Aurora A (IC50 = 1.86 nM); KDR (IC50 = 58.2 nM); Flt-4 (IC50 = 15.9 nM); FGFR1 (IC50 = 92.7 nM); FGFR2 (IC50 = 70.8 nM); PDGFRα (IC50 = 56.4 nM); Flt3 (IC50 = 14 nM)

体外活性：ENMD-2076 表明对参与血管生成的多种激酶具有活性，包括 FLT3、RET、FLT4/VEGFR3、SRC、NTRK1、CSF1R/FMS、LCK、VEGFR2/KDR、FGFR1/2 和 PDGFRα，IC50 为 1.86- 120纳米。 ENMD-2076 可抑制多种人类实体瘤和造血癌细胞系的生长，IC50 为 0.025 至 0.7 μM，诱导细胞凋亡和 G2/M 期阻滞。 ENMD-2076 可诱导源自乳腺癌、结肠癌、黑色素瘤、白血病和多发性骨髓瘤细胞系的肿瘤异种移植模型中肿瘤生长的消退或完全抑制。 ENMD-2076 是 ENMD-981693 的 L (+) 酒石酸盐。 ENMD-2076 对骨髓瘤细胞系（IM9、ARH-77、U266、RPMI 8226、MM.1S、MM.1R、NCI-H929）和原代细胞具有显着的细胞毒性，IC50 为 2.99 至 7.06 μM，可诱导细胞凋亡。 ENMD-2076 对造血祖细胞具有低细胞毒性。 ENMD-2076 抑制磷酸肌醇 3-激酶/Akt 通路并下调生存素和 X 连锁细胞凋亡抑制剂。 ENMD-2076 还抑制极光 A 和 B 激酶，并诱导 G2/M 细胞周期停滞。激酶测定：购买重组 Aurora A 和 B 激酶以及适当的 PanVera Z-Lyte 激酶测定试剂盒。测定在补充有 2 mM DTT 的激酶测定缓冲液（50 mM HEPES，pH 7.5，10 mM MgCl2，5 mM EGTA，0.05% Brij-35）中进行。活性是在等于每种酶的表观 Km 的 ATP 浓度以及 1 小时后导致肽底物约 30% 磷酸化的酶浓度下测定的。使用 Grafit 绘制相对酶活性与 ENMD-2076 浓度的剂量响应曲线，并用于计算 IC50 值。使用 SelectScreen 激酶分析服务确定 ENMD-2076 游离碱针对精选的 100 种激酶的效力。 ATP 浓度为每种酶的表观 Km，如果无法达到表观 Km，则为 100 μM。抑制百分比是在 ENMD-2076 游离碱浓度为 1 μM 时测定的；对于注意到显着抑制的激酶，IC50 值通过生成完整的 10 点剂量反应曲线来确定。细胞测定：通过铺板 500 个细胞（人类白血病细胞系，包括 MV4;11、U937、Kasumi、MO7e、HL-60、TF-1、Jurkat、K562、THP）测量 ENMD-2076 对贴壁肿瘤细胞系的抗增殖作用-1，Hel 92.1.7；实体瘤细胞系和 HUVEC，包括 PANC-1、HCT116、A549、HT-29、MCF7、PC-3、BXPC-3 和 HUVEC），每孔置于 96 孔板中，并用ENMD-2076 96 小时。使用磺基罗丹明 B 测定法测量细胞增殖。通过在 96 孔板中每孔铺板 5 × 103 个细胞来分析源自白血病的非贴壁细胞系。将细胞与 ENMD-2076 一起孵育 48 小时，然后使用 Alamar Blue 试剂测定存活率。为了测量 ENMD-2076 对 VEGF 和成纤维细胞生长因子 (FGF) 诱导的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 增殖的影响，将细胞血清饥饿 6 小时，然后用 ENMD-2076 游离碱处理，并刺激使用 5 ng/mL bFGF 或 25 ng/mL VEGF（R 和 D Systems）处理 72 小时。使用 WST 测量细胞增殖。

