BIBR 1532

telomerase ( IC50 = 100 nM )

体外活性：BIBR 1532 对端粒酶活性表现出非竞争性抑制作用。在 JVM13 白血病细胞系中，BIBR 1532 显示出剂量依赖性的抗增殖作用，IC50 为 52 μM，在其他白血病细胞系（包括 Nalm-1、HL-60 和 Jurkat）中也观察到类似的结果。此外，BIBR 1532 对急性髓系白血病 (AML) 具有直接抗增殖作用，IC50 为 56 μM，而不影响正常造血祖细胞的增殖能力。 BIBR 1532 (2.5 μM) 通过抑制 MCF-7/WT 和马法兰耐药 MCF-7/MlnR 细胞系中的端粒酶活性，降低集落形成能力，并诱导端粒长度缩短以及化疗敏化。在 T 细胞幼淋巴细胞白血病 (T-PLL) 中，BIBR 1532 以剂量依赖性方式显示出选择性细胞毒性作用，BIBR 1532 处理的细胞还表现出核浓缩和凋亡小体的形成，其形态与细胞凋亡相一致。最近的一项研究表明，BIBR 1532 和化疗药物卡铂的联合治疗可产生潜在的协同作用，消除 ES2、SKOV3 和 TOV112D 细胞系中的卵巢癌球体形成细胞。激酶测定：对于使用内源端粒酶进行直接端粒酶测定，将 10 μL 端粒酶富集提取物与不同浓度的 BIBR1532 混合，最终体积为 20 μL。在冰上预孵育 15 分钟后，加入 20 μL 反应混合物，并将管转移至 37 °C 引发反应。反应混合物中的最终浓度为 25 mM Tris-Cl (pH 8.3)、1 mM MgCl2、1 mM EGTA、1 mM dATP、1 mM dTTP、6.3 μM 冷 dGTP、15 μCi [α-32P]dGTP (3000 Ci /mmol; NEN)、1.25 mM 亚精胺、10 单位 RNAsin、5 mM 2-巯基乙醇和 2.5 μM TS 引物 (5-AATCCGTCGAGCAGAGTT)。对于重组酶，在最终体积 40 μL 中对 1–7 μL 亲和纯化的端粒酶（含有少于 0.025 μm hTERT）进行测定，其中含有 50 mM Tris 醋酸盐（pH 8.5）、50 mM KCl、1 mM MgCl2、1 mM 亚精胺、5 mM 2-巯基乙醇、1 mM dATP、1 mM dTTP、2.5 μM dGTP、15 μCi 的 [α-32P]dGTP (3000 Ci/mmol) 和 2.5 μm (TTAGGG)3。通过在 37 °C 下孵育 2 小时来启动反应，并通过添加 50 μL RNase 混合物（0.1 mg/mL RNaseA-100 u/mL RNaseT1，溶于 10 mM Tris-Cl (pH 8.3) 和 20 mm EDTA）来终止反应并在 37°C 下孵育 20 分钟。通过在 10 mM Tris-Cl (pH 8.3) 和 0.5% w/v SDS 中添加 50 μL 0.3 mg/m 蛋白酶 K，在 37 °C 下孵育 30 分钟，对样品进行脱蛋白。通过苯酚提取和乙醇沉淀回收 DNA，并在 8%（内源端粒酶）或 12%（重组端粒酶）聚丙烯酰胺-尿素凝胶上分析延伸产物。将干燥的凝胶暴露于柯达荧光成像仪屏幕上，并分析结果。细胞测定：将细胞一式三份铺板于含有不同浓度 BIBR1532 的完全 RPMI 1640 培养基中。 24至72小时后，添加水溶性四唑（WST-1），通过线粒体还原酶系统将其转化为甲臜。活细胞数量的增加导致线粒体脱氢酶活性增加，从而导致形成的甲臜染料增加，在孵育 2、3 和 4 小时后通过 ELISA 读数器对其进行定量。

