BFH772

VEGFR2 (IC50 = 3 nM)

体外活性：BFH772 非常有效地靶向 VEGFR2 激酶，IC50 值为 3 nM，但对 FLK-1、FLT-1 和 FLT-4 的效力丧失了 500 倍。 BFH772 具有高度选择性，除了 VEGFR2 之外，它还靶向 B-RAF、RET 和 TIE-2，尽管效力至少低 40 倍。 BFH772 抑制配体诱导的 RET、PDGFR 和 KIT 激酶的自磷酸化，IC50 值范围为 30 至 160 nM。激酶检测：BFH772 具有高度选择性；除了以 3 nM IC50 抑制 VEGFR2 外，它还靶向 B-RAF、RET 和 TIE-2，尽管效力至少低 40 倍。 BFH772 对所有其他测试的酪氨酸特异性和丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶均无活性（IC50>10 μM；对于 cKIT >2 μM）。 BFH772 在 CHO 细胞中抑制 VEGFR2，IC50 为 4.6±0.6 nM。 BFH772 在 HUVEC 细胞中抑制 VEGFR2，IC50 为 3 nM。 BFH772 抑制配体诱导的 RET、PDGFR 和 KIT 激酶的自磷酸化，IC50 值范围为 30 至 160 nM。 BFH772 对 EGFR、ERBB2、INS-R 和 IGF-1R 激酶以及细胞质 BCR-ABL 激酶具有选择性（IC50 值 >0.5 μM）。 BFH772 的 IC50（<0.01 nM，n=2）表明它们在非常低的 nM 浓度下消除了 VEGF 诱导的增殖。细胞测定：将亚汇合的 HUVEC 在 96 孔板中一式三份孵育，基础培养基中含有 1.5% FCS 和恒定浓度的 VEGF (10 ng/mL)、bFGF (0.5 ng/mL) 或 FCS (5%)。化合物的存在或不存在。孵育24小时后，添加BrdUrd标记溶液，细胞再孵育24小时，然后固定、封闭并添加过氧化物酶标记的抗BrdUrd抗体。然后用分光光度法在 450 nm 处检测结合的抗体。

BFH772 在 0.3、1 和 3 mg/kg 的剂量反应曲线显示，即使在最低浓度下，这种萘-1-甲酰胺也能抑制 VEGF 诱导的组织重量和 TIE-2 水平，但仅在 1 mg/kg 时达到统计学显着性以上。此外，与对照相比，每天一次口服 3 mg/kg BFH772 可以有效抑制黑色素瘤生长（原发肿瘤为 54-90%，转移肿瘤为 71-96%）。

BFH772 具有极高的选择性；它除了以 3 nM IC50 抑制 VEGFR2 外，还以 B-RAF、RET 和 TIE-2 为目标，尽管效力至少低 40 倍。当针对所有其他酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶进行测试时，BFH772 没有活性（IC50>10 μM；对于 cKIT，>2 μM）。 BFH772 抑制 VEGFR2，在 CHO 细胞中的 IC50 为 4.6±0.6 nM。 BFH772 抑制 HUVEC 细胞中的 VEGFR2，IC50 为 3 nM。 BFH772 抑制配体诱导的 RET、PDGFR 和 KIT 激酶的自身磷酸化，IC50 值范围为 30 至 160 nM。细胞质 BCR-ABL 激酶以及 EGFR、ERBB2、INS-R 和 IGF-1R 激酶是 BFH772 选择性活性的唯一目标（IC50 值 >0.5 μM）。 BFH772 的 IC50（<0.01 nM，n=2）表明，在非常低的 nM 浓度下，它们消除了 VEGF 诱导的增殖。

使用包含 1.5% FCS 和恒定浓度的 VEGF (10 ng/mL)、bFGF (0.5 ng/mL) 或 FCS (5%) 的基础培养基，使用 96 孔板一式三份孵育亚汇合的 HUVEC。有或没有化合物。添加 BrdUrd 标记溶液后，将细胞再培养二十四小时。随后进行固定、封闭和添加过氧化物酶标记的抗 BrdUrd 抗体。然后，在 450 nm 处，使用分光光度法发现结合的抗体。

Mice: Groups of six female FVB mice, weighing between 18 and 20 g, are kept in the housing. Mice (n = 6 per group) have subcutaneous implants of porous chambers containing VEGF (2 μg/mL) in 0.5 mL of 0.8% w/v agar (containing heparin, 20 U/mL). The vascularized tissue that surrounds the chamber grows as a result of VEGF. The tissue's weight and TIE-2 levels can be used to quantify this dose-dependent response. The mice are given oral treatment once a day for four days, beginning 4-6 hours prior to chamber implantation, with compounds or a vehicle (PEG200 100%, 5 mL/kg). Twenty-four hours after the last dose, the animals are killed in order to measure the vascularized tissues. After determining the tissue weight, a lysate is made ready for TIE-2 ELISA analysis.
Rats: For compounds 4, 9, and 10, catheters are implanted in the jugular vein and femoral artery of female Sprague-Dawley rats, or in the femoral artery and vein of naïve female rats strain OFA for BFH772 and BAW2881. Throughout the experiment, animals are kept in single cages with unrestricted access to food and water, and they are given 96 hours to recuperate. Injections into the femoral vein of female OFA rats were given either 1 mg/kg of BFH772 dissolved in N-methyl pyrrolidone/polyethylene glycol200 (30:70, v/v) or 2.5 mg/kg of BAW2881 dissolved in ethanol/dimethylisosorbide/polyethylene glycol400/D5W (10/15/35/40 v/v). 5% glucose/water (v/v) is D5W. Oral administration: Female OFA rats are gavaged with a dose of 25 mg/kg for BAW2881 or 3 mg/kg for BFH772, which are prepared as a micronized suspension (dissolved/suspended in 0.5% carboxymethyl cellulose in distilled water) (n = 4 rats per group). Following an intravenous dose of 3 mg/kg for compounds 4, 9, and 10, formulated in ethanol/NMP/polyethylene glycol400/D5W (10/10/50/30) (n = 2 rats per group), or a suspension in 0.5% carboxymethyl cellulose in distilled water dosed at 50 mg/kg (n = 3 rats per group), were administered to female Sprague-Dawley rats at 8 weeks of age. Blood samples are drawn into heparinized tubes at the scheduled times, and HPLC/MS-MS is used to measure the compound content of the plasma.

[1]. A Novel Potent Oral Series of VEGFR2 Inhibitors Abrogate Tumor Growth by Inhibiting Angiogenesis. J Med Chem. 2016 Jan 14;59(1):132-46.

BFH772 is under investigation in clinical trial NCT01449591 (Safety, Tolerability and Efficacy of BFH772 in Rosacea Patients).

C23H16F3N3O3

439.39

439.114

62.87; H, 3.67; F, 12.97; N, 9.56; O, 10.92

890128-81-1

24756034

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

541.2±50.0 °C at 760 mmHg

281.1±30.1 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.656

4.37

84.3

2

8

5

32

635

0

O=C(C1C2C(=CC(=CC=2)OC2C=C(CO)N=CN=2)C=CC=1)NC1C=C(C(F)(F)F)C=CC=1

JNLSTLQFDDAULK-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H16F3N3O3/c24-23(25,26)15-4-2-5-16(10-15)29-22(31)20-6-1-3-14-9-18(7-8-19(14)20)32-21-11-17(12-30)27-13-28-21/h1-11,13,30H,12H2,(H,29,31)

6-[6-(hydroxymethyl)pyrimidin-4-yl]oxy-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]naphthalene-1-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。