HER2/ErbB2 (IC50 = 10 nM)

体外活性：CP-724,714 选择性标记 EGFR，IC50 为 6.4 μM。 CP-724,714 对 IR、IGF-1R、PDGFRβ、VGFR2、abl 的效力要低 1,000 倍以上。 Src、c-Met c-jun NH2 末端激酶 (JNK)-2、JNK-3、ZAP-70、细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK)-2 和 CDK-5。 CP-724,714 有效降低 EGF 诱导的含有 erbB2 激酶结构域的嵌合体的自身磷酸化，IC50 为 32 nM，但在转染的 NIH3T3 细胞中对抗 EGFR 的效力明显较低。 CP-724,714 敏感地抑制 erbB2 扩增细胞（包括 BT-474 和 SKBR3）的增殖，IC50 分别为 0.25 和 0.95 μM。 1 μM CP-724,714 会诱导 BT-474 细胞 G1 期细胞积累，并显着减少 S 期细胞。 CP-724,714 可能通过肝细胞损伤和肝胆胆汁淤积机制发挥其肝毒性。 CP-724,714 分别抑制胆酰赖氨酰荧光素和牛磺胆酸盐 (TC) 流入冷冻保存和新鲜培养的人肝细胞中的小管。 CP-724,714 抑制表达人胆盐输出泵的膜囊泡中的 TC 转运，IC50 为 16 μM，并抑制胆小管中的主要外排转运蛋白 MDR1，IC50 约为 28 μM。激酶测定：重组 erbB2（氨基酸残基 675-1255）和 EGFR（氨基酸残基 668-1211）胞内结构域在杆状病毒感染的 Sf9 细胞中表达为谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白。通过谷胱甘肽琼脂糖珠上的亲和层析纯化蛋白质以用于测定。 Nunc MaxiSorp 96 孔板在 37 °C 下用 100 μL/孔的 0.25 mg/mL 聚（Glu:Tyr，4:1）、PGT 的 PBS 溶液孵育过夜进行包被。通过抽吸去除过量的PGT，并用洗涤缓冲液（PBS中的0.1% Tween 20）洗涤板3次。激酶反应在 50 μL 50 mm HEPES (pH 7.4) 中进行，其中含有 125 mm 氯化钠、10 mm 氯化镁、0.1 mm 原钒酸钠、1 mm ATP 和 ~15 ng 重组蛋白。添加DMSO中的抑制剂；最终DMSO浓度为2.5%。通过添加 ATP 启动磷酸化，并在室温下持续摇动 6 分钟。通过吸出反应混合物并用洗涤缓冲液洗涤四次来终止激酶反应。使用 50 μL/孔 HRP 缀合的 PY54 抗磷酸酪氨酸抗体孵育 25 分钟后测量磷酸化 PGT，该抗体在封闭缓冲液（PBS 中的 3% BSA、0.05% Tween 20）中稀释至 0.2 μg/mL。通过抽吸去除抗体并用洗涤缓冲液洗涤板四次。通过添加 50 μL/孔四甲基联苯胺微孔过氧化物酶底物来显色信号，并通过添加 50 μL/孔 0.09 m 硫酸来终止。通过测量 450 nm 处的吸光度来估计形成的磷酸酪氨酸产物。对照的信号通常为 A0.6–1.2，在没有 ATP、激酶蛋白或 PGT 的孔中基本上没有背景，并且与 6 分钟的孵育时间成正比。细胞测定：将细胞以每孔 5~10 × 103 个一式两份接种到 24 孔板中。电镀后的第二天，通过从 0.1 nM 到 10 μM 的六次或更多稀释度滴定来添加 CP-724,714。也接种不含 CP-724,714 的对照孔。细胞生长 6 至 7 天，此时对存活细胞进行计数。胰蛋白酶消化后，将细胞置于等酮溶液中并立即使用 Coulter Z2 粒子计数器进行计数。计算每个浓度的生长抑制[(1−实验值/对照值)×100]。剂量反应曲线至少重复两次并取平均值。 IC50 值使用 Calcusyn 软件计算。

