FITC

别名: Fluorescein isothiocyanate isomer I Fluorescein 5-isothiocyanate FITC 异硫氰酸荧光素酯; 荧光素-5-异氰酸酯;异硫氰酸荧光酯异构体;异硫氰酸荧光橙红;异硫氰酸荧光红;异硫氰酸荧光黄;异硫氰酸荧光素(异构体I);FITC 异硫氰酸荧光素;Fluorescein 5-Isothiocyanate (isomer I) 异硫氰酸荧光素(异构体I);异硫氰酸荧光素;异硫氰酸荧光素 Fluorescein isothiocyanate
目录号: V21039 纯度: ≥98%
FITC,英文全称Fluorescein Isothiocyanate,中文名称异硫氰酸荧光素,是生物学中应用最广泛的绿色荧光素类似物。
FITC CAS号: 3326-32-7
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
50mg
100mg
500mg
1g
2g
5g
Other Sizes
点击了解更多
  • 与全球5000+客户建立关系
  • 覆盖全球主要大学、医院、科研院所、生物/制药公司等
  • 产品被大量CNS顶刊文章引用
InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
FITC,英文全称Fluorescein Isothiocyanate,中文名称异硫氰酸荧光素,是生物学中应用最广泛的绿色荧光素类似物。 FITC具有吸收率高、荧光量子产率优异、水溶性好的特点。 FITC的异硫氰酸酯基团可以与蛋白质上的氨基、巯基、咪唑基、酪氨酰基、羰基等基团结合,实现包括抗体、凝集素在内的蛋白质标记。除了用作蛋白质标记物外,FITC 还可用作蛋白质荧光示踪剂,通过标记抗体快速识别病原体,或用于蛋白质和肽的微测序 (HPLC)。 FITC 的最大激发波长为 494 nm。一旦激发,它会在最大发射波长520 nm处显示黄绿色荧光。
生物活性&实验参考方法
靶点
Green fluorescent dye
体外研究 (In Vitro)
储备液的制备
1.蛋白制备:
制备浓度为1 mg/mL的蛋白(抗体),以达到最佳标记效果
1) 蛋白溶液的pH值应为8.5±0.5。如果pH值低于8.0,用1M NaHCO3调节pH值
2) 如果蛋白含量低于1 mg/mL,标记效率将显著降低。建议最终蛋白浓度范围在1至10 mg/mL之间,以实现最高的标记效率
3) 为了确保最佳的标记效果,蛋白需要在含有伯胺(如Tris或甘氨酸)和铵离子的透明缓冲液中
2.染料的准备
将无水DMSO加入到FITC小瓶中,摇动以制备10mM溶液
注意:FITC需要遮光并新鲜制备
3.染料用量计算
待标记的蛋白的量决定了标记反应需要多少FITC。FITC与蛋白的质量比大约为1:50是理想的
例如,假如所需标记蛋白为 1 mL,2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000),用 1 mL DMSO 溶解一管 1 mg FITC,则所需 FITC 体积为 40 μL。
以下公式可用于计算:
摩尔F/P=(MW/389)*(A495/195)/{[A280-(0.35*A495)]/E0.1%}=(A495*C)/[A280-(0.35*A495)]
C=(MW*E0.1%280)/(389*195)
*注意:
C表示蛋白常数;MW是蛋白的分子量;389:FITC 的分子量; 195:FITC 偶联物在 pH=13, 490 nm 处的吸光值 E0.1%; (0.35×A495):基于 FITC A280 的校正因子; E0.1%:蛋白(1.0 mg/mL)在 280 nm 处的吸光值。

使用指南
1.标记反应
1) 将50μL新制备的FITC加入1mL蛋白样品溶液中,轻轻摇晃并混合,然后短暂离心,在反应管底部收集样品。避免剧烈混合,以防止蛋白样品变性和失活
2) 将反应管放在黑暗的地方,在室温下轻轻孵育8小时。每隔30分钟,轻轻翻转反应管数次,使两种反应物充分混合,提高标记效率
3) 加入5M的NH4Cl至50mM的最终浓度,并在4℃下终止反应2小时
2.蛋白纯化和脱盐
以下方案以使用Sephadex G-25柱纯化染料-蛋白偶联物为例
1) 按照生产说明配制Sephadex G-25柱
2) 将反应混合物装入Sephadex G-25柱的顶部
3) 当样品到达顶部树脂表面以下时,立即加入PBS(pH 7.2-7.4)
4) 向所需样品中加入更多的PBS(pH 7.2-7.4)以完成柱纯化。该复合物包含染料-蛋白复合物所需的组分

安全注意事项:
1.FITC对光照和湿度敏感。立即准备FITC溶液并丢弃未使用的零件
2.低浓度叠氮化钠(≤3 mM或0.02%)或硫柳汞(≤0.02 mM或0.01%)不会显著干扰蛋白标记;但是20-50%的甘油会降低标记效率
3.避免使用含有伯胺(如Tris、甘氨酸)或铵离子的缓冲液,因为它们会与标记的蛋白竞争
4.本产品仅限专业人员进行科学研究,不得用于临床诊断或治疗,也不得用于食品或药物
5.为了您的安全和健康,操作时请穿戴实验室服和一次性手套
细胞实验
实施例1:FITC可用作具有绿色荧光的纳米复合材料的荧光探针
方法:用于纳米复合材料的连接
1.将纳米复合材料加入EDC和NHS中(摩尔比:1:5:5),调节pH以活化羧基
2.将FITC溶解在二甲基亚砜中,并加入上述混合物中,在黑暗中振荡过夜
3.通过冷冻干燥获得最终的FITC标记的纳米复合材料
4.使用基于探针的共焦激光内窥镜(Cellvizio,Mauna Kea Technologies,France)进行测定

