Hoechst 33342 analog trihydrochloride

别名: Hoechst 33342 analog trihydrochloride Hoechst 33342类似物三盐酸盐
目录号: V51976 纯度: ≥98%
Hoechst 33342 类似物三盐酸盐是 Hoechst 系列的标记染料。
Hoechst 33342 analog trihydrochloride CAS号: 159277-19-7
产品类别: DNA Stain
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格
500mg
1g
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产品描述
Hoechst 33342 类似物三盐酸盐是 Hoechst 系列的标记染料。 Hoechst 系列是活细胞核标记染料。 Hoechst 通过与 DNA 双链中的小沟结合来结合核酸。 Hoechst 更喜欢与富含 A/T 的 DNA 链结合。同时,富含A/T的双链DNA显着增强荧光强度。 Hoechst 可以穿过细胞膜并与活细胞或固定细胞结合。 Hoechst 染料的荧光强度随着溶液 pH 值的增加而增加。储藏方法:避光保存。
生物活性&实验参考方法
靶点
Dye reagent;DNA Stain
体外研究 (In Vitro)
1.Hoechst工作液的制备
1.1:Hoechst母液/储备液的制备。使用DMSO/二甲基亚砜制备1 mg/mL Hoechst储备液。
*注:分装后,Hoechst/储备液应在-4°C或-20°C避光储存。
1.2:制备工作液:用PBS或无血清细胞培养基将储备溶液稀释至10μg/mL的Hoechst工作液。
*注意:使用前,请确保Hoechst工作溶液的浓度适合您的实验,现配现用。
2.细胞染色(悬浮细胞)
2.1:离心细胞,加入PBS,然后洗涤两次,每次5分钟,或直到细胞密度达到1×106/mL。
2.2:加入1 mL Hoechst工作溶液,室温孵育/静置3–10分钟。
2.3:以400 g离心3-4分钟,然后弃上清液。
2.4:用PBS洗涤细胞两次,每次5分钟。
2.5:将细胞重新悬浮在1mL PBS或无血清培养基中,并使用流式细胞仪或荧光显微镜进行观察。
3.细胞染色(贴壁细胞)
3.1:将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
3.2:从培养基上取下盖玻片,取出多余的培养基。
3.3:加入100μL染料工作液,轻轻摇晃至完全覆盖细胞,孵育3-10分钟。
3.4:取出染料工作液,用培养基洗涤2-3次,每次5分钟,用荧光显微镜或流式细胞仪观察。
注意事项
1. 请根据实际情况调整 Hoechst 工作液浓度,现配现用。
2. 本产品仅限于专业科研人员的科研用,不能用于临床诊断、治疗、食品或药品。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
酶活实验
Hoechst 33342与小凹槽中富含腺嘌呤-胸腺嘧啶的DNA区域结合。与DNA结合后,荧光大大增加。该方案描述了使用Hoechst 33342标记培养物中生长的细胞的核DNA。Hoechst 33342也可用于通过用Hoechst 333 42代替DAPI对固定细胞进行染色。[1]
Hoechst 33342也可用于通过在使用DAPI标记核DNA(Chazotte 2011a)中描述的方案中用Hoechst 333 42代替DAPI来染色固定细胞。内源性细胞分子(如还原形式的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或黄素腺嘌呤二核苷酸)的自身荧光可通过降低信噪比干扰成像。当探针和自荧光分子的激发和/或发射波长相似时,例如,经常具有<500nm的激发波长,特别是在紫外波长时,就会发生这种情况。通过仔细选择所用的激发和发射波长,用还原剂(例如1%硼氢化钠[NaBH4]溶液处理固定细胞20分钟),以及将实验图像与未标记的对照载玻片进行比较,可以减少自身荧光。避免用戊二醛固定,因为它会增加细胞自发荧光的干扰,最常见的是波长<500 nm。[1]
该方案假设感兴趣的细胞在玻璃显微镜盖玻片上生长,盖玻片浸入含有培养基的小培养皿中。通常,标记条件因细胞类型而异,可能有必要针对特定用途更改方案。要安装使用此处描述的技术标记的细胞,请参见将活细胞安装到显微镜载玻片上(Chazotte 2011b)。[3] <小时> 有许多荧光染色可用于标记DNA,并允许容易地观察间期细胞中的细胞核和有丝分裂细胞中的染色体。Hoechst 33342的一个优点是它是膜渗透性的,因此可以对活细胞进行染色。Hoechst 33342与小凹槽中富含腺嘌呤-胸腺嘧啶的DNA区域结合。与DNA结合后,荧光大大增加。该方案描述了使用Hoechst 33342标记培养物中生长的细胞的核DNA。
细胞实验
方法[1]
在Protocol执行期间,任何时候都不要让细胞变干
1.将Hoechst储备溶液在H2O中以1:100稀释,用于标记
2.从盖玻片上生长的细胞中吸出细胞培养基。用PBS+冲洗细胞三次