CP-724,714 (25 mg/kg) 口服给药后迅速吸收，并在 FRE-erbB2 或 BT-474 异种移植物中给药后导致肿瘤 erbB2 受体磷酸化减少。 CP-724,714 可诱导携带 FRE-erbB2 异种移植物 (sc) 的小鼠发生细胞凋亡，并在 50 mg/kg 剂量下显示出 50% 的肿瘤生长抑制作用，且没有体重减轻或死亡。 CP-724,714 在 MDA-MB-453、MDA-MB-231、LoVo（结肠）和 Colo-205（结肠）异种移植物中也具有出色的抗肿瘤活性。此外，CP-724,714（30 或 100 mg/kg）可降低 BT-474 异种移植物中细胞外信号调节激酶和 Akt 磷酸化。

杆状病毒感染的 Sf9 细胞表达重组 erbB2（氨基酸残基 675-1255）和 EGFR（氨基酸残基 668-1211）胞内结构域作为谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白。为了用于测定，使用谷胱甘肽琼脂糖珠上的亲和层析纯化蛋白质。 MaxiSorp 96 孔板并非通过将 100 μL/孔的 0.25 mg/mL 聚（Glu:Tyr, 4:1）、PGT 在 PBS 中于 37 °C 孵育整晚进行包被。吸出多余的 PGT 后，用洗涤缓冲液（PBS 中的 0.1% Tween 20）清洗板 3 次。激酶反应在 50 μL 50 mm HEPES (pH 7.4) 中进行，其中还含有约 15 ng 重组蛋白、125 mm 氯化钠、10 mm 氯化镁、0.1 mm 原钒酸钠、1 mm ATP 和氯化镁。添加抑制剂后DMSO的最终浓度为2.5%。添加 ATP 后，磷酸化开始并在室温下持续六分钟，同时不断摇动。吸出反应混合物并用洗涤缓冲液洗涤四次以终止激酶反应。与 50 μL/孔 HRP 缀合的 PY54 抗磷酸酪氨酸抗体（在封闭缓冲液（PBS 中的 3% BSA、0.05% Tween 20）中稀释至 0.2 μg/mL）一起孵育 25 分钟，然后测定磷酸化 PGT 水平。通过吸出抗体，使用洗涤缓冲液将板清洗四次。添加四甲基联苯胺微孔过氧化物酶底物（50 μL/孔）以产生比色信号。添加 50 μL/孔（0.09 m）硫酸以终止信号。通过测量 450 nm 处的吸光度，可估计形成的磷酸酪氨酸产物。在缺乏 ATP、激酶蛋白或 PGT 的孔中，对照信号通常为 A0.6–1.2，与 6 分钟的孵育时间成正比，并且几乎没有背景。

在 24 孔板中，将细胞一式两份接种，每孔 5~10 × 10³。第二天，通过滴定至少六种稀释液（范围从 0.1 nM 到 10 μM）来添加 CP-724,714。另外，接种不含CP-724,714的对照孔。生长六到七天后，确定存活细胞的数量。将细胞用胰蛋白酶消化，然后立即使用 Coulter Z2 粒子计数器进行计数，并放入等酮溶液中。对于每个浓度，生长抑制的计算表示为[(1−实验值/对照值)×100]。剂量反应曲线在重复至少两次后取平均值。 Calcusyn软件用于计算IC50值。

FRE-erbB2 BT-474, MDA-MB-453, MDA-MB-231, LoVo (colon), and Colo-205 (colon) xenografts are established in athymic female mice (CD-1 nu/nu).
~100 mg/kg.
Administered via p.o.

[1]. Discovery and pharmacologic characterization of CP-724,714, a selective ErbB2 tyrosine kinase inhibitor. Cancer Res, 2007, 67(20), 9887-9893.

[2]. Role of hepatic transporters in the disposition and hepatotoxicity of a HER2 tyrosine kinase inhibitor CP-724,714. Toxicol Sci, 2009, 108(2), 492-500.

C27H27N5O3

469.53

469.211

537705-08-1

CP-724714;383432-38-0

Light yellow to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

687.3±55.0 °C at 760 mmHg

369.5±31.5 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.663

4.05

98.26

LLVZBTWPGQVVLW-SNAWJCMRSA-N

InChI=1S/C27H27N5O3/c1-18-13-21(8-11-25(18)35-22-9-6-19(2)29-15-22)32-27-23-14-20(7-10-24(23)30-17-31-27)5-4-12-28-26(33)16-34-3/h4-11,13-15,17H,12,16H2,1-3H3,(H,28,33)(H,30,31,32)/b5-4+

(E)-2-methoxy-N-(3-(4-(3-methyl-4-(6-methylpyridin-3-yloxy)phenylamino)quinazolin-6-yl)allyl)acetamide.

CP 724714; CP-724714; CP724714

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)