实施例2:FITC可用作具有绿色荧光的纳米复合材料的荧光探针
方法:用于纳米复合材料的连接
1.将纳米复合材料(20 mg)与FITC(1 mg)悬浮在PBS(20 mL)中,并将混合物在黑暗中搅拌过夜。
2.用PBS洗涤纳米复合材料五次以去除过量的FITC
3.将测试细胞以105/孔的密度接种到6孔微孔板中,并在37°C、5%CO2中培养过夜
4.将培养基更换为所制备的含有纳米复合FITC的培养基。在共培养1、2、4和8小时后,用PBS冲洗测试细胞三次。
5.使用共焦激光扫描显微镜进行成像

实施例3:FITC可用作荧光探针,以绿色荧光连接到分子胶上

实施例4:FITC可用作用绿色荧光标记亲脂性植物毒素的荧光探针

实施例5:FITC可用作用绿色荧光标记漆酶的荧光探针
方法:漆酶标记
1.用二甲基亚砜制备FITC(1mg/mL)溶液
2.将FITC滴加到漆酶溶液(5 mg/mL)中,并在4°C下搅拌混合溶液4小时。
3.向混合溶液中加入NH4Cl水溶液(2mL,50mM)以停止反应
4.在4°C下,将磷酸盐缓冲液(50mM,pH 7)中的溶液透析48小时,以去除过量的FITC
5.使用共焦激光扫描显微镜(Leica SP8 STED 3X)进行成像。
药代性质 (ADME/PK)
Metabolism / Metabolites
Cyanide is rapidly alsorbed through oral, inhalation, and dermal routes and distributed throughout the body. Cyanide is mainly metabolized into thiocyanate by either rhodanese or 3-mercaptopyruvate sulfur transferase. Cyanide metabolites are excreted in the urine. (L96)
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Toxicity Summary
Cyanide is an inhibitor of cytochrome c oxidase in the fourth complex of the electron transport chain (found in the membrane of the mitochondria of eukaryotic cells). It complexes with the ferric iron atom in this enzyme. The binding of cyanide to this cytochrome prevents transport of electrons from cytochrome c oxidase to oxygen. As a result, the electron transport chain is disrupted and the cell can no longer aerobically produce ATP for energy. Tissues that mainly depend on aerobic respiration, such as the central nervous system and the heart, are particularly affected. Cyanide is also known produce some of its toxic effects by binding to catalase, glutathione peroxidase, methemoglobin, hydroxocobalamin, phosphatase, tyrosinase, ascorbic acid oxidase, xanthine oxidase, succinic dehydrogenase, and Cu/Zn superoxide dismutase. Cyanide binds to the ferric ion of methemoglobin to form inactive cyanmethemoglobin. (L97)
参考文献

[1]. Phosphorylation of osteopontin has proapoptotic and proinflammatory effects on human knee osteoarthritis chondrocytes. Exp Ther Med. 2016 Nov;12(5):3488-3494. Epub 2016 Oct 5.

[2]. Phosphorylation of osteopontin has proapoptotic and proinflammatory effects on human knee osteoarthritis chondrocytes. Exp Ther Med. 2016 Nov;12(5):3488-3494. Epub 2016 Oct 5.

[3]. Ratiometric, visual, dual-signal fluorescent sensing and imaging of pH/copper ions in real samples based on carbon dots-fluorescein isothiocyanate composites. Talanta. 2017 Jan 1;162:65-71.

其他信息
Fluorescein 5-isothiocyanate is the 5-isomer of fluorescein isothiocyanate. Acts as a fluorescent probe capable of being conjugated to tissue and proteins; used as a label in fluorescent antibody staining procedures as well as protein- and amino acid-binding techniques.
Fluorescein isothiocyanate is a chemical compound derived from fluorescein and containing cyanide. It is used in flow cytometry. (L552)
Fluorescent probe capable of being conjugated to tissue and proteins. It is used as a label in fluorescent antibody staining procedures as well as protein- and amino acid-binding techniques.
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C21H11NO5S
分子量
389.38
精确质量
389.035
元素分析
C, 64.78; H, 2.85; N, 3.60; O, 20.54; S, 8.23
CAS号
3326-32-7
相关CAS号
63469-13-6 (hydrochloride)
PubChem CID
18730
外观&性状
Light yellow to brown solid
密度
1.5±0.1 g/cm3
沸点
708.6±60.0 °C at 760 mmHg
熔点
>360 °C(lit.)
闪点
382.4±32.9 °C
蒸汽压
0.0±2.3 mmHg at 25°C
折射率
1.754
LogP
4
tPSA
120.44
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
28
分子复杂度/Complexity
668
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=CC(O)=C4)C=C(O)C=C3)C5=C1C=C(N=C=S)C=C5
InChi Key
MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C21H11NO5S/c23-12-2-5-16-18(8-12)26-19-9-13(24)3-6-17(19)21(16)15-4-1-11(22-10-28)7-14(15)20(25)27-21/h1-9,23-24H
化学名
3',6'-dihydroxy-5-isothiocyanato-3H-spiro[isobenzofuran-1,9'-xanthen]-3-one
别名
Fluorescein isothiocyanate isomer I Fluorescein 5-isothiocyanate FITC
HS Tariff Code
2934.99.03.00
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~128.41 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (5.34 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.5682 mL 12.8409 mL 25.6819 mL
5 mM 0.5136 mL 2.5682 mL 5.1364 mL
10 mM 0.2568 mL 1.2841 mL 2.5682 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
+
+

计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

相关产品
联系我们