| 规格 | 价格 | |
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| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
VHL; c-Met
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
研究人员使用c-Met抑制剂foretinib（Zillhardt等人，2011）作为招募元素，开发了一种PROTAC，化合物7/SJF-8240（PROTAC 7），能够招募VHL，从而以剂量和时间依赖的方式诱导c-Met降解。在HGF脉冲存在或不存在的情况下，用越来越高浓度的基于普罗替尼的PROTAC 7（图3A）或其同源非对映异构体8（图3B）处理MDA-MB-231细胞，表明需要用大约10倍高浓度的非对映体处理才能完全抑制激动剂驱动的AKT磷酸化。当在全血清中用SJF-8240（PROTAC 7）和非对映异构体8处理时，我们观察到c-Met高表达细胞系GTL16细胞中Akt磷酸化的抑制水平相似（图S3A/B）。SJF-8240（PROTAC 7）和非对映异构体8对Akt磷酸化的抑制作用之间的效力差异减小，可能是由于两种细胞系（分别为GTL16和MDA-MB-231）之间信号级联的稳态激活与激动剂激发的激活。基于普罗替尼的PROTAC 7在抑制GTL16细胞增殖方面也比其相应的非对映异构体8强两倍以上（图3C），再次突显了开发能够降解蛋白质的探针的优势，特别是在癌基因成瘾的情况下[1]。
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| 酶活实验 |
环己胺追逐试验[1]
将MDA-MB-231细胞以每孔3×105个细胞的速度铺在6孔培养皿中，使其粘附，并切换到无血清RPMI-1640 16小时。然后在加入HGF（100 ng/ml）、SJF-8240（PROTAC 7）或载体之前，用100 ug/ml的环己酰亚胺预处理细胞1小时。在指定的时间点，立即将细胞置于冰上，用PBS冲洗，裂解并煮沸。 免疫荧光显微镜[1] 将MDA-MB-231细胞以1×105个细胞/ml的密度铺在12mm的圆形盖玻片上，培养过夜，换成无血清培养基>12小时，然后用500 nMSJF-8240（PROTAC 7）或100 ng/ml HGF处理指定时间，然后用PBS洗涤。细胞在室温下用4%甲醛固定20分钟，用冰冷的PBS洗涤，用0.25%Triton X-100/1%BSA的PBS溶液渗透并封闭30分钟。将固定细胞与c-Met抗体（1:3000稀释，细胞信号#8198）孵育1小时，用PBS洗涤3次5分钟，用Alexa Fluor-488偶联的抗兔抗体（1:1000稀释，ThermoFisher A-11008）孵育3小时5分钟，然后安装在含有DAPI的载体护罩中。在蔡司Axio Observer Z1倒置显微镜上成像。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖试验[1]
按照指示，在SJF-8240（PROTAC 7）或非对映异构体处理细胞后，向培养基中补充330μg/ml MTS和25μM甲基硫酸吩嗪，并在37°C下孵育。通过使用Wallac Victor2平板读数器在490nm处测量培养基的吸光度来监测MTS向甲赞衍生物的线粒体还原。使用Prism v7.0软件进行数据分析和统计。 细胞表面生物素化降解试验[1] Joffre等人改编了一种方案，用于测量MDA-MB-231细胞表面c-Met的去除情况（Joffre等，2011）。将细胞置于全血清中，使其粘附，并切换至无血清RPMI-1640 16小时。在此之后，将细胞置于冰上，用冰冷的1X PBS-CM（0.1 mM CaCl2，1 mM MgCl2）冲洗两次，并在4°C下与PBS-CM一起孵育5分钟。抽吸PBS-CM，此时用细胞膜不渗透试剂EZ-link Sulfo-NHS SS生物素在4°C下以0.5mg/ml的浓度标记细胞30分钟，并轻轻摇晃。这一步实现了所有细胞表面蛋白质的共价标记。以下所有操作均在4°C下进行，以防止所述蛋白质的贩运。随后，用冰冷的PBS-CM冲洗细胞两次，并在4°C下用Tris-甘氨酸缓冲液（100 mM Tris pH 8.0，150 mM NaCl，0.1 mM CaCl2，1 mM MgCl2 10 mM甘氨酸，1%BSA）淬灭过量生物素15分钟，同时轻轻摇动。然后用冰冷的PBS-CM冲洗细胞三次，然后用含有HGF（100 ng/ml）或SJF-8240（PROTAC 7）（500 nM）的温热无血清RPMI-1640培养基冲洗，并将其放置在37°C的加湿培养箱中指定时间，此时用补充有1X蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液（50 mM Tris，pH 7.5，100 mM NaCl，10%甘油，1%NP-40，1 mM EDTA）裂解细胞。将裂解物在4°C下以14000×g的速度离心10分钟，并通过BCA测定法测量蛋白质含量。将蛋白质裂解物标准化，并在4°C下在预平衡的NeutrAvidin琼脂糖珠上等分2小时，轻轻旋转。用洗涤缓冲液（100 mM Tris，pH 7.5，300 mM NaCl和1%Triton X-100）洗涤珠三次，并重新悬浮在2X洗脱缓冲液（62.5 mM Tris、pH 6.8、3%SDS、10%甘油、0.02%溴酚蓝、160 mM DTT）中。通过在95°C下加热5分钟将蛋白质从珠粒中洗脱出来，上清液在SDS-PAGE凝胶上运行，并评估细胞表面C-Met蛋白的存在。全细胞裂解物是指装载在NeutrAvidin珠上的裂解物，从而代表总c-Met蛋白。 |
| 参考文献 |
Cell Chem Biol.2018 Jan 18;25(1):67-77.e3.
