FTase (farnesyl transferase)

HeLa 3A 是一种表达 24-kDa 同工型的抗辐射细胞，在用 FTI-277 (20 microM) 处理 48 小时后，其存活率显着下降，而对照细胞 (HeLa PINA) 的存活率没有显着变化。 FTI-277 的放射增敏作用后，两种细胞类型的 G(2)/M 期停滞减少，HeLa 3A 细胞有丝分裂后细胞死亡增加 [1]。以剂量和时间依赖性方式，用 GGTI-298 和 FTI-277 处理的 PC-3 细胞无法迁移或侵袭 [3]。

与单独使用载体相比，FTI-277疗法可抑制烧伤小鼠中 PTP-1B 和 PTEN 蛋白表达的升高。另一方面，在假烧伤动物中，FTI-277 对 PTP-1B 或 PTEN 蛋白表达没有明显影响 [2]。
与假烧伤相比，烧伤后3天，小鼠肌肉中的FTase表达和法尼酰化蛋白增加。同时，胰岛素刺激的胰岛素受体（IR）、胰岛素受体底物（IRS）-1、Akt和GSK-3β的磷酸化降低。烧伤后PTP-1B（IR-IRS-1信号传导的负调节因子）、PTEN（Akt介导的信号传导的阴性调节因子）的蛋白质表达、肌肉的蛋白质降解和乳酸释放以及血浆乳酸水平升高。烧伤引起的胰岛素信号传导受损和代谢功能障碍与炎症基因表达增加有关。这些烧伤引起的改变被FTI-277逆转或改善。[2]
结论：我们的数据表明，烧伤增加了小鼠骨骼肌中的FTase表达和蛋白法尼酰化，同时也增加了胰岛素抵抗、代谢改变和炎症反应，所有这些都可以通过FTI-277治疗来预防。这些结果表明，蛋白质法尼酰化的增加在烧伤诱导的代谢功能障碍和炎症反应中起着关键作用。我们的研究确定FTase是一种新的潜在分子靶点，可以逆转或改善烧伤患者的代谢紊乱。[2]

FTI-277抑制病毒颗粒的产生。[4]
如上所述，从转染后的第一天开始，每天用含有0.2%二甲亚砜（DMSO）、400μM二硫苏糖醇（DTT）和不同浓度FTI-277的Huh7培养基替换培养基。在第10天，用1倍磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞数次，以去除DTT的痕迹，并通过XTT测定法测量其存活率，如别处所述。使用基于酶联免疫吸附试验的测定法测定培养基HBsAg浓度。然后按照制造商的说明，用1×PBS洗涤细胞两次，并刮入2ml Trizol试剂以纯化其RNA含量。将上清液低速预冷，装载在2毫升20%蔗糖的1×PBS缓冲垫上，在SW41Ti转子中以30000转/分的速度在4°C下超速离心15小时。去除上清液后，将沉淀物小心地重新悬浮在水中，并按照下文所述进行提取，以进行Northern分析。

在这篇论文中，描述了法尼基转移酶抑制剂（FTI-277）对表达野生型RAS的人细胞中由24 kDa FGF2亚型诱导的放射抗性的影响。在照射前用FTI-277（20微M）处理48小时导致表达24 kDa亚型的放射抗性细胞（HeLa 3A）的存活率显著降低，但对对照细胞（HeLa PINA）的存活没有影响。FTI-277的放射增敏作用伴随着HeLa 3A细胞有丝分裂后细胞死亡的刺激，以及两种细胞类型G（2）/M期阻滞的减少。这些结果清楚地表明，至少有一种法尼酰化蛋白参与了FGF2 24kDa亚型诱导的放射抗性的调节。此外，辐射诱导的G（2）/M相阻滞也受法尼酰化蛋白的控制。这项工作还表明，FTase抑制剂可能是某些具有野生型RAS的人类肿瘤的有效放射增敏剂。[1]

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PC-3细胞的生长速度[3]
将细胞铺在24孔板中，3000个细胞/孔，并在含有iFBS（10%）的DMEM中培养24小时。用不同浓度的FTI-277、GGTI-298或NE-10790处理细胞24小时，用含有10%iFBS的DMEM洗涤，并在没有化合物的情况下再培养75小时。在处理前后用库尔特计数器计数细胞数量。

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荧光染色[3]
PC-3细胞在涂有Matrigel的盖玻片上用10μM GGTI-298、10μMFTI-277、1 mM NE-10790或含有1%BSA的DMEM（作为对照）预处理24小时。细胞用4%多聚甲醛固定，用0.5%Triton X-100渗透5分钟，用TRITC（异硫氰酸四甲基罗丹明）标记的鬼笔环肽（0.2μg/ml）染色20分钟，可染色F-actin。使用Hoechst 33342对DNA进行可视化。通过用0.1%BSA在PBS中固定和阻断细胞1小时，并用抗filin抗体再孵育1小时，进行cofilin的免疫染色。PBS洗涤后，将细胞与Alexa Fluor®488鸡抗abbit IgG（h+L）作为第二抗体孵育1 h。用PBS和H2O洗涤后，安装盖玻片，用蔡司LSM510 META共聚焦显微镜获取共聚焦图像。Hoechst 33342、Alexa Fluor®488和TRITC–phalloidin分别用405、488和543 nm激光线激发，并通过420–480、500–550 nm和560LP滤光片收集发射数据。