ENMD-2076 在 HT29 异种移植模型中对 Flt3 以及 VEGFR2/KDR 和 FGFR1/2 的激活具有持续的抑制作用。 ENMD-2076 可以防止 MDA-MB-231 异种移植模型中新血管的形成并消退已形成的血管。口服 ENMD-2076（每天 50、100、200 mg/kg）治疗可抑制 H929 人浆细胞瘤异种移植物中的肿瘤生长，显着减少磷酸组蛋白 3 (pH3)、Ki-67 和血管生成，并且裂解的 caspase-3 显着增加。

重组 Aurora A 和 B 激酶测定在激酶测定缓冲液中进行，该缓冲液补充有 2 mM DTT，并含有 50 mM HEPES（pH 7.5）、10 mM MgCl₂、5 mM EGTA和 0.05% Brij-35。一小时后导致肽底物磷酸化约 30% 的酶浓度以及对应于每种酶的表观 Km 的 ATP 浓度用于计算活性。 Grafit 用于在剂量响应曲线上绘制相对酶活性与 ENMD-2076 浓度的关系，然后用于确定 IC50 值[1]。

在 96 孔板中，每孔接种 500 个细胞，将化合物与 9 个剂量（范围从 0.3 nM 至 125 mM）一起孵育 96 小时，以确定对贴壁肿瘤细胞系的抗增殖作用。使用磺胺罗丹明 B 测定法对细胞增殖进行定量[1]。

Mice: In 5- to 6-week-old CB.17 SCID or NCr nude mice, cell lines are injected subcutaneously or into the mammary fat pad (MDA-MB-231 only). Before receiving medication, tumors are left to grow for a period of 10 to 50 days. ENMD-2076 in water or ENMD-2076 free base in CMC-Tween vehicle (0.085% Tween 80 in water and 0.075% carboxymethylcellulose) is used orally for all treatments. One computes the percent inhibition of tumor growth[1].

[1]. ENMD-2076 is an orally active kinase inhibitor with antiangiogenic and antiproliferative mechanisms of action. Mol Cancer Ther. 2011 Jan;10(1):126-37.

[2]. Preclinical activity of a novel multiple tyrosine kinase and aurora kinase inhibitor, ENMD-2076, against multiple myeloma. Br J Haematol. 2010 Aug;150(3):313-25.

Aurora A Kinase/Tyrosine Kinase Inhibitor ENMD-2076 is an orally bioavailable synthetic small molecule with potential antiangiogenic and antineoplastic activities. Aurora A kinase/tyrosine kinase inhibitor ENMD-2076 selectively binds to and inhibits non-specified tyrosine kinases and Aurora kinases (AKs). The inhibition of AKs may result in the inhibition of cell division and proliferation and may induce apoptosis in tumor cells that overexpress AKs; antiangiogenic activity is related to the inhibition of angiogenic tyrosine kinases. AKs are serine-threonine kinases that play an essential role in mitotic checkpoint control during mitosis and are important regulators of cell division and proliferation.

C25H31N7O6

525.56

525.233

1291074-87-7

ENMD-2076;934353-76-1

16041424

Light brown to khaki solid

0.476

191.26

2

6

5

28

499

0

O[C@H](C(O)=O)[C@@H](C(O)=O)O.CC1=CC(NC2=NC(/C=C/C3=CC=CC=C3)=NC(N4CCN(CC4)C)=C2)=NN1

KGWWHPZQLVVAPT-PCWHHUEVSA-N

InChI=1S/C21H25N7.C4H6O6/c1-16-14-20(26-25-16)23-19-15-21(28-12-10-27(2)11-13-28)24-18(22-19)9-8-17-6-4-3-5-7-17;5-1(3(7)8)2(6)4(9)10/h3-9,14-15H,10-13H2,1-2H3,(H2,22,23,24,25,26);1-2,5-6H,(H,7,8)(H,9,10)/b9-8+;/t;1-,2-/m.0/s1

(2S,3S)-2,3-dihydroxybutanedioic acid;6-(4-methylpiperazin-1-yl)-N-(5-methyl-1H-pyrazol-3-yl)-2-[(E)-2-phenylethenyl]pyrimidin-4-amine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

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