Natural flavonoid in green tea; antioxidant

测试了四种异黄酮代谢细菌降解（-）-表没食子儿茶素（EGC）及其异构体（-）——儿茶素（GC）的能力。用Adlercreutzia equolifaciens JCM 14793、Asaccharobacter celatus JCM 14811和Slackia equolifacions JCM 16059观察到EGC和GC的生物转化，但没有观察到Slackia异黄酮转化物JCM 16137。关于EGC的降解，菌株JCM 14793仅催化4'-脱羟基反应产生4'-脱氢EGC（7）。菌株JCM 14811主要产生7，同时轻微形成C环裂解产物1-（3,4,5-三羟基苯基）-3-（2,4,6-三羟基苯）丙-2-醇（1）。菌株JCM 16059仅催化C环裂解形成1。有趣的是，氢气的存在促进了这些细菌对EGC的生物转化。此外，菌株JCM 14811显示出在氢气存在下催化1的4'-脱羟基反应产生1-（3,5-二羟基苯基）-3-（2,4,6-三羟基苯基）丙-2-醇（2）的能力。在GC的情况下，菌株JCM 14793主要产生C环裂解产物（1），只有极少量的4'-脱羟基GC（8），而菌株JCM 14811仅催化4'-脱氢形成8。菌株JCM 16059形成1。三株菌株对GC的生物转化受到氢气的刺激。菌株JCM 14793显示出在氢气存在下将1转化为2的能力，菌株JCM 14811也是如此。此外，发现菌株JCM 14793和JCM 14811具有催化EGC代谢产物4-羟基-5-（3,4,5-三羟基苯基）戊酸（3）和5-（3,4-5-三羟基苯）-γ-戊内酯（4）中邻苯三酚部分对脱羟基的能力，并且这种能力因氢气的存在而增强[1]。

众所周知，在蒸馏巴氏杀菌过程中，茶儿茶素、（-）-表儿茶素（1）、（-”-表没食子儿茶素（2）、（—）-表儿茶酚胺没食子酸酯（3）和（-）——表儿茶素没食子酸酯。我们之前报道过，茶儿茶素主要由3和4组成，能有效抑制大鼠的胆固醇吸收。本研究比较了热差向化儿茶素和茶儿茶素对胆固醇吸收的影响。茶儿茶素和热差向化儿茶素均能降低胸导管插管大鼠胆固醇的淋巴恢复，差向化儿茶酚胺比茶儿茶素更有效。在体外研究中考察了纯化儿茶素对胆固醇胶束溶解度的影响。儿茶素没食子酸酯的加入通过从胆汁盐胶束中沉淀胆固醇来降低胆固醇的胶束溶解度。化合物7和8分别比3和4更有效地沉淀胆固醇。这些观察结果强烈表明，热差向异构儿茶素可能比茶儿茶素更低胆固醇[3]

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衰老会导致认知障碍，其特征是海马功能降低，这与CA1突触的长期增强受损有关。在这里，我们评估了改良的（-）-儿茶素没食子酸酯（GCG）富集绿茶提取物（HTP-GTE）在改善中晚期小鼠模型认知功能障碍方面的安全性和有效性。我们开发了一种新型HTP-GTE，通过涉及加热的差向异构化富集GCG。我们比较了口服常规绿茶和HTP-GTE对年轻和老年雄性C57/BL6小鼠的影响，并检查了与衰老过程相关的海马功能的变化。通过电生理实验评估功能结果，以测量长时程增强（LTP）。HTP-GTE通过恢复长期突触可塑性改善了与年龄相关的认知障碍。我们还发现GCG是导致HTP-GTE效应的主要活性成分。改善与年龄相关的认知功能障碍的主要分子途径涉及蛋白激酶A（PKA），该蛋白激酶A被证明受HTP-GTE的调节。因此，HTP-GTE作为膳食补充剂具有治疗潜力，可以通过调节LTP阈值来帮助挽救衰老过程早期受损的认知功能[4]。

罐装和瓶装茶饮料不仅含有绿茶表儿茶素（GTE），即（-）-表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、（-）——表儿茶素没食子酸盐（ECG）、（—）-表儿茶素和（-）—表儿茶素，还含有四种GTE差向异构体，即（—）—儿茶素没食子酸乙酯（GCG）、（－）—儿儿茶素没食子酸酯（CG）、。在本研究中，我们检查了这些差向异构体与其相应前体的抗氧化活性和生物利用度。通过将龙井绿茶的GTE提取物在120℃下高压灭菌20分钟来诱导差向异构反应。通过各种柱色谱和半制备高效液相色谱技术完成了每种GTE和差向异构体的分离和纯化。每种差向异构体及其相应的GTE前体的抗氧化活性在三个体外系统中进行，即人LDL氧化、铁还原抗氧化能力（FRAP）和抗2,2-二苯基-1-苦肼基（DPPH）自由基测定。所有三种测定的结果表明，CG与其前体ECG具有相似的抗氧化活性，而GC作为抗氧化剂的效力不如其前体EGC。关于EGCG和GCG，LDL氧化和DPPH自由基测定的抗氧化能力相似，但在FRAP测定中，GCG在统计学上不如EGCG有效。对于EC和C，后者在DPPH测定中的抗自由基活性较低，但在LDL氧化和FRAP测定中的抗氧化活性相似。口服和静脉注射GTE差向异构体混合物导致大鼠血浆总抗氧化能力增加。一般来说，表儿茶素和差向异构体的生物利用度都很低（0.08-0.31），表儿萜与其相应的差向异构物之间观察到的大多数差异很小，即使在某些情况下具有统计学意义。结论是，在制造罐装和瓶装茶饮料时发生的差向异构化反应不会显著影响总茶多酚的抗氧化活性和生物利用度[2]。

