AOH1996

Proliferating cell nuclear antigen (PCNA)

AOH1996选择性杀死癌症细胞。AOH1996增强了PCNA与RNA聚合酶II最大亚基RPB1之间的相互作用，并将PCNA从主动转录的染色质区域解离，同时以转录依赖的方式诱导DNA双链断裂。RPB1与PCNA相互作用的减弱，通过RPB1的PCNA结合区的点突变，赋予对AOH1996的抗性[2]。

AOH1996口服且代谢稳定，可作为单一疗法或联合疗法抑制肿瘤生长，但不会产生明显的副作用。转录复制冲突解决抑制剂可能为利用这种癌症选择性脆弱性提供一种新的独特治疗途径[2]。

PCNA-AOH1996相互作用的热变性分析[2]
使用BioRad CFX Connect实时PCR检测系统进行测定。将蛋白质（PCNA）、抑制剂（AOH1996和AOH1160–1LE）和200x SYPRO橙色染料稀释到磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。重组PCNA的最终浓度为9μM，最终化合物浓度为0、10或30μM。将样品板从25°C加热到95°C，加热增量为0.5°C/分钟。在470–505/540–700 nm的激发/发射范围内测量荧光强度

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肝微粒体中的化合物代谢[2]
AOH1160类似物在不存在或存在NADPH的情况下与人肝微粒体在37°C下孵育。然后在不同的孵育时间后取反应混合物的等分试样，并如前所述通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定化合物的浓度。

细胞周期分析[2]
将细胞以1×105/ml的速度接种在6孔板中。用化合物处理后，将细胞固定在60%乙醇中，并用碘化丙啶（PI）染色。通过流式细胞术测量细胞内的PI荧光强度，并使用FlowJo程序分析数据

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细胞生长和凋亡测定[2]
根据细胞系，将细胞以5×103/ml或3×104/ml接种到96孔板中，并在允许附着过夜后用不同浓度的AOH1996处理72小时。根据制造商的说明，通过CellTiter-Glo测定法测量细胞生长。或者，通过IncuCyte S3活细胞分析系统分析细胞生长，该系统通过周期性成像测量细胞融合。美国国家癌症研究所（NCI）使用含有磺基罗丹明B（SRB）的标准5-糖测定法检查了AOH1996对NCI60细胞系的影响。有关测定的详细信息，请访问(https://dtp.cancer.gov/discovery_development/nci-60/methodology.htm). 通过NCI计算50%生长抑制浓度（GI50）。 在室载玻片上以1×105/ml的接种密度测量细胞凋亡。用500nM AOH1996处理24小时后，使用含有TMR红原位细胞死亡检测试剂盒的末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）测定法固定并分析细胞。

Pharmacokinetic (PK) study in animals[2]
An oral dosing solution was prepared by dissolving AOH1996 (40 mg) in a mixture of Kolliphor EL (840 mg) and Poloxamer P124 (120 mg). For the mouse study, blood samples were collected from ES1e/SCID mice (3 male and 3 female) per dosing group by cardiac puncture at 10, 20, and 30 min and 1, 2, 4, 6, and 24 h after dosing. For the dog study, blood samples were collected from 3 male beagle dogs per dosing group by venipuncture of peripheral veins at 5, 15, and 30 min and 1, 2, 4, 8, 12, and 24 h after dosing. Following removal of blood cells, plasma concentration of AOH1996 was determined by LC-MS/MS as described.17 Oral PK was determined using standard non-compartmental methods.

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In vivo tumor model[2]
Compounds were tested in the ES1e/SCID mice, originally provided by Dr. Philip M. Potter of the St. Jude Children’s Research Hospital.49 SK-N-BE(2)c and SK-N-AS neuroblastoma cells were suspended in Matrigel at 5 × 107/ml and 4 × 107/ml, respectively, after being harvested and washed twice in PBS. The cell suspension (0.1 mL) was subcutaneously injected into the right flank of each ES1e/SCID mouse. AOH1996 was dosed orally. CPT-11 was given by intraperitoneal injection. Tumor size and animal weight were measured weekly. At the end of the experiment, tumors were isolated from sacrificed mice and analyzed by immunohistochemistry staining with antibodies specific for phosphor-Chk1 and γH2A.X.

[1]. Pharmacological targeting of transcription-replication conflict leads to anti-cancer efficacy with minimal side effects in preclinical models[J]. Cancer Research, 2021, 81(13_Supplement): 1269-1269.

[2]. Small molecule targeting of transcription-replication conflict for selective chemotherapy. Cell Chem Biol . 2023 Oct 19;30(10):1235-1247.e6. doi: 10.1016/j.chembiol.2023.07.001.

AOH1996 is a secondary carboxamide resulting from the formal condensation of the carboxy group of N-(naphthalen-1-ylcarbonyl)glycine with the amino group of 2-(3-methoxyphenoxy)aniline. It is a first-in-class small molecule inhibitor of PCNA, a protein essential for DNA replication and repair within tumours. It has a role as an antineoplastic agent, an apoptosis inducer and a PCNA inhibitor. It is an aromatic ether, a naphthalenecarboxamide, a monomethoxybenzene, a secondary carboxamide and a diether.

C26H22N2O4

426.463886737823

426.16

C, 73.23; H, 5.20; N, 6.57; O, 15.01

2089314-64-5

126718388

Solid powder

1.269±0.06 g/cm3(Predicted)

703.9±50.0 °C(Predicted)

4.9

76.7Ų

2

4

7

32

627

0

O(C1C=CC=C(C=1)OC)C1=CC=CC=C1NC(CNC(C1=CC=CC2C=CC=CC1=2)=O)=O

HDMONPHKMIZXDH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H22N2O4/c1-31-19-10-7-11-20(16-19)32-24-15-5-4-14-23(24)28-25(29)17-27-26(30)22-13-6-9-18-8-2-3-12-21(18)22/h2-16H,17H2,1H3,(H,27,30)(H,28,29)

N-[2-[2-(3-methoxyphenoxy)anilino]-2-oxoethyl]naphthalene-1-carboxamide

NSC789796;NSC 789796;NSC-789796;AOH1996;AOH-1996;AOH 1996;

2934.99.9005

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: > 10 mM

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。