CGP-77675   中文名称: 1-(4-(4-氨基-5-(3-甲氧基苯基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)苯乙基)哌啶-4-醇

Src (IC50s = 5-40 nM)

聚 Glu-Tyr 的磷酸化 (IC50 = 5.5 nM) 和最佳 Src 底物 (OSS) 肽 (IC50 = 16.7 nM) 均受到 CGP77675 剂量依赖性抑制。这些 IC50 值类似于使用 20 nM Chicken Src 的结果 [1]。 CGP77675 的 IC50 为 0.8 μM，可防止大鼠胎儿长骨培养物中甲状旁腺激素引起的骨吸收 [1]。 CGP77675（0.04-10 μM；2 小时）对 IC8.1 细胞中的 Src 影响极小（IC50 值为 0.2、0.5 和 5.7 μM），但它能有效抑制 Src 底物 Fak 和桩蛋白的酪氨酸磷酸化 [1]。

每天两次皮下注射 CGP77675（1、5 和 25 mg/kg）的小鼠能够预防 IL-1β 诱导的高钙血症 [1]。在年轻的 Ovx 大鼠中，CGP77675（10 和 50 mg/kg；口服；每天两次，持续 6 周）可恢复骨微结构特征并部分防止骨质流失 [1]。

蛋白激酶测定[1]
用含有20mmol/L Tris、pH 7.4、10mmol/L MgCl2、0.1mmol/L钒酸钠和1mmol/L二硫苏糖醇（DTT）、底物poly-Glu-Tyr（4:1）或1和0.5mg/mL的最佳Src底物（OSS）肽的激酶缓冲液，用人Src酶进行基于33P的酪氨酸激酶测定；50μmol/L的三磷酸腺苷（ATP）和0.5–2μCi的33P-γATP。在室温下培养15分钟。用33mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA）停止反应，并将其点在磷酸纤维素纸方格上。将纸方格用0.5%磷酸洗涤三次，用无水乙醇洗涤一次，然后空气干燥，并在液体闪烁计数器中定量纸结合的放射性。如前所述表达和纯化鸡肉Src；除了6μmol/L ATP用于常规筛选并且磷酸化的聚Glu-Tyr保留在Immobilion-P膜上之外，该测定与人Src的测定类似。人Lck在杆状病毒系统中表达为His标记蛋白，在含有25mmol/L Hepes、pH 7.4、10mmol/L MnCl2、0.1mmol/L钒酸钠、0.2mmol/L DTT、6μmol/L ATP和0.5mg/mL聚谷氨酸-Tyr底物的激酶缓冲液中进行纯化和测定。用EGF受体、v-Abl和Cdc2进行测定，如前所述。人血管内皮生长因子（VEGF）受体KDR和Flt-1的激酶活性是通过测量合成底物poly-Glu-Tyr（3μg/mL）的磷酸化来测试的，该底物是通过谷胱甘肽S-转移酶与受体激酶结构域的纯化融合蛋白来实现的。激酶缓冲液含有20mmol/L Tris，pH 7.6，3mmol/L MnCl2，3mmol/L MgCl2，1mmol/L DTT，10μmol/L钒酸钠和8μmol/L ATP

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激酶自磷酸化反应[1]
人Src激酶（UBI；1.5 U/反应）在37°C的激酶缓冲液中孵育10分钟，该缓冲液含有20 mmol/L Tris，pH 7.4，10 mmol/L MgCl2，0.1 mmol/L钒酸钠，1 mmol/L DTT和10μCi[32P]ATP（3000 Ci/mmol）。蛋白质分离后，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和放射自显影分析自磷酸化，并在暴露于PhosphorImager屏幕（Molecular Dynamics，Sunnyvale，CA）后定量。用单克隆抗体2A7（UBI）免疫沉淀粘着斑激酶，并如上所述洗涤免疫复合物。在激酶缓冲液（30mmol/L Tris，pH 7.5，2mmol/L MgCl2和5mmol/L MnCl2）中进行额外洗涤。蛋白激酶测定在30μL激酶缓冲液和10μCi[32P]ATP（3000 Ci/mmol）中进行，每次反应在37°C下持续10分钟。免疫复合物用1 mL冰冷的TNE（Tris-NaCl-EDTA）缓冲液洗涤三次（见免疫沉淀）以去除游离[32P]ATP。通过在50μL SDS负载缓冲液中煮沸从珠中释放抗原，并进行12%SDS-PAGE。通过放射自显影分析自磷酸化，并在暴露于PhosphorImager屏幕后进行定量。

细胞活力测定[1]
细胞类型： MC3T3-E1 细胞
测试浓度： 0.2、1 和 5 μM
孵育时间：3天
实验结果：治疗长达3天不会影响细胞活力。

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蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： Src 过表达 IC8.1 细胞
测试浓度： 0.04、0.2、1、 5 和 10 μM
孵育时间： 2 小时 (hrs (小时))
实验结果： Fak 和桩蛋白磷酸化的剂量依赖性抑制，但不是源代码。

Animal/Disease Models: Male mice (Tif:MAGf; Novartis Animal Farm), body weight 25-30 g [1]
Doses: 1, 5 and 25 mg/kg
Route of Administration: subcutaneous injection; twice (two times) daily
Experimental Results: Prevention of IL-1β Induced hypercalcemia in mice without affecting serum amyloid levels.

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Animal/Disease Models: 8weeks old (175-209 g) female rats, SD (SD (Sprague-Dawley)) derivative strain Tif:RAlf[1]
Doses: 10 and 50 mg/kg
Route of Administration: Oral; twice (two times) daily for 6 weeks
Experimental Results:Partial prevention of bone loss.

[1]. Missbach M, et al. A novel inhibitor of the tyrosine kinase Src suppresses phosphorylation of its major cellularsubstrates and reduces bone resorption in vitro and in rodent models in vivo. Bone. 1999 May;24(5):437-49.

C26H29N5O2

443.54

443.232

C, 70.41; H, 6.59; N, 15.79; O, 7.21

234772-64-6

CGP77675 hydrate

White to light yellow solid powder

4.196

89.43

COC1=CC=CC(=C1)C2=CN(C3=CC=C(C=C3)CCN4CCC(CC4)O)C5=NC=NC(=C25)N

WUPXZZWTHIZICK-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H29N5O2/c1-33-22-4-2-3-19(15-22)23-16-31(26-24(23)25(27)28-17-29-26)20-7-5-18(6-8-20)9-12-30-13-10-21(32)11-14-30/h2-8,15-17,21,32H,9-14H2,1H3,(H2,27,28,29)

1-(4-(4-amino-5-(3-methoxyphenyl)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-7-yl)phenethyl)piperidin-4-ol

CGP77675; CGP 77675; CGP-77675

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: Please store this product in a sealed and protected environment (e.g. under nitrogen), avoid exposure to moisture.

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~26.0 mg/mL (~58.62 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。