PDGFRα (Kd = 2.1 nM); PDGFRβ (Kd = 3.2 nM); FLT3 (Kd = 0.74 nM)

体外活性：Crenolanib 在抑制伊马替尼耐药 PDGFRα 激酶（D842I、D842V、D842Y、D1842-843IM 和缺失 I843）的激酶活性方面明显比伊马替尼更有效。在等基因模型系统中，Crenolanib 针对 D842V 的效力比伊马替尼高 135 倍，IC50 约为 10 nM。 Crenolanib 抑制 EOL-1 细胞系中融合癌基因的激酶活性，该细胞系源自慢性嗜酸性粒细胞白血病患者，表达组成型激活的 FIP1L1-PDGFRα 融合激酶，IC50 = 21 nM。 Crenolanib 还抑制 EOL-1 细胞的增殖，IC50 = 0.2 pM。 Crenolanib 抑制 BaF3 细胞中表达的 V561D 或 D842V 突变激酶的激活，IC50 分别为 85 nM 或 272 nM。 Crenolanib 在 H1703 非小细胞肺癌细胞系中抑制 PDGFRα 激活，该细胞系包含 PDGFRα 位点的 4q12 区域扩增了 24 倍，IC50 为 26 nM。 Crenolanib 是一种口服生物利用度高、高效且选择性的 PDGFR TKI。 Crenolanib 是一种苯并咪唑化合物，对 PDGFRA 和 PDGFRB 的 IC50 值分别为 0.9 nM 和 1.8 nM。激酶测定：用突变型或野生型 PDGFRα 构建体瞬时转染中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞，并用不同浓度的 Crenolanib 处理。涉及重组 DNA 的实验按照指南使用生物安全 2 级条件进行。制备来自细胞系的蛋白质裂解物，并使用抗 PDGFRα 抗体进行免疫沉淀，然后进行 PDGFRα 的连续免疫印迹。使用 Photoshop 软件进行光密度测定以量化药物效应，并将磷-PDGFRα 水平标准化为总蛋白。使用 Calcusyn 2.1 软件分析密度测定和增殖实验结果，以数学方式确定 IC50 值。 Wilcoxon 秩和检验用于比较 Crenolanib 对于给定突变的 IC50 值。细胞测定：将 EOL-1 细胞以 20, 000 个细胞/孔的密度添加到 96 孔板中，并与 Crenolanib 一起孵育 72 小时，然后使用 2,3-双[2-甲氧基-4-硝基-基于 5-磺基苯基]-2H-四唑-5-甲酰苯胺 (XTT) 的测定。

Crenolanib（10 mg/kg 和 20 mg/kg）在体内抑制非小细胞肺癌肿瘤生长并诱导肿瘤细胞凋亡，并且所应用的 crenolanib 剂量被受体小鼠良好耐受。

WST-1 测定用于量化药物治疗后剩余的活细胞数量。综上所述，96孔组织培养板中每孔接种1×10³细胞，使用100 μL完全培养基。然后将细胞与 crenolanib (0-10 μM) 在 37°C、5% CO₂ 中孵育 96 小时。然后向每个孔中加入 10 μL WST-1 试剂，再孵育两小时，并根据制造商的说明测量显色。每个实验进行三份重复。使用 GraphPad Prism V 软件，利用非线性回归模型中剂量反应抑制的最小二乘拟合来确定 IC50 浓度。

中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞在用突变型或野生型 PDGFRα 构建体瞬时转染后暴露于不同剂量的 Crenolanib。根据指南，重组DNA实验在生物安全2级条件下进行。使用抗 PDGFRα 抗体对从细胞系中制备的蛋白裂解物进行免疫沉淀，然后对 PDGFRα 进行连续免疫印迹。 Photoshop 软件用于进行光密度测定，将磷-PDGFRα 的水平标准化为总蛋白，以量化药效。通过分析增殖和光密度实验的结果，使用Calcusyn 2.1软件以数学方式计算IC50值。对于每个突变，使用 Wilcoxon Rank Sum 检验比较 Crenolanib 的 IC50 值。