为了使用内源端粒酶进行直接端粒酶测定，将 10 μL 端粒酶富集提取物和各种 BIBR1532 浓度合并成 20 μL 的最终体积。冰预孵育 15 分钟后，加入 20 μL 反应混合物，然后将管加热至 37°C 以开始反应。反应混合物的终浓度如下：1.25 mM 亚精胺、10 单位 RNAsin、5 mM 2-巯基乙醇、6.3 μM 冷 dGTP、15 μCi [α-³²P]dGTP (3000 Ci/mmol ；NEN)、1 mM dATP、1 mM dTTP 和 1 mM TS 引物 (5'-AATCCGTCGAGCAGAGTT)。对于重组酶，在最终体积 40 μL 中测试 1–7 μL 亲和纯化的端粒酶（hTERT 含量低于 0.025 μM），其中包括 50 mM Tris 醋酸盐 (pH 8.5)、50 mM KCl、1 mM MgCl< sub>2、1 mM 亚精胺、5 mM 2-巯基乙醇、1 mM dATP、1 mM dTTP、2.5 μM dGTP、15 μCi 的 [α-³²P]dGTP (3000 Ci /mmol) 和 2.5 μM (TTAGGG)3。该过程从 37°C 下孵育两小时开始，并通过添加 50 μL RNase 混合物（10 mM Tris-Cl (pH 8.3) 中的 0.1 mg/mL RNaseA-100 u/mL RNaseT1）和 20 mm 终止。 EDTA）并在 37°C 下再孵育 20 分钟。要对样品进行去蛋白处理，请将 50 μL 0.3 mg/m 蛋白酶 K 与 10 mM Tris-Cl (pH 8.3) 和 0.5% w/v SDS 混合。 37°C 孵育 30 分钟。使用苯酚提取和乙醇沉淀回收 DNA 后，在 8%（内源端粒酶）或 12%（重组端粒酶）聚丙烯酰胺-尿素凝胶上检查延伸产物。使用柯达荧光成像仪屏幕曝光干燥的凝胶，并检查结果。

一式三份，将细胞铺板于含有不同浓度 BIBR1532 的完整 RPMI 1640 培养基中。 24 至 72 小时后，引入水溶性四唑 (WST-1)，线粒体还原酶系统将其转化为甲臜。孵育二、三和四小时后，由于活细胞数量的增加，形成的甲臜染料的量增加，从而导致线粒体脱氢酶的活性增加。然后使用 ELISA 读数器对这种甲臜染料进行定量。

[1]. Mechanism of human telomerase inhibition by BIBR1532, a synthetic, non-nucleosidic drug candidate. J Biol Chem. 2002 May 3;277(18):15566-72.

[2]. Selective cytotoxicity and telomere damage in leukemia cells using the telomerase inhibitor BIBR1532. Blood. 2005 Feb 15;105(4):1742-9.

[3]. Pharmacological telomerase inhibition can sensitize drug-resistant and drug-sensitive cells to chemotherapeutic treatment. Mol Pharmacol. 2005 Sep;68(3):779-86.

[4]. Short telomeres and high telomerase activity in T-cell prolymphocytic leukemia. Leukemia. 2007 Dec;21(12):2456-62.

[5]. Targeted inhibition of telomerase activity combined with chemotherapy demonstrates synergy in eliminating ovarian cancer spheroid-forming cells. Gynecol Oncol. 2012 Mar;124(3):598-605.

2-[[3-(2-naphthalenyl)-1-oxobut-2-enyl]amino]benzoic acid is an amidobenzoic acid.

C21H17NO3

331.36

331.12

C, 76.12; H, 5.17; N, 4.23; O, 14.49

321674-73-1

9927531

White solid powder

1.3±0.1 g/cm3

600.6±48.0 °C at 760 mmHg

317.0±29.6 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.698

6.31

66.4

2

3

4

25

527

0

O=C(O)C1=CC=CC=C1NC(/C=C(C2=CC=C3C=CC=CC3=C2)\C)=O

PGFQXGLPJUCTOI-WYMLVPIESA-N

InChI=1S/C21H17NO3/c1-14(16-11-10-15-6-2-3-7-17(15)13-16)12-20(23)22-19-9-5-4-8-18(19)21(24)25/h2-13H,1H3,(H,22,23)(H,24,25)/b14-12+

2-[[(E)-3-naphthalen-2-ylbut-2-enoyl]amino]benzoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% Propylene glycol : 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。