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FRAP（光漂白后的荧光恢复）[3]
在玻璃底细胞培养皿中，使用3μg载体DNA和7μl TransFectin脂质试剂，用pEGFP-actin、pEGFP-cofilin或pEGFP-paxillin转染PC-3细胞。将细胞孵育5小时，然后更换培养基。将细胞再培养48小时以实现GFPs的表达。转染的细胞用DMEM+1%BSA（阴性对照）、10μMFTI-277、10μM GGTI-298或1 mM NE-10790处理。FRAP实验（Sprague和McNally，2005年综述）是在37°C、5%CO2的加湿室中，用蔡司LSM510 META共聚焦显微镜进行的。用488nm激光束激发瞬时表达EGFP-actin/paxillin/-cofilin 1的细胞，用500-550nm带通滤光片收集发射。在光漂白之前，收集了三张图像。选择ROI（感兴趣区域），并对其进行光漂白（488nm；100%强度）。每隔2秒进行一次恢复。计算了回收半衰期（t½）和流动分数（Mf）。数据通过FCalc®进行评估。简而言之，对采集的数据进行了光漂白引起的图像采集校正，并将得到的数据拟合到方程y=（1-exp（kt））中。

A full thickness burn (30% total body surface area) was produced under anesthesia in male C57BL/6 mice at 8 weeks of age. After the mice were treated with FTI-277 (5 mg/kg/day, IP) or vehicle for 3 days, muscle insulin signaling, metabolic alterations and inflammatory gene expression were evaluated.[2]

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Dissolved in 5% DMSO, 0.5 mM DTT in sterile saline; 50 mg/kg; i.p. injection

HBV/HDV-transgenic FVB mice

[1]. The farnesyltransferase inhibitor FTI-277 suppresses the 24-kDa FGF2-induced radioresistance in HeLa cells expressing wild-type RAS. Radiat Res. 1999 Oct;152(4):404-11.

[2]. Role of protein farnesylation in burn-induced metabolic derangements and insulin resistance in mouse skeletal muscle. PLoS One. 2015 Jan 16;10(1):e0116633.

[3]. Inhibition of GGTase-I and FTase disrupts cytoskeletal organization of human PC-3 prostate cancer cells. Cell Biol Int. 2010 Aug;34(8):815-26.

[4]. A prenylation inhibitor prevents production of infectious hepatitis delta virus particles. J Virol. 2002 Oct;76(20):10465-72.

The mevalonate synthesis pathway produces intermediates for isoprenylation of small GTPases, which are involved in the regulation of actin cytoskeleton and cell motility. Here, we investigated the role of the prenylation transferases in the regulation of the cytoskeletal organization and motility of PC-3 prostate cancer cells. This was done by using FTI-277, GGTI-298 or NE-10790, the specific inhibitors of FTase (farnesyltransferase), GGTase (geranylgeranyltransferase)-I and -II, respectively. Treatment of PC-3 cells with GGTI-298 and FTI-277 inhibited migration and invasion in a time- and dose-dependent manner. This was associated with disruption of F-actin organization and decreased recovery of GFP-actin. Immunoblot analysis of various cytoskeleton-associated proteins showed that the most striking change in GGTI-298- and FTI-277-treated cells was a markedly decreased level of total and phosphorylated cofilin, whereas the level of cofilin mRNA was not decreased. The treatment of PC-3 cells with GGTI-298 also affected the dynamics of GFP-paxillin and decreased the levels of total and phosphorylated paxillin. The levels of phosphorylated FAK (focal adhesion kinase) and PAK (p-21-associated kinase)-2 were also lowered by GGTI-298, but levels of paxillin or FAK mRNAs were not affected. In addition, GGTI-298 had a minor effect on the activity of MMP-9. RNAi knockdown of GGTase-Ibeta inhibited invasion, disrupted F-actin organization and decreased the level of cofilin in PC-3 cells. NE-10790 did not have any effect on PC-3 prostate cancer cell motility or on the organization of the cytoskeleton. In conclusion, our results demonstrate the involvement of GGTase-I- and FTase-catalysed prenylation reactions in the regulation of cytoskeletal integrity and motility of prostate cancer cells and suggest them as interesting drug targets for development of inhibitors of prostate cancer metastasis.[3]

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Hepatitis delta virus (HDV) causes both acute and chronic liver disease throughout the world. Effective medical therapy is lacking. Previous work has shown that the assembly of HDV virus-like particles (VLPs) could be abolished by BZA-5B, a compound with farnesyltransferase inhibitory activity. Here we show that FTI-277, another farnesyltransferase inhibitor, prevented the production of complete, infectious HDV virions of two different genotypes. Thus, in spite of the added complexity and assembly determinants of infectious HDV virions compared to VLPs, the former are also sensitive to pharmacological prenylation inhibition. Moreover, production of HDV genotype III virions, which is associated with particularly severe clinical disease, was as sensitive to prenylation inhibition as was that of HDV genotype I virions. Farnesyltransferase inhibitors thus represent an attractive potential class of novel antiviral agents for use against HDV, including the genotypes associated with most severe disease.[4]

C22H30CLN3O3S2

484.07

483.142

C, 54.59; H, 6.25; Cl, 7.32; N, 8.68; O, 9.92; S, 13.25

180977-34-8

FTI-277;170006-73-2; 1217447-06-7 (TFA)

88309922

White to off-white solid powder

5.013

157.55

5

7

12

31

532

2

COC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)C1=C(C=C(C=C1)NC[C@H](CS)N)C2=CC=CC=C2.Cl

PIAFFJUUNXEDEW-PXPMWPIZSA-N

InChI=1S/C22H29N3O3S2.ClH/c1-28-22(27)20(10-11-30-2)25-21(26)18-9-8-17(24-13-16(23)14-29)12-19(18)15-6-4-3-5-7-15;/h3-9,12,16,20,24,29H,10-11,13-14,23H2,1-2H3,(H,25,26);1H/t16-,20+;/m1./s1

methyl (5-(((R)-2-amino-3-mercaptopropyl)amino)-[1,1-biphenyl]-2-carbonyl)-L-methioninate hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 33.33 mg/mL (68.85 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。