| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Chk1 (IC50 = 7.7 nM); PIM1 (IC50 = 42 nM); CK2 (IC50 = 215 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
CCT244747 抑制 CHK2 (IC50 >10 μM) 和 CDK1 (IC50 >10 μM) 效果较差。 CCT244747 对 CHK1、RSK1、RSK2、AMPK、BRSK1、IRAK1 和 TrkA 表现出强抑制作用 (>80%)。 hNav1.5、hKv4.3/hKChIP2、hCav1.2、hKv1.5、hKCNQ1/hminK 和 hHCN4 等离子通道均被 CCT244747 (10 μM) 抑制 <25%[1]。 CCT244747 抑制 FLT3，IC50 为 600 nM。在人结肠癌细胞系中，CCT244747 (0.5 μM) 克服了基因毒性诱导的 S 和 G2 细胞周期停滞。在 HT29、SW620、MiaPaCa-2 和 Calu6 细胞系中，CCT244747 抑制细胞 CHK1 功能，对于细胞 G2 检查点废除（有丝分裂诱导测定），IC50 范围为 29 nM 至 170 nM； GI50 介于 0.33 至 3μM 之间。在 HT29 和 SW620 结肠癌细胞系中，CCT244747 (0.3 μM) 抑制 SN38 和吉西他滨诱导的 CHK1 活性，该活性与细胞周期停滞的取消、DNA 损伤的诱导和细胞凋亡相关[2]。 CCT244747 (0.5-2.0 μM) 可提高膀胱癌细胞系和头颈癌细胞系（T24、RT112 和 Cal27）的辐射敏感性[3]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在人类肿瘤异种移植物中，CCT244747（100 mg/kg，口服，每日七天）可显着降低肿瘤负荷。在 HT29 结肠肿瘤异种移植物中，CCT244747（100–300 mg/kg，口服）可抑制吉西他滨诱导的 pS296 CHK1 最长 24 小时[1]。在 HT29 结肠肿瘤异种移植物和 Calu6 人肺癌异种移植物中，CCT244747（75 mg/kg，口服）与吉西他滨联合显示出强大的抗肿瘤作用。在 SW620 人结肠肿瘤异种移植物中，CCT244747（150 mg/kg 口服）也显示出伊立替康的抗肿瘤活性[2]。在 Cal27 异种移植物中，CCT244747（100 mg/kg，口服）表现出放射增敏活性[3]。
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| 酶活实验 |
使用跟踪磷酸化产物与其底物分离的微流体测定来测量 CHK1 激酶活性。使用含有 CR-8 (500 nM) 的分离缓冲液在 EZ Reader II 上运行测定。使用 ECHO® 550 声学分配器创建重复的 8 pt 稀释曲线，然后直接转移到 384 聚丙烯测试板上。每种化合物的使用浓度为 50 μM，溶于 100% DMSO。通过每孔总共分配 250 nL DMSO，获得 2.5% DMSO 的最终测定浓度和 0.5-1000 nM 范围内的化合物浓度。该测定板装载有 6 PL CHK1（2 nM 最终浓度，内部制备）、2 PL 肽 10（5-FAM-KKKVRSSGLYRSPSMPENLNRPR-COOH，1.5 PM 最终浓度）和 2 PL ATP（90 PM 最终浓度） ，全部在激酶缓冲液中稀释（HEPES 50 mM、NaN3 0.02%、BSA 0.01%、原钒酸钠 0.1 mM、DTT 1 mM、MgCl2 2 mM、Tween20 0.1%）。在室温下孵育一小时之前，将板密封并以 1000 rpm 离心一分钟。添加分离缓冲液 (90 PL) 以停止反应。使用 12 吸管芯片和 -1.5 psi 和 1750 ΔV 的仪器设置，在 EZ Reader II 上读取板。抑制百分比是根据总孔（包含所有试剂和 2.5% DMSO）和空白孔（不含酶）计算的。自动计算底物的产物转化百分比。使用对数（抑制剂）与响应与可变斜率方程的非线性回归拟合，在 GraphPad Prism5[1] 中计算 IC50 值。
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| 细胞实验 |
使用 96 小时磺基罗丹明 B 测定 (SRB)，评估复合细胞毒性以及 CHK1 抑制剂增加 SN38（拓扑异构酶 I 抑制剂伊立替康的活性代谢物）和吉西他滨（抗代谢物）细胞毒性的能力。处理前，将 HT29 或 SW620 细胞以每孔 1.6 至 3.2 × 103 细胞接种在 96 孔板中，体积为 160 μL 培养基，并给予 36 小时贴壁。为了进行细胞毒性测定，将 CHK1 抑制剂的 DMSO 中的 10 mM 库存从 250 PM 的起始浓度开始在培养基中连续稀释。然后将 40 PL 一式四份添加到适当的孔中，以提供 50-0.1 PM（10 个浓度）的最终浓度范围。从 2 PM 的起始浓度开始在培养基中连续稀释后，将基因毒性剂（SN38；DMSO 中的 10 mM 库存）一式四份添加到每个孔中，最终浓度范围为 200-0.39 nM（10 个浓度）。在 37°C、湿润的 5% CO2 环境中孵育 96 小时（四倍倍增）后，细胞被固定并用 SRB 染色。结果表示为相对于未处理对照（SRB IC50）抑制细胞生长50%所需的测试化合物浓度，包括适当的对照。在增强试验中，将固定 SRB IC50 浓度的 SN38 或吉西他滨以 20 μL 体积的培养基（10×终浓度）一式四份添加到每个孔中，然后混合一分钟。为了获得 5-0.039 PM（8 个浓度）的最终浓度范围，CHK1 抑制剂（10 mM 库存）从培养基中的起始浓度 50 PM 开始连续稀释，并每孔添加 20 PL，一式四份。将细胞混合一分钟，然后在 37°C 潮湿环境中孵育九十六小时（四倍倍增），然后固定并用 SRB 染色。结果表示为抑制细胞生长 50% 所需的 CHK1 抑制剂浓度（增强 IC50），其中包括未处理和单独基因毒性处理的对照。 SRB IC50 与增强作用 IC50 的比值（PI = SRB IC50 / 增强作用 IC50）用于计算增强指数（PI），用于评估 CHK1 抑制剂增加 SN38 或吉西他滨细胞毒性的能力[1]。
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| 动物实验 |