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| 其他信息 |
Proteolysis targeting chimera (PROTAC) technology has emerged over the last two decades as a powerful tool for targeted degradation of endogenous proteins. Herein we describe the development of PROTACs for receptor tyrosine kinases, a protein family yet to be targeted for induced protein degradation. The use of VHL-recruiting PROTACs against this protein family reveals several advantages of degradation over inhibition alone: direct comparisons of fully functional, target-degrading PROTACs with target-inhibiting variants that contain an inactivated E3 ligase-recruiting ligand show that degradation leads to more potent inhibition of cell proliferation and a more durable and sustained downstream signaling response, and thus addresses the kinome rewiring challenge seen with many receptor tyrosine kinase inhibitors. Combined, these findings demonstrate the ability to target receptor tyrosine kinases for degradation using the PROTAC technology and outline the advantages of this degradation-based approach.[1]
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| 分子式 |
C58H65F2N7O11S
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|---|---|
| 分子量 |
1106.24
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| 精确质量 |
1105.443
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| CAS号 |
2230821-68-6
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| PubChem CID |
135175904
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
7.9
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| tPSA |
257
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
16
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| 可旋转键数目(RBC) |
26
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| 重原子数目 |
79
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| 分子复杂度/Complexity |
1990
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| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
CC1=C(SC=N1)C2=CC=C(C=C2)CNC(=O)[C@@H]3C[C@H](CN3C(=O)[C@H](C(C)(C)C)NC(=O)CCOCCCOCCCOC4=CC5=NC=CC(=C5C=C4OC)OC6=C(C=C(C=C6)NC(=O)C7(CC7)C(=O)NC8=CC=C(C=C8)F)F)O
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| InChi Key |
SCUZPTNDZHEHLB-ZWUDBOSPSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C58H65F2N7O11S/c1-35-51(79-34-63-35)37-10-8-36(9-11-37)32-62-53(70)45-29-41(68)33-67(45)54(71)52(57(2,3)4)66-50(69)19-27-76-24-6-23-75-25-7-26-77-49-31-44-42(30-48(49)74-5)46(18-22-61-44)78-47-17-16-40(28-43(47)60)65-56(73)58(20-21-58)55(72)64-39-14-12-38(59)13-15-39/h8-18,22,28,30-31,34,41,45,52,68H,6-7,19-21,23-27,29,32-33H2,1-5H3,(H,62,70)(H,64,72)(H,65,73)(H,66,69)/t41-,45+,52-/m1/s1
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| 化学名 |
N-(3-fluoro-4-((7-(3-(3-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-3-oxopropoxy)propoxy)propoxy)-6-methoxyquinolin-4-yl)oxy)phenyl)-N-(4-fluorophenyl)cyclopropane-1,1-dic
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| 别名 |
Foretinib-Based PROTAC-7; 2230821-68-6; SJF 8240; SJF-8240; CHEMBL4577916; SCHEMBL20326275; PD142878; Foretinib-Based PROTAC7; Foretinib-Based PROTAC 7
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.9040 mL | 4.5198 mL | 9.0396 mL | |
| 5 mM | 0.1808 mL | 0.9040 mL | 1.8079 mL | |
| 10 mM | 0.0904 mL | 0.4520 mL | 0.9040 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Small molecule induced degradation of EGFR and mutants.Cell Chem Biol.2018 Jan 18;25(1):67-77.e3. |
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 Selective PROTAC-mediated degradation of HER2 and implications for kinome re-wiring.
PROTAC mediated degradation of c-Met.Cell Chem Biol.2018 Jan 18;25(1):67-77.e3. |
Exon 14-deleted c-Met has increased stability and resistance to HGF-mediated degradation that can be combated by foretinib-based PROTAC 7.
PROTAC mediated internalization. |
Thiotaurine
ALG1001 TFA
BMS-066
GNE684
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