使用甲基噻唑基二苯基溴化四唑（MTT）法进行细胞活力测试[4]
在37°C、混合气体（95%O2和5%CO2）的培养箱中，将海马神经元在24孔板中培养14天，每孔融合2×10~6个细胞。完全成熟后，神经元用GTE或HTP-GTE处理2小时，然后在37°C下用含有稀释的甲基噻唑基二苯基溴化四唑（MTT）（10%MTT）的新鲜Neurobase培养基更换培养基2小时。反应后，去除培养基，加入200μL二甲亚砜（DMSO）以溶解甲氮晶体。使用酶标仪通过570nm处的吸光度测量MTT结果，并通过处理组与对照组的光密度比获取细胞存活率数据。

Studies on Lymphatic Recovery of 14C-Cholesterol in Rats Cannulated in the Thoracic Duct. [3]
Eight-week old male SD rats were fed a commercial chow for 1 week until the operation. The left thoracic lymphatic duct cephalad to the cisterna chyli of these rats was cannulated as described previously. A second indwelling catheter was placed in the stomach for administration of a test emulsion. After surgery, the animals were placed in restraining cages and intragastrically given a continuous infusion of a solution containing 139 mM glucose and 85 mM NaCl at a rate of 3.4 mL/h until the end of the experiment. The same solution was given as drinking water. The next morning, animals with a constant lymph flow rate were administered 3 mL of a test emulsion containing 14C-cholesterol with or without catechin preparations. The test emulsion (3 mL) contained 200 mg of sodium taurocholate, 50 mg of fatty-acid-free bovine albumin fraction V, 200 mg of triolein, 37 kBq of 14C-cholesterol and 25 mg of cholesterol. The mixture was emulsified by sonication. When tea catechins and heat-epimerized catechins were administered, these catechins were added in the emulsion at 100 mg and 120 mg in 3 mL, respectively. Because the content of catechins (3, 4, 7, and 8) was decreased in heat-epimerized catechins, the amount of catechins was adjusted to the same levels between tea catechins and epimerized catechins. The molar ratios of total catechins to cholesterol in lipid emulsions were about 2.5. Lymph was collected in ice-chilled tubes containing EDTA, and the radioactivity was measured.

[1]. Biotransformation of (-)-epigallocatechin and (-)-gallocatechin by intestinal bacteria involved in isoflavone metabolism. Biol Pharm Bull. 2015;38(2):325-30.

[2]. Comparison of antioxidant activity and bioavailability of tea epicatechins with their epimers. Br J Nutr. 2004 Jun;91(6):873-81.

[3]. Heat-epimerized tea catechins rich in gallocatechin gallate and catechin gallate are more effective to inhibit cholesterol absorption than tea catechins rich in epigallocatechin gallate and epicatechin gallate. J Agric Food Chem. 2003 Dec 3;51(25):7303-7.

[4]. Ahn JW, Kim S, Ko S, Kim YH, Jeong JH, Chung S. Modified (-)-gallocatechin gallate-enriched green tea extract rescues age-related cognitive deficits by restoring hippocampal synaptic plasticity. Biochem Biophys Rep. 2022;29:101201.

(-)-gallocatechin is a a gallocatechin that has (2S,3R)-configuration. It has a role as an antioxidant, a radical scavenger and a metabolite. It is an enantiomer of a (+)-gallocatechin.
(-)-Gallocatechin has been reported in Camellia sinensis, Berchemia formosana, and other organisms with data available.

C15H14O7

306.26746

306.073

C, 58.83; H, 4.61; O, 36.57

3371-27-5

(-)-Epigallocatechin;970-74-1

9882981

White to off-white solid powder

1.7±0.1 g/cm3

685.6±55.0 °C at 760 mmHg

368.5±31.5 °C

0.0±2.2 mmHg at 25°C

1.776

-0.1

130.61

6

7

1

22

380

2

C1[C@H]([C@@H](OC2=CC(=CC(=C21)O)O)C3=CC(=C(C(=C3)O)O)O)O

XMOCLSLCDHWDHP-DOMZBBRYSA-N

InChI=1S/C15H14O7/c16-7-3-9(17)8-5-12(20)15(22-13(8)4-7)6-1-10(18)14(21)11(19)2-6/h1-4,12,15-21H,5H2/t12-,15+/m1/s1

(2S,3R)-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-3,4-dihydro-2H-chromene-3,5,7-triol

(-)-Gallocatechin; 3371-27-5; ent-gallocatechin; (2S,3R)-gallocatechin; (2S,3R)-2-(3,4,5-Trihydroxyphenyl)chroman-3,5,7-triol; CHEBI:71225; MFCD01632616; (2S,3R)-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-3,4-dihydro-2H-chromene-3,5,7-triol;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: This product requires protection from light (avoid light exposure) during transportation and storage.

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~326.51 mM)
H2O : ~1.67 mg/mL (~5.45 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。