Natural alkaloid; anti-inflammatory; anti-parasitic

四氢黄连碱（THC）显著抑制LPS诱导的TNF-α、白细胞介素-6（IL-6）和一氧化氮（NO）的产生。THC通过下调LPS诱导的IL-6和TNF-αmRNA表达来抑制TNF-α和IL-6的产生。此外，它以浓度依赖的方式减弱了p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）的磷酸化和细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的磷酸化作用，以及核因子κB（NF-κB）的表达。综上所述，我们的数据表明，THC是一种活性抗炎成分，通过抑制TNF-α、IL-6和NO的产生，可能是通过下调NF-κB活化、磷酸化ERK1/2和磷酸化p38MAPK信号通路[1]。

已知延胡索的提取物或成分具有许多药理活性。四氢胞苷（THC）是延胡索中的一种原小檗碱化合物，被发现在不同的急性或慢性炎症模型动物中具有强效的抗炎作用。在角叉菜胶诱导的足跖水肿试验和二甲苯诱导的耳跖水肿试验中，THC（i.p.）预处理分别抑制了足跖和耳跖水肿。在脂多糖（LPS）诱导的全身炎症模型中，THC显著抑制了小鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）的释放。[1]

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过量饮酒可导致胃溃疡，本研究旨在检测四氢黄连碱（THC）在乙醇诱导的小鼠胃溃疡模型中的保护作用。用75%乙醇（0.5ml/100g）处理的禁食小鼠在不同的实验组中用THC（10或20mg/kg，ip）、西咪替丁（100mg/kg，ip）或生理盐水预处理3天，并在摄入乙醇4小时后对动物实施安乐死。考虑了大体和显微镜下的病变、免疫和生化参数。结果显示，乙醇组可诱导胃损伤，改善一氧化氮（NO）水平，增加促炎细胞因子（TNF-α和IL-6）水平和髓过氧化物酶（MPO）活性，以及核因子-κB（NF-κB）的表达。与乙醇组相比，10和20mg/kg体重的THC预处理显著减轻了胃损伤。这些结果表明，THC的胃保护活性归因于减少NO产生和调节促炎细胞因子，抑制中性粒细胞积聚和NF-κB表达[2]。

胃组织髓过氧化物酶测定[2]
髓过氧化物酶是一种主要存在于中性粒细胞嗜天颗粒中的酶，已被广泛用作粒细胞浸润各种组织（包括胃肠道）的生化标志物（Costa等人，2013，Krawisz等人，1984）。通过向含有0.2ml匀浆的4ml缓冲液中加入0.2ml邻联苯胺盐酸盐和0.0005%过氧化氢，使用MPO活性测量试剂盒测定MPO活性。通过测量460nm处由于H2O2产生的氧化还原中间体氧化的荧光产物导致的吸光度增加，在室温下测定MPO活性。MPO活性以每克组织的单位表示。

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胃组织中的细胞因子评估[2]
根据制造商的说明，使用ELISA试剂盒评估胃组织中IL-6和TNF-α的细胞因子水平。将匀浆上清液或细胞因子标准品（100μl）分别装入每个孔中，然后加入生物素偶联的二抗。为了获得显色反应，加入链霉抗生物素蛋白-HRP和底物溶液。用ELISA读数器在450nm处测量吸光度。使用连续稀释的重组IL-6和TNF-α在每个测定板上绘制标准曲线。结果以pg/mg组织表示。

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胃组织中NO水平的测定[2]
使用Griess试剂（Green等人，1982）将胃组织中的一氧化氮水平评估为总硝酸盐/亚硝酸盐，并根据NO试剂盒说明测量操作过程。简而言之，将50μl组织上清液加入50μl Griess试剂[0.1%N-（1-萘基）乙二胺二盐酸盐、1%磺胺和2.5%H3PO4]中并混合。在室温下孵育10分钟后，在540nm处测量吸光度。结果以μmol/g蛋白质表示。

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血清中的细胞因子评估[2]
根据制造商的说明，使用ELISA试剂盒对大鼠进行酶联免疫吸附试验，分析血清中细胞因子（IL-6和TNF-α）的水平。结果以pg/ml血清表示。

Ethanol-induced gastric mucosal damage[2]
Mice were randomly divided into five experimental groups, each containing ten animals. The normal and ulcer control groups received vehicle (0.9% saline) throughout the course of the experiments. The prevention groups received (ip) different doses of THC (10 and 20 mg/kg, dissolved in 0.9% saline) and cimetidine (100 mg/kg, reference drug, dissolved in 0.9% saline) respectively for a period of 3 days. After fasting for 24 h prior to the experiment, mice were fed orally with 75% ethanol (0.5 ml/100 g body weight) to induce the acute ulcer, while the normal group received water only (Mei et al., 2012). Four hours after induction, blood samples were collected from the retro-orbital plexus of each animal and were then centrifuged for 10 min at 2500 g to obtain clear sera which were stored at − 80 °C before use (Choi et al., 2010). After the mice were euthanized, the stomachs were rapidly removed, opened along the greater curvature and rinsed with ice-cold saline to remove the gastric contents and blood clots in order to assess the extent of gastric damage. Thereafter, each stomach was dichotomised, with one moiety of stomach immersed in 10% formaldehyde for histological evaluation and gastric tissue from the other moiety stored at − 80 °C for biochemical determinations.[2]

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Determination of gastric ulcer index[2]
The degree of gastric mucosal damage was evaluated from digital pictures, and rated for gross pathology according to the ulcer score scales as previously described (Salga et al., 2012). The lesions were scored as follows: 0: no lesions; 0.5: slight hyperemia or ≤ 5 petechiae; 1: ≤ 5 erosions ≤ 5 mm in length; 1.5: ≤ 5 erosions ≤ 5 mm in length and many petechiae; 2: 6–10 erosions ≤ 5 mm in length; 2.5: 1–5 erosions > 5 mm in length; 3: 5–10 erosions > 5 mm in length; 3.5: > 10 erosions > 5 mm in length; 4: 1–3 erosions ≤ 5 mm in length and 0.5–1 mm in width; 4.5: 4–5 erosions ≤ 5 mm in length and 0.5–1 mm in width; 5: 1–3 erosions > 5 mm in length and 0.5–1 mm in width; 6: 4 or 5 grade 5 lesions; and 7: ≥ 6 grade 5 lesions; 8: complete lesion of the mucosa with hemorrhage.. The sum of the total scores was divided by the number of animals to obtain the mean ulcer index for each group.

[1]. Anti-inflammatory effect of tetrahydrocoptisine from Corydalis impatiens is a function of possible inhibition of TNF-α, IL-6 and NO production in lipopolysaccharide-stimulated peritoneal macrophages through inhibiting NF-κB activation and MAP.

[2]. Protective effect of tetrahydrocoptisine against ethanol-induced gastric ulcer in mice. Toxicol Appl Pharmacol. 2013 Oct 1;272(1):21-9.

C19H18CLNO4

359.80

359.092

96087-21-7

(±)-Stylopine;4312-32-7;(-)-Stylopine;84-39-9; 84-39-9 (S-isomer); 4312-32-7 (racemic); 7461-02-1 (racemic)

131864060

Typically exists as white to off-white solids at room temperature

Corydalis tubers

40.2Ų

1

5

0

25

502

0

Cl.O1COC2C1=CC1CCN3CC4C(CC3C=1C=2)=CC=C1C=4OCO1

WZUQSTMUNWBERD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H17NO4.ClH/c1-2-16-19(24-10-21-16)14-8-20-4-3-12-6-17-18(23-9-22-17)7-13(12)15(20)5-11(1)14;/h1-2,6-7,15H,3-5,8-10H2;1H

5,7,17,19-tetraoxa-13-azahexacyclo[11.11.0.02,10.04,8.015,23.016,20]tetracosa-2,4(8),9,15(23),16(20),21-hexaene;hydrochloride

Stylopine hydrochloride; 96087-21-7; 5,7,17,19-tetraoxa-13-azahexacyclo[11.11.0.02,10.04,8.015,23.016,20]tetracosa-2,4(8),9,15(23),16(20),21-hexaene;hydrochloride; ( inverted exclamation markA)-Stylopine (hydrochloride); 6,7,12b,13-Tetrahydro-4H-[1,3]dioxolo[4',5':7,8]isoquinolino[3,2-a][1,3]dioxolo[4,5-g]isoquinoline hydrochloride; DL-Stylopine (hydrochloride); HY-N0924A; AKOS040758819;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 2 mg/mL (5.56 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。