Anaphase-promoting complex (APC)

CP5V（apcin-A-PEG5-VHL1）和VHL-CP5V-Cdc20复合物的结构是使用蛋白质数据库（PDB）结构作为模板生成的，其中VHL1和apcin-A片段的id分别为5T35和4N14。[1]
Cdc20小分子抑制剂apcin（APC抑制剂）和apcin-A，它们可以竞争性地占据Cdc20的D-box结合口袋，从而抑制Cdc20底物的泛素化，以及拮抗APC/C-Cdc20相互作用的小分子抑制剂TAME和proTAME。[1]

Apcin-A被用作Cdc20的靶向配体，VHL和CRBN结合部分VHL1和沙利度胺分别用于在Cdc20 PROTAC中募集VHL/VBC复合物和Celebron E3连接酶。一系列聚乙二醇（PEG）分子用于连接apcin-A和VHL1/沙利度胺。[1]
CP5V是基于具有中等结合亲和力的apcin-A设计的。先导优化方法可用于开发更有效的Cdc20抑制剂。Apcin和apcin-A具有相似的结合亲和力14，它们不直接与D-box结合位点周围的极性残基相互作用。apcin-P的低结合亲和力表明apcin（和apcin-A）中与Trp209相互作用的嘧啶环的芳香基团对于实现更强的亲和力14很重要。 [1]
我们决定利用 PROTAC 平台开发一种新型嵌合分子，以规避当前 Cdc20 小分子抑制剂所面临的挑战。基于 apcin-A 可以有效结合 Cdc20 且更易于修改的特点，我们使用 apcin-A 而不是 apcin 作为弹头来靶向 Cdc20。关于为 Cdc20 泛素化随后进行蛋白水解而招募的 E3 连接酶，我们考虑了 VHL/VBC (VHL-Elongin BC) 和 CRBN (Celebron)，它们都具有可靠的结合部分（分别为 VHL 配体 1 或 VHL1 和沙利度胺），已应用于多种 PROTAC 分子的设计16,17,23。为了寻找最佳化学接头以最大限度地形成稳定的 Cdc20-PROTAC-VHL/VBC 三元复合物，我们设计并测试了一系列不同长度的基于 PEG 的接头，例如 PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG6、PEG7 和 PEG9。

[1]. A novel strategy to block mitotic progression for targeted therapy. EBioMedicine. 2019 Oct 25. pii: S2352-3964(19)30677-2.

Background: Blockade of mitotic progression is an ideal approach to induce mitotic catastrophe that suppresses cancer cell expansion. Cdc20 is a critical mitotic factor governing anaphase initiation and the exit from mitosis through recruiting substrates to APC/C for degradation. Results from recent TCGA (The Cancer Genome Atlas) and pathological studies have demonstrated a pivotal oncogenic role for Cdc20-APC/C in tumor progression as well as drug resistance. Thus, deprivation of the mitotic role for Cdc20-APC/C by either inhibition of Cdc20-APC/C activity or elimination of Cdc20 protein via induced protein degradation emerges as an effective therapeutic strategy to control cancer. Methods: We designed a proteolysis targeting chimera, called CP5V, which comprises a Cdc20 ligand and VHL binding moiety bridged by a PEG5 linker that induces Cdc20 degradation. We characterized the effect of CP5V in destroying Cdc20, arresting mitosis, and inhibiting tumor progression by measuring protein degradation, 3D structure dynamics, cell cycle control, tumor cell killing and tumor inhibition using human breast cancer xenograft mouse model. Findings: Results from our study demonstrate that CP5V can specifically degrade Cdc20 by linking Cdc20 to the VHL/VBC complex for ubiquitination followed by proteasomal degradation. Induced degradation of Cdc20 by CP5V leads to significant inhibition of breast cancer cell proliferation and resensitization of Taxol-resistant cell lines. Results based on a human breast cancer xenograft mouse model show a significant role for CP5V in suppressing breast tumor progression. Interpretation: CP5V-mediated degradation of Cdc20 could be an effective therapeutic strategy for anti-mitotic therapy. [1]

C10H14CL3N5O2

342.609458446503

341.02

C, 35.06; H, 4.12; Cl, 31.04; N, 20.44; O, 9.34

1683617-62-0

1683535-53-6 (HCL)

127243466

Off-white to yellow solid powder

2.2

102

3

6

7

20

297

0

JQTSJVDIFMKETH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C10H14Cl3N5O2/c11-10(12,13)7(17-8-15-4-2-5-16-8)18-9(19)20-6-1-3-14/h2,4-5,7H,1,3,6,14H2,(H,18,19)(H,15,16,17)

3-aminopropyl N-[2,2,2-trichloro-1-(pyrimidin-2-ylamino)ethyl]carbamate

Apcin-A; Apcin A; 1683617-62-0; 3-Aminopropyl (2,2,2-trichloro-1-(pyrimidin-2-ylamino)ethyl)carbamate; starbld0000888; SCHEMBL22567019;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~291.9 mM

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.30 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.30 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。