcyclopropane-1-carbonyl)(cyclopropylsulfonyl)amide

MK5172 Na; MK 5172 sodium; MK-5172 sodium; Grazoprevir sodium; MK-5172 sodium salt; MK-5172 (sodium salt); Grazoprevir sodium salt; MK 5172 sodium; 1425038-27-2; MK 5172 sodium salt; sodium;[(1R,2S)-1-[[(1R,18R,20R,24S,27S)-24-tert-butyl-7-methoxy-22,25-dioxo-2,21-dioxa-4,11,23,26-tetrazapentacyclo[24.2.1.03,12.05,10.018,20]nonacosa-3,5(10),6,8,11-pentaene-27-carbonyl]amino]-2-ethenylcyclopropanecarbonyl]-cyclopropylsulfonylazanide; Trade name: Zepatier‎.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。