BMS-986142

BTK (IC50 = 0.5 nM); TEC (IC50 = 10 nM); ITK (IC50 = 15 nM); BLK (IC50 = 23 nM); TXK (IC50 = 28 nM); BMX (IC50 = 32 nM); LCK (IC50 = 71 nM); SRC (IC50 = 1100 nM)

BMS-986142 有效抑制人重组 BTK，在酶测定中 IC50 为 0.5 nM。 BMS-986142 对一组 384 种激酶表现出高选择性；只有五种其他激酶（Tec、ITK、BLK、Txk 和 BMX）受到抑制，且对 BTK 的选择性小于 100 倍。在这些激酶中，只有 Tec (IC50=10 nM) 受到抑制，其选择性低于 BTK 的 30 倍。这四种激酶是 Tec 激酶家族的成员。当受到 CD40L 刺激时，BMS-986142 不会阻止外周血 B 细胞表达 CD86 或 CD69（两者的 IC50>10,000 nM）。 BMS-986142 的 IC50 为 9 nM，可响应 Ramos B 细胞的抗 IgM 治疗而抑制 BTK 依赖性钙流，从而激活 BCR[2]。

在研究结束时，4、10 和 30 mg/kg 的 BMS-986142 导致临床明显疾病分别减少 26%、43% 和 79%，呈剂量依赖性。有趣的是，当与 MTX 一起给药时，4 mg/kg BMS-986142 在临床评分方面提供了额外的益处（54% 抑制），而单独使用 MTX 的抑制率为 19%。与单独使用任一药物分别为 24% 和 10% 相比，BMS-986142 4 mg/kg 与 MTX 联合给药可使炎症和骨吸收减少 53%。此外，10 和 30 mg/kg BMS-986142 显着抑制血清抗 II 型胶原蛋白 IgG 滴度。如果直到第 21 天才施用 BMS-986142（胶原蛋白加强剂），临床评分也会出现剂量依赖性下降。试验结束时，BMS-986142 2、4 和 25 mg/kg 剂量分别使临床评分降低 17%、37% 和 67%[2]。

测试化合物、荧光素肽 (1.5 μM)、ATP (20 μM)、人重组 BTK (1 nM) 和测定缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.4、10 mM MgCl2、0.015% Brij 35 表面活性剂和 4 mM DTT，溶于将1.6％DMSO加入到V形底384孔板中，最终体积为30μL。室温孵育 60 分钟后，向每个样品中添加 45 μL 35 mM EDTA 以终止反应。通过电泳分离荧光底物和磷酸化产物以分析反应混合物。通过将抑制数据与无抑制剂的对照（0%抑制）和无酶的对照（100%抑制）进行比较，计算抑制水平。通过创建剂量反应曲线找到抑制 50% BTK 活性所需的浓度 (IC50)。将化合物溶解在 DMSO 中，浓度为 10 mM，并在 11 个浓度下进行评估。

Ramos B 细胞响应 B 细胞受体 (BCR) 的刺激而磷酸化磷脂酶 C (PLC)-γ2：将 Ramos B 细胞在含有 10% 胎牛血清 (FBS) 的培养基中于 37°C 预孵育一小时后使用不同浓度的 BMS-986142，使用 50 μg/mL 的 AffiniPure F(ab')2 片段山羊抗人免疫球蛋白 (Ig)M 在 37°C 下精确刺激细胞两分钟。然后加入冰冷的磷酸盐缓冲盐水来淬灭细胞。细胞裂解沉淀后，用兔抗人磷酸化Y759-PLCγ2进行免疫印迹测定PLCγ2的水平，并使用Odyssey红外成像系统分析结果。为了保证均匀加载，肌动蛋白控制被标准化。

Mice: In male DBA/1 mice, 200 μg of admixed bovine type II collagen is injected subcutaneously at the base of the tail. Similar stimulation is given to the mice 21 days later. BMS-986142 in EtOH: TPGS: PEG300 (5:5:90) is used to initiate PO QD dosing for preventative administration right away; however, for therapeutic administration, dosing is postponed until day 21 of the booster immunization. In mice used for BMS-986142 plus MTX preventative studies, the doses are as follows: vehicle; 4, 10, or 30 mg/kg of BMS-986142; 4 mg/kg of BMS-986142 plus MTX 0.25 mg/kg; or MTX at 0.25 mg/kg per day. Mice are given vehicle daily, BMS-986142 at 2, 4, or 25 mg/kg daily, BMS-986142 at 2 or 4 mg/kg daily plus etanercept at 15 mg/kg IP twice weekly (BIW), or etanercept at 15 mg/kg IP BIW for therapeutic studies involving BMS-986142 plus etanercept. Mice are given vehicle daily, BMS-986142 at 10 or 30 mg/kg daily, murine CTLA-4-Ig at 0.05 or 0.2 mg/kg IP BIW, or BMS-986142 at 10 mg/kg daily plus murine CTLA-4-Ig at 0.05 or 0.2 mg/kg IP BIW for the preventative studies involving BMS-986142 plus murine cytotoxic T lymphocyte-associated protein 4 immunoglobulin (CTLA-4-Ig). Dosing is done starting on day 0 and continuing for the full 36-day study [2].

[1]. Discovery of 6-Fluoro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-methyl-2,4-dioxo-1,2-dihydroquinazolin-3(4H)-yl)-2-methylphenyl)-2-(S)-(2-hydroxypropan-2-yl)-2,3,4,9-tetrahydro-1H-carbazole-8-carboxamide (BMS-986142): A Reversible Inhibitor of Bruton'

[2]. Bruton'styrosine kinase inhibitor BMS-986142 in experimental models of rheumatoid arthritis enhances efficacy of agents representing clinical standard-of-care. PLoS One. 2017; 12(7): e0181782.

BMS-986142 is under investigation in clinical trial NCT02880670 (Pharmacokinetics and Metabolism Study of Radiolabeled BMS-986142 in Healthy Male Subjects).

C32H30F2N4O4

572.61

572.223

C, 67.12; H, 5.28; F, 6.64; N, 9.78; O, 11.18

1643368-58-4

86582336

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

746.5±70.0 °C at 760 mmHg

405.3±35.7 °C

0.0±2.6 mmHg at 25°C

1.667

4.51

120

3

6

4

42

1090

1

FC1C=C(C(N)=O)C2=C(C=1C1C=CC=C(C=1C)N1C(N(C)C3C(=CC=CC=3C1=O)F)=O)C1=C(C[C@@H](C(C)(C)O)CC1)N2

ZRYMMWAJAFUANM-INIZCTEOSA-N

InChI=1S/C32H30F2N4O4/c1-15-17(7-6-10-24(15)38-30(40)19-8-5-9-21(33)28(19)37(4)31(38)41)25-22(34)14-20(29(35)39)27-26(25)18-12-11-16(32(2,3)42)13-23(18)36-27/h5-10,14,16,36,42H,11-13H2,1-4H3,(H2,35,39)/t16-/m0/s1

(7S)-3-fluoro-4-[3-(8-fluoro-1-methyl-2,4-dioxoquinazolin-3-yl)-2-methylphenyl]-7-(2-hydroxypropan-2-yl)-6,7,8,9-tetrahydro-5H-carbazole-1-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.63 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。