Six-week-old female BALB/c mice are housed in a controlled environment with unlimited access to food and sterile water. The animals' weight during the experiment was 20 (±2) g. The compounds are dissolved in 10% DMSO and 5% Tween20 in 85% saline to create dosing solutions. Each of the compounds is given both intravenously and orally. Before administering a single intravenous bolus injection into a lateral tail vein, the animals are warmed. Oral gavage is used for oral administration. Plasma is extracted from blood at predetermined intervals (1 and 6 hours post-dosage) using cardiac punctures performed under anesthesia, transferred to microcentrifuge tubes, and centrifuged for 2 minutes at 4500 × g. Olomoucine is used as an internal standard for multiple reaction monitoring of selected transitions in high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry on a triple quadrupole apparatus for quantitative analysis. The measured matrix's concentrations are measured between 2 and 1000 nM using a standard curve as a guide. At the levels of 25, 250, and 750 nM, quality controls are present. Samples are diluted in the relevant matrix as needed[1].
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| 参考文献 |
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| 分子式 |
C20H24N8O2
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|---|---|
| 分子量 |
408.46
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| 精确质量 |
408.202
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| 元素分析 |
C, 58.81; H, 5.92; N, 27.43; O, 7.83
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| CAS号 |
1404095-34-6
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| 相关CAS号 |
1404095-34-6
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| PubChem CID |
54758482
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| 外观&性状 |
Yellow solid powder
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| LogP |
2.297
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| tPSA |
114.01
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
584
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1N=C(NC2N=C(O[C@@H](CN(C)C)C)C(C#N)=NC=2)C=C(OC)C=1C1=CN(C)N=C1
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| InChi Key |
IENLGMOXAQMNEH-CYBMUJFWSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H24N8O2/c1-13(11-27(2)3)30-20-16(7-21)22-10-19(26-20)25-18-6-17(29-5)15(9-23-18)14-8-24-28(4)12-14/h6,8-10,12-13H,11H2,1-5H3,(H,23,25,26)/t13-/m1/s1
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| 化学名 |
3-[(2R)-1-(dimethylamino)propan-2-yl]oxy-5-[[4-methoxy-5-(1-methylpyrazol-4-yl)pyridin-2-yl]amino]pyrazine-2-carbonitrile
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| 别名 |
CCT244747; CCT-244747; CCT 244747
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~50 mg/mL (~122.4 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4482 mL | 12.2411 mL | 24.4822 mL | |
| 5 mM | 0.4896 mL | 2.4482 mL | 4.8964 mL | |
| 10 mM | 0.2448 mL | 1.2241 mL | 2.4482 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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CHK1-IN-4 hydrochloride
PV1162
CHK1-IN-9
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