A549 cells are injected (2×10⁶ cells/mouse) into the axillary regions of mice. The mice are randomized to three groups: control, low-dose (10 mg/kg) or high-dose (20 mg/kg) of crenolanib (n = 6 per group) once the tumor volumes reach 70 mm³. 90% polyethylene glycol 300 and 10% 1-methyl-2-pyrrolidinone make up the delivery system for crenolanib therapy. For approximately two weeks, the tumor size and mouse body weight are measured every other day. The formula for calculating the tumor volume is (mm³)=(width×width×length)/2. Following therapy, carbon dioxide is used to kill the mice, and the tumors are removed and examined.

[1]. Clin Cancer Res . 2012 Aug 15;18(16):4375-84.

[2]. AACR, 2011, Abstract 3586.

[3]. Onco Targets Ther . 2014 Sep 26:7:1761-8.

Crenolanib is a member of the class of benzimidazoles that is 1H-benzimidazole which is substituted by a 8-(4-aminopiperidin-1-yl)quinolin-2-yl group at position 1 and by a (3-methyloxetan-3-yl)methoxy group at position 5. It is an inhibitor of type III tyrosine kinases, PDGFRalpha/beta and FLT3 (IC50 of 11, 3.2, and 4 nM). Currently under clinical development for the treatment of acute myeloid leukemia. It has a role as an EC 2.7.10.1 (receptor protein-tyrosine kinase) inhibitor, an angiogenesis inhibitor, an antineoplastic agent and an apoptosis inducer. It is a member of benzimidazoles, an aromatic ether, a member of quinolines, a member of oxetanes, an aminopiperidine and a tertiary amino compound.
Crenolanib is under investigation for the treatment of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma and Progressive or Refractory High-Grade Glioma.
Crenolanib is an orally bioavailable benzimidazole targeting the platelet-derived growth factor receptor (PDGFR) subtypes alpha and beta and FMS-related tyrosine kinase 3 (Flt3), with potential antineoplastic activity. Upon oral administration, crenolanib binds to and inhibits both wild-type and mutated forms of PDGFR and Flt3, which may result in the inhibition of PDGFR- and Flt3-related signal transduction pathways. This results in inhibition of tumor angiogenesis and tumor cell proliferation in PDGFR and/or Flt3 overexpressing tumor cells. PDGFR and Flt3, class III receptor tyrosine kinases, are upregulated or mutated in many tumor cell types.

C26H29N5O2

443.54

443.232

C, 70.41; H, 6.59; N, 15.79; O, 7.21

670220-88-9

670220-93-6 (besylate);670220-88-9;

10366136

Off-white to light green solid powder

1.4±0.1 g/cm3

676.6±65.0 °C at 760 mmHg

363.0±34.3 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.704

2.99

78.43

1

6

5

33

667

0

O1C([H])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])OC2C([H])=C([H])C3=C(C=2[H])N=C([H])N3C2C([H])=C([H])C3C([H])=C([H])C([H])=C(C=3N=2)N2C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C2([H])[H])N([H])[H])C1([H])[H]

DYNHJHQFHQTFTP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H29N5O2/c1-26(14-32-15-26)16-33-20-6-7-22-21(13-20)28-17-31(22)24-8-5-18-3-2-4-23(25(18)29-24)30-11-9-19(27)10-12-30/h2-8,13,17,19H,9-12,14-16,27H2,1H3

1-[2-[5-[(3-methyloxetan-3-yl)methoxy]benzimidazol-1-yl]quinolin-8-yl]piperidin-4-amine

RO 002; ARO 002, CP-868596; ARO-002; CP 868596; CP868596; ARO002; RO-002; RO002

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (6.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 30.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (3.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 14.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (3.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 14.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。