3.在室温下将细胞在Hoechst标记溶液(来自步骤1)中孵育10-30分钟
4.抽吸标签溶液。在PBS+中冲洗细胞三次
5.如在显微镜载玻片上安装活细胞(Chazotte 2011b)[3]中所述安装盖玻片[3]
6.对细胞成像(对于Hoechst 33342,其λex~353 nm,λem~483 nm)
参考文献
[1]. Chazotte B. Labeling nuclear DNA with hoechst 33342. Cold Spring Harb Protoc. 2011 Jan 1;2011(1):pdb.prot5557.
[2]. Chazotte B (2011a) Labeling nuclear DNA using DAPI. Cold Spring Harb Protoc doi:10.1101/pdb.prot5556.
[3]. Chazotte B (2011b) Mounting live cells onto microscope slides. Cold Spring Harb Protoc doi:10.1101/pdb.prot5554.
其他信息
Cell Staining Example 1:
Hoechst 33342 may be utilized for staining nuclei with blue fluorescence.
Cell Staining Example 2:
Hoechst 33342 may be utilized for staining nuclei with blue fluorescence to detect apoptosis.
1. Stain cells with Hoechst 33342 (10 min).
2. Observe with a fluorescence microscope (imaging).
Cell Staining Example 3:
Hoechst 33342 may be utilized for labelling chromatin with blue fluorescence.
1. Chromatin is counterstained briefly with Hoechst 33342 (5 µg/mL) before imaging.
2. Observe with a confocal microscope (imaging).
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C32H37N7CL2.3[HCL]
分子量
699.97
精确质量
697.179
CAS号
159277-19-7
PubChem CID
197365
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
沸点
841.2ºC at 760mmHg
蒸汽压
1.59E-28mmHg at 25°C
LogP
8.726
tPSA
67.08
氢键供体(HBD)数目
5
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
11
重原子数目
44
分子复杂度/Complexity
784
定义原子立体中心数目
0
SMILES
Cl.Cl.Cl.ClCCN(C1C=CC(CCCC2=NC3C=CC(C4=NC5C=CC(N6CCN(C)CC6)=CC=5N4)=CC=3N2)=CC=1)CCCl
InChi Key
PLUDBJRFRHMTGA-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C32H37Cl2N7.3ClH/c1-39-17-19-41(20-18-39)26-10-12-28-30(22-26)38-32(37-28)24-7-11-27-29(21-24)36-31(35-27)4-2-3-23-5-8-25(9-6-23)40(15-13-33)16-14-34;;;/h5-12,21-22H,2-4,13-20H2,1H3,(H,35,36)(H,37,38);3*1H
化学名
N,N-bis(2-chloroethyl)-4-[3-[6-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1H-benzimidazol-2-yl]-1H-benzimidazol-2-yl]propyl]aniline;trihydrochloride
别名
Hoechst 33342 analog trihydrochloride
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.4286 mL 7.1432 mL 14.2863 mL
5 mM 0.2857 mL 1.4286 mL 2.8573 mL
10 mM 0.1429 mL 0.7143 mL 1